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文档简介

可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析一、目的要求二、基本原理三、仪器与试剂1.仪器高效液相色谱仪（带紫外检测器）。25μL平头微量注射器。2.试剂

（1）甲醇（色谱纯）；二次蒸馏水；氯仿（A.R）；1mol·L-1NaOH；NaCl(A.R)；Na2SO4(A.R);咖啡因（A.R）；可口可乐（1.25L瓶装）；咖啡；茶叶。(2)1000μg·mL-1咖啡因标准贮备溶液(3)250.0μg·mL-1咖啡因标准溶液四、实验步骤1.按操作说明书使色谱仪正常工作，色谱条件为：柱温：室温流动相：甲醇/水=60/40（经0.45μm滤膜过滤）流动相流量：1.0mL/min检测波长：275nm2.咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL咖啡因标准溶液（250.0μg·mL-1）于五只25mL容量瓶，用流动相定容至刻度，浓度分别为20.0、40.0、60.0、80.0、100.00μg·mL-1。3.样品处理如下将约100mL可口可乐置于250mL洁净干燥的烧杯中,剧烈搅拌30min或用超声波脱气5min,以赶尽可口可乐中的二氧化碳。将样品溶液分别进行干过滤(即用漏斗、干滤纸过滤),弃去前过滤液,取后面的过滤液。吸取样品滤液25.00mL于125mL分液漏斗中，加入1.0mL饱和NaCl溶液,1mL1mol·L-1NaOH溶液,然后用20mL氯仿分三次萃取(10mL、5mL、5mL)。将氯仿提取液分离后经过装有无水硫酸钠小漏斗(在小漏斗的颈部放一团脱脂棉,上面铺一层无水硫酸钠)脱水,过滤于25mL容量瓶中,最后用少量氯仿多次洗涤无水硫酸钠小漏斗,将洗涤液合并至容量瓶中,定容至刻度。取上述溶液若干mL（通过实验确定）于25mL容量瓶，用流动相定容至刻度。取该溶液20uL,重复两次,要求两次所得的咖啡因色谱峰面积基本一致,否则继续进样,直至每次进样色谱峰面积基本一致。4.绘制工作曲线待液相色谱仪基线平直后,分别注入咖啡因标准系列溶液20uL,重复两次,要求两次所得的咖啡因色谱峰面积基本一致,否则继续进样,直至每次进样色谱峰面积基本一致。五、数据记录标准系列号12345试样咖啡因的浓度(μg·mL-1)20.040.060.080.0100.0咖啡因峰面积(mv·s)六、结果处理绘制峰面积与咖啡因质量（或浓度、体积）关系的工作曲线。从工作曲线上查找并计算出试样中咖啡因的含量。实验出勤预习报告实验态度实验操作实验结果书写报告文明

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