高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中苦杏仁苷的含量

高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中苦杏仁苷的含量〔〕:

摘要：目的讨论连花清瘟胶囊中苦杏仁苷的高效液相色谱测定方法，为连花清瘟胶囊的质量控制提供参考。方法采用高效液相色谱法，色谱柱采用Diamonsil-C18色谱柱〔4.6mmx250mm，5.0m〕，流动相为：乙腈:0.1%磷酸溶液=5:95，检测波长为210nm，柱温为35℃，流速为1.0mL/min。结果①连花清瘟胶囊中苦杏仁苷的线性关系方程为：A=0.0893x102C+0.0321x102，苦杏仁苷在35.17~215.85g/mL〔r=0.9998〕范围内线性关系良好；②苦杏仁苷的平均加样回收率为99.76%，99.75%，99.83%；③检测限为

0.3517g/mL。结论高效液相色谱法用于对连花清瘟胶囊中有效成分苦杏仁苷含量进展测定，方法操作简单，对胶囊测定方法的重复性好，准确度高，为连花清瘟胶囊的质量控制提供了科学的参考数据。

关键词：高效液相色谱法；连花清瘟胶囊；苦杏仁苷；线性回归；检测限

陈蕾,曾晓红.高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中苦杏仁苷的含量[J].世界最新医学信息文摘

DeterminationofAmygdalininLianhuaQingwenCapsulesbyHPLC

CHENLei1,ZENGXiao-hong2

〔1.XinjiangAutonomousRegionMedicalInstitutionDrugPurchasingCenter,Urumqi,Xinjiang,China;2.TheFirstPeople"sHospitalofUrumqi,Urumqi,

Xinjiang,China)

ABSTRACT:

ObjectiveToexploretheHPLCmethodforthedeterminationofAmygdalininLianhuaQingwencapsulesandprovidereferenceforqualitycontrolofLianhuaQingwencapsules.MethodsHPLCwasused.ThechromatographiccolumnwasDiamonsil-C18column(4.6mmx250mm,5.0m).Themobilephasewasacetonitrile:0.1%phosphoricacidsolution=5:95.Thedetectionwavelengthwas210nmandthecolumntemperaturewas35°C,andflowratewas1.0mL/min.Results①ThelinearequationofamygdalininLianhuaQingwencapsuleswas:A=0.0893x102C+0.0321x102.Thelinearrelationshipofamygdalinwasgoodintherangeof35.17to215.85g/mL(r=0.9998);②Theaveragerecoveryofglycosideswas99.76%,99.75%and99.83%;③Thedetectionlimitwas0.3517g/mL.ConclusionHPLCmethodwasusedtodeterminethecontentofAmygdalininLianhuaQingwencapsules,themethodissimple,therepeatabilityofthecapsulemeasurementmethodisgood,andtheaccuracyishigh.ItcanprovideSscientificreferencedataforthequalitycontrolforLianhuaQingwencapsules.

KEYWORDS:Highperformanceliquidchromatography;LianhuaQingwencapsules;Amygdalin;Linearregression;Detectionlimit

0引言

连花清瘟胶囊的中药主要成分有金银花、连翘、炒苦杏仁、炙麻黄、石膏、板蓝根、鱼腥草、大黄、广藿香、绵马贯众、薄荷脑、红景天以及甘草【1】，功能主治为清瘟解毒、宣肺泄热，主要用于治疗流行性感冒属热毒袭肺证，症见发热或者高热，恶寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，头痛，咽干咽痛，舌偏红，苔黄或黄腻等[2-3]，连花清瘟胶囊在抗菌、镇痛、退热、抗炎、止咳、化痰和调节免疫功能的疗效明显，增强了机体的抗病康复才能【4】。连花清瘟胶囊中发挥降气止咳平喘作用的为炒苦杏仁，同时还有润肠通便的效果，炒苦杏仁中苦杏仁苷是降气止咳平喘的药效成分[5-6]。目前，以苦杏仁苷作为连花清瘟胶囊的质量控制的研究报道较少，在本次研究中，我们采用了炒苦杏仁中的有效成分苦杏仁苷成为作为高效液相色谱法的测定对象，旨在更好地为连花清瘟胶囊质量进展控制提供数据参考。

1仪器与试药

1.1试验仪器

美国Waters717高效液相色谱仪器〔装备有恒温自动进样系统、Waters717色谱工作站〕，电子分析天平〔美国梅特勒公司消费，精细度为0.0001g〕，德国Sartorius公司消费的电子天平〔精细度为0.1g〕，美国Molecular公司消费的1260DADVL型超纯水仪器，天津奥特赛恩斯公司消费的

SA7140BT超声波清洗仪器〔功率为300W，频率为40kHz〕。

1.2试验试药

连花清瘟胶囊〔石家庄以岭药业股份，消费批号分别为：A170512043、A170623023、A170715018〕规格为0.35g/粒，苦杏仁苷对照品〔中国药品生物制品鉴定所，批号为110725-20221225，纯度为93.60%〕【7】，乙腈、甲醇、水〔北京迈瑞达科技〕为色谱纯，水为超纯水，其他试验试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件的选择

采用Diamonsil-C18色谱柱〔4.6mmx250mm，5.0m〕，流动相为：乙腈:0.1%磷酸溶液=5:95，检测波长为210nm，柱温为35℃，流速为1.0mL/min，进样量为15L。理论塔板数按照苦杏仁苷峰计算不低于25000。

2.2对照品溶液的制备

精细称取苦杏仁苷对照品5.395mg，精细称定后置于10mL容量瓶中，以2.1项下的流动相溶液作为定容溶液稀释至刻度后摇匀，得到0.5395mg/mL的对照品溶液，后置于-20℃冰箱中备用。

2.3供试品溶液的制备

取同一批次的连花清瘟胶囊适量，将胶囊中的内容物取出后将药物研碎后，取约2.0g后进展精细称定，将药末放置于100mL具有瓶塞的锥形瓶中，50%甲醇溶液50mL参加锥形瓶中后回流提取60min，滤过，滤渣参加50%甲醇溶液40mL，洗涤1次，将2次的过滤液体及洗涤液体置于200mL蒸发皿中，文火蒸干后，将残渣刮净后置于20mL刻度容量瓶中，流动相溶液定容至刻度，摇匀后静置即得，置于-20℃冰箱中储存，备用。

2.4阴性对照品溶液的制备

以连花清瘟胶囊说明书中药材比例和制备工艺为主，将炒苦杏仁药材去除后制备不含炒苦杏仁药材的阴性胶囊样品，按照2.3项下供试品溶液的制备方法进展阴性对照品溶液的配制，后放置于-20℃的冰箱中储存，备用。

2.5系统适应性试验

精细汲取2.2、2.3以及2.4项下的溶液各15L，按照2.1

项下的色谱条件对三种溶液进样测定并将色谱图进展记录，可得到三种溶液的色谱图，见图1。由色谱图可知，苦杏仁苷的色谱峰和其他相邻的色谱峰别离明晰，别离度>1.5，阴性对照品溶液与对照品溶液相应的保存时间点并未有其他的色谱峰出现，即说明了连花清瘟胶囊中的其他中药材中的有效成分对苦杏仁苷的测定无任何影响。

2.6线性关系考察

精细汲取2.2项下的对照品溶液0.8、1.0、1.4、1.6、1.8、2.0mL分别置于5mL容量瓶中，参加流动相溶液定容至刻度后得不同质量浓度的对照品溶液，精细汲取上述对照组溶液各15L，按照2.1项下的色谱条件分别进展测定，并记录峰面积。以质量浓度C作为横坐标，峰面积A作为纵坐标进展线性回归方程，苦杏仁苷的回归方程为：A=0.0893x102C+0.0321x102〔r=0.9998〕，苦杏仁苷检测质量浓度线性范围为35.17~215.85g/mL。

2.7检测限考察

取2.2项下储藏溶液适量，等倍逐步稀释后分别汲取15L，按照2.1项下色谱条件连续进样测定，信噪比为3:1时得到苦杏仁苷的检测限0.3517g/mL。

2.8精细度试验

精细汲取2.2项下的储藏溶液15L，2.1项下的色谱条件进展测定，连续进样6次后得到不同的峰面积，苦杏仁苷峰面积的RSD值为0.89%，说明HPLC仪器的精细度良好。

2.9稳定性试验

取2.3项下的供试品溶液，分别在0、4、8、12、16、20、24、30、36h按照2.1项下色谱条件测定，苦杏仁苷峰面积的RSD平均值为0.71%，供试品溶液在室温条件下放置36h内稳定性较好。

2.10重复性试验

取同一批次的连花清瘟胶囊的内容物适量，共6份，按照2.3项下制备方式配制溶液，以2.1项下的色谱条件测定，记录峰面积后对含量进展计算。结果说明苦杏仁苷的平均含量为1.52mg/g，RSD值为0.85%，说明检测方法的重复性好。

2.11加样回收率试验

取同批次消费批号一样的连花清瘟胶囊样品内容物0.5g共9份，精细称定后置于100mL具有瓶塞的锥形瓶中，分别参加0.2175、0.2970、0.4764mg苦杏仁苷对照品，按照2.3项下溶液的配方法进展溶液的制备，每个浓度平行制备3份后按照2.1项下的色谱条件进展测定，记录峰面积并计算加样回收率，见表1。

2.12样品含量的测定