优质课动物细胞培养和核移植技术课件

动物细胞工程(gōngchéng)常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植(yízhí)、动物细胞融合、生产单克隆抗体等复习(fùxí)：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。第一页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术2003年４月７日下午，

12岁的四川简阳少年小林放

学路上捡了些鞭炮，并把里

面的火药抖出来，蹲在地上

将其点燃，导致面部、四肢

不幸被严重烧伤并感染，在

当地医院治疗半月后，于4月

22日转入(zhuǎnrù)武警四川消防总队

医院烧伤整形科。为了挽救儿子的生命，小林的爸爸、妈妈向医生恳求：“割我们的皮给儿子吧！”烧伤整形科主任魏平经不起这份

亲情的重托，最终“妥协”了：同意进行这种国内

极其罕见的亲体皮肤移植手术。阅读(yuèdú)资料儿子捡鞭炮严重烧伤感染(gǎnrǎn)，父割千块皮肤第二页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术思考(sīkǎo)一下！1、小林在皮肤烧伤之后，很容易(róngyì)得病，为什么？2、皮肤在我们人体当中是第几道防线(fángxiàn)，其他几道防线(fángxiàn)是什么？3、选取植皮时，理论上选择谁的皮肤最好？为什么？4、自身的健康皮肤是有限的，能不能通过其他途径获得自身的皮肤？第三页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术一、动物(dòngwù)细胞培养过程阅读“动物(dòngwù)细胞培养过程”并思考：1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？2、为什么要对取出的动物组织(zǔzhī)进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程第四页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术一、动物(dòngwù)细胞培养1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们(tāmen)分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理(yuánlǐ)：细胞增殖如何进行动物细胞培养?第五页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术胰蛋白酶(yídànbáiméi)或胶原蛋白酶.培养(péiyǎng)条件动物(dòngwù)组织分散成

单个细胞制成细胞悬液培养胰蛋白酶胶原蛋白酶原理：细胞增殖（有丝分裂）结果：细胞群，细胞产物原代培养传代培养2、动物细胞培养过程动物胚胎细胞或幼龄动物的器官组织剪碎第六页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术动物细胞生长(shēngzhǎng)特点：细胞贴壁：

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触(jiēchù)时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触(jiēchù)抑制。

第七页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时(cǐshí)细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。接触抑制动物细胞生长(shēngzhǎng)特性第八页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：原代培养的细胞(xìbāo)出现接触抑制后，贴满瓶壁的细胞(xìbāo)需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞(xìbāo)增殖。这样即为传代培养。第九页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术1、无菌、无毒消毒、灭菌抗生素定期更换培养液（清除代谢废物）2、营养(yíngyǎng)合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素

（血清、血浆）3、温度和pH4、气体95%空气，5%CO2培养(péiyǎng)条件第十页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术.动物细胞培养技术(jìshù)的实际应用1、大量生产细胞或产物。如：病毒疫苗干扰素

单克隆抗体胰岛素2、给基因工程提供受体细胞。3、检测(jiǎncè)有毒物质及毒性。4、用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。第十一页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术二、动物体细胞核移植技术(jìshù)和克隆动物克隆(kèlónɡ)就是无性繁殖，具体地说，是指一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。a.分子(fēnzǐ)水平上：b.细胞水平上：c.个体水平上：1.什么是克隆？一般指DNA克隆。指一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。指基因型完全相同的两个或一个群体。第十二页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术2、克隆(kèlónɡ)动物能否用类似植物组织培养的方法获得？为什么？目前(mùqián)不能。因为动物细胞的全能性随着分化(fēnhuà)程度的提高逐渐受到限制。目前，用动物体细胞克隆的动物，实际上是通过核移植来实现的。

第十三页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术将动物的一个细胞(xìbāo)的＿＿＿，移入一个已经去掉＿＿＿的＿＿细胞中，使其＿＿并发育成一个新的＿＿，这个新的胚胎最终发育为动物个体。分类

胚胎细胞核移植、体细胞核移植细胞核细胞核卵母重组(zhònɡzǔ)胚胎(pēitāi)核移植技术第十四页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛克隆牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎(pēitāi)移植体细胞核移植过程(guòchéng)

（体细胞克隆动物）第十五页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术体细胞细胞培养体细胞卵巢(luǎncháo)卵母细胞（MⅡ中期：）去核去核的卵母细胞注入(zhùrù)重组(zhònɡzǔ)细胞构建重组胚胎胚胎移植将胚胎移入受体（代孕）母体生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛总结：体细胞核移植过程（供核）（供质）据上图思考下列问题：第十六页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术整个过程(guòchéng)用了哪些技术？细胞培养、核移植、胚胎移植新生牛的性别、基因？与供体相同繁殖方式？无性繁殖原理？动物细胞核的全能性体细胞核移植技术(jìshù)第十七页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须(bìxū)先去掉受体卵母细胞的核？

为使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自有重要利用(lìyòng)价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。2.实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用(cǎiyòng)卵母细胞的原因？体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。第十八页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物(dòngwù)，是对体细胞供体动物(dòngwù)进行了100%的复制吗？为什么？不是的，因为：①克隆动物绝大部分DNA来自(láizì)于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的DNA是来自(láizì)于受体卵母细胞。所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是供核动物完全相同的复制。

②生物的性状不仅(bùjǐn)与遗传物质有关，还受环境的影响。

4、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞第十九页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术①加速家畜遗传(yíchuán)改良进程，促进优良畜群繁育②保护濒危(bīnwēi)物种，增加存活数量③克隆动物作为生物(shēngwù)反应器，生产医用蛋白④可以作为异种移植的供体4、应用前景：⑤可以用于组织器官的移植第二十页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术5.体细胞核移植技术(jìshù)的应用前景第二十一页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术5、存在(cúnzài)问题：①成功率低②克隆动物(dòngwù)存在健康问题③克隆动物食品的安全性问题存有争议第二十二页，共二十三页。优质课动物细胞培养和核移植技术内容(nèiróng)总结动物细胞工程常用的技术手段：。”烧伤整形科主任