植物超氧阴离子自由基含量的测定LT

植物超氧阴离子自由基含量的测定一、实验目的了解实验原理，掌握实验技术二、实验原理3-超氧阴离子（。二）N03-

0毘++H=NO2+H2O2+H2O其中NO2进一步反应生成对氨基磺酸、反应后再生成 a苯胺，最后生成红色的偶氮化合物其中，偶氮化合物在520nm到560nm下有吸收峰，本次实验在530nm下进行比色。三、实验材料与仪器植物材料试剂NaN-AR100胺。仪器可见光分光光度计，型号V-1100D四、实验方法121234567N2-标准液（50卩g/）蒸馏水对氨基酸苯磺酸a苯酸

a苯酸；PBS;盐酸羟胺；对氨基苯磺酸； a苯00.20.40.81.21.62.02.01.81.61.20.80.402.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.0然后置于30C培养箱中保温30min显色反应测定53N530值为纵坐标，绘制标准曲线。二的提取1.0g。加入少量PH7.8PBS5ml。10000rpm离心10min。之后取上清液备用。注：空白对照直接用上清液显色测本底值

NO?含量。*3组织中°二测定2-NO的产生2-标样调零

O'2.02.0

PBS1.52.0o25C20mino2-（2）NO2-

盐酸羟胺0.50上述反应液对氨基苯磺酸上述反应液对氨基苯磺酸a苯胺2.02.02.02.02.02.030min30°C恒温箱中保温4.°f含量计算从标准曲线中计算出测定液相对应的离子的含量。。匚含量=2X Vt

浓度，并换算成超氧阴离子的浓度 （X）,再算出超氧阴注：Vt为稀释倍数；Vs为显色时提取液体积；出的N°2的浓度。五、结果与计算

X为从标准曲线上计算

y=0.10306x+0.01029（其中x为NO?溶液浓度，y为反应溶每管浓度（卩g0吸光值标准曲线如下图:

*10 0.1

0.211 0.445

68100.652 0.854 1.005V=0,10306)(+0,01029.*0.80 1012A530下的吸光值）超氧阴离子含量计算小麦叶片测得的实验数据处理本底值试验值A处理本底值试验值A5300.5070.718（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得x（N°浓度）：-2处理本底值试验值X（NO-2ug4.8196.867将Xa=4.819、Xb=6.867,Vt=5ml,n=2,FW=1.094g,Vs=2ml分别带入公式2-.含量（ug FWg-1）=2X-Vtn/gFWVs中求出处理°•含量如下:本底值试验值°的含量（-.ug -1gFw）44.04962.7692.2荠菜叶片测得的实验数据（1）测得的吸光值数据：处理本底值试验值A530（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得0.4690.685x（N°浓度）：-2处理X（N°浓度ug-2本底值4.451试验值6.546将Xa=4.451、Xb=6.546,Vt=5ml,n=2,FW=1.023g,Vs=2ml分别带入公式O

含量（ug

FW）O■=2X Vtn/gFWVs

2-. -1处理 本底值 试验值ug O'的含量（gFw） 43.509 63.988ug 六、结果分析-1 -1 62.769uggFW44.049uggFW;荠菜叶片63.988uggFW-1 -1 **去除本底所含有的过后，以小麦为试验材料的试验管 。了的含量为18.675（⑷-gFw）,以荠菜为试验材料的试验管°$19.939（冯-gFw）氧化态产物因无法被消耗而积累。