病原性真菌检验 临床微生物学课件

厌氧性细菌及检验

临床微生物教研室

袁小澎厌氧性细菌及检验

临床微生物教研室1一定义有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌1836年Pasteur提出临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染---------------------需要重视一定义有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的2病原性真菌检验临床微生物学课件3二分类

1有芽孢厌氧性细菌一个梭菌属包括83个种2无芽孢厌氧性细菌40多个菌属，300多个菌种和亚种二分类1有芽孢厌氧性细菌4三感染分布原因临床症状三感染分布5厌氧菌在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道一芽孢菌G+杆菌梭状芽孢杆菌属二无芽孢菌（一）G+的杆菌双歧杆菌（二）G-的杆菌类杆菌属（三）G+的球菌消化球菌属（四）G-的球菌韦荣氏菌属000+000+++±++++++++++++++++±0+±±±±++++厌氧菌在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道一6致病的原因1组织缺氧或氧化还原电势降低穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿瘤压迫等等2机体免疫力低下致病的原因1组织缺氧或氧化还原电势降低7临床的症状1感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感染的特征2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴性的3其它等等临床的症状1感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏8厌氧菌标本的采集和送检标本的采集和送检------------1标本决不能被正常菌群污染；2应尽量避免空气厌氧菌标本的采集和送检标本的采集和送检-----------9标本的采集标本来源收集的方法封闭性脓肿妇女生殖道下呼吸道分泌物胸腔窦道，子宫腔，深部创伤组织尿道针管抽取后穹隆穿刺抽取肺穿刺术胸腔穿刺术静脉注射的塑料导管穿入无菌外科切开上阴部膀胱穿刺标本的采集标本来源收集的方法封闭性脓肿针管抽取10标本的送运与处理针筒送运法无菌小瓶送运法棉拭送运法大量标本送运法组织块送运法厌氧袋送运法标本的送运与处理针筒送运法11分离和鉴定

分离和鉴定

12病原性真菌检验临床微生物学课件13检验的方法1直接镜检一些特殊的特点，临床工作中的总结可对初步判断及临床应用做早一步的指导作用检验的方法1直接镜检142分离培养

1初步培养1）培养基的选择强化血琼脂平板卡那万古霉素冻溶血琼脂平板七叶苷胆汁平板等等2分离培养

1初步培养152）标本的接种每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的容器中，有时需要专用的培养基2）标本的接种16

3）厌氧培养法a厌氧罐培养法b气袋法c气体喷射法d厌氧手套箱法e其它等等

3）厌氧培养法172次代培养和厌氧菌的确定2次代培养和厌氧菌的确定183分离培养中可能失败的原因1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜检2）标本在空气中放置太久或接种时时间过长3）未用新鲜配制的培养基3分离培养中可能失败的原因194）未用选择性培养基5）无合适的厌氧罐或装备出现问题6）培养时间不足7）…..4）未用选择性培养基20鉴定实验1形态和染色重要的是为下一步的鉴定提供参考，时间

破伤风梭菌革兰氏染色改变拉丝实验加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性不能为阳性鉴定实验1形态和染色21PH

痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性6.0及以下革兰氏阳性杆菌

PH222菌落性状1）色素产黑色素类杆菌2~10天可产生黑色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红色色素2）溶血产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板上可产生双溶血环3）荧光2菌落性状233抗生素敏感实验4一些特殊的敏感实验——聚茴香脑磺酸钠敏感实验5生化特性6气液相色扑7PCR等等3抗生素敏感实验24有芽孢的厌氧菌简介梭菌属G+陈旧性培养基G-有芽孢的厌氧菌简介25四破伤风梭菌大量存在于人和动物的肠道粪便污染伤口被污染导致----------注意消毒清洁芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，呈梭状可以被用来生物技术，外毒素致毒四破伤风梭菌大量存在于人和动物的肠道26一）生物学性状染色，培养生化对我们实验诊断来说最重要一）生物学性状27破伤风梭菌菌体细长，长4～8um，宽0.3～0.5um，周身鞭毛，芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，破伤风梭菌菌体细长，长4～8um，宽0.3～0.5um28营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直29病原性真菌检验临床微生物学课件30一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40～50分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝31二）致病性与免疫性破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口（如剌伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧伤、坏死组织多，局部组织缺血或同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局部氧化还原电势降低。有利于破伤风杆菌生长二）致病性与免疫性破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵32破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetano33三）微生物学检验标本采集检验程序检验方法和鉴定三）微生物学检验标本采集34五气性坏疽病原菌以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重的急性外伤感染包括很多-----重点产气夹膜梭菌五气性坏疽病原菌以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重的急35产气夹膜梭菌生物学性状形态和染色培养特性生化反应致病性产气夹膜梭菌生物学性状36为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。单独或成双排列，有时也可成短链排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。单独或成双排列37厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固的蛋白质和血清。厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白38在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“汹涌发酵”，是本菌的特点之一。在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分39病原性真菌检验临床微生物学课件40能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发酵甘露糖或水杨苷，能液化明胶，产生硫化氢，能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发41致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，421．气性坏疽2．食物中毒3．急性坏死性肠炎1．气性坏疽431．直接涂片镜检从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性大杆菌，并有荚膜，常伴有其他杂菌，白细胞甚少，形态不规则，这是气性坏疽标本涂片的特点。1．直接涂片镜检从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革442．分离培养与鉴定取坏死组织制成悬液，接种于血球脂平板上或疱肉培养基中，厌氧培养，观察生长情况。取细菌培养物涂片镜检，并进一步用生化反应鉴定。2．分离培养与鉴定取坏死组织制成悬液，接种于血球脂平板上或453．动物实验取培养液0.5～1ml给小鼠或家兔静脉内注射，10分钟后杀死动物，置37℃5～8小时。如动物躯体膨胀，即行解剖，可见脏器和肌肉内有大量气泡，尤以肝脏最为明显，称“泡沫肝”。取内脏或心血涂片镜检或分离培养，可发现有革兰氏阳性大杆菌，并有明显荚膜。3．动物实验取培养液0.5～1ml给小鼠或家兔静脉内注射，46无芽孢的厌氧菌 革兰氏阴性的杆菌革兰氏阳性的杆菌革兰氏阴性的球菌革兰氏阳性的球菌无芽孢的厌氧菌 革兰氏阴性的杆菌47革兰氏阴性的杆菌

------正常菌群的组成部分

类杆菌属革兰氏阴性的杆菌

------正常菌群的组成部分类杆48树立质量法制观念、提高全员质量意识。11月-2211月-22Saturday,November5,2022人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。00:22:0400:22:0400:2211/5/202212:22:04AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。11月-2200:22:0400:22Nov-2205-Nov-22加强交通建设管理，确保工程建设质量。00:22:0400:22:0400:22Saturday,November5,2022安全在于心细，事故出在麻痹。11月-2211月-2200:22:0400:22:04November5,2022踏实肯干，努力奋斗。2022年11月5日12:22上午11月-2211月-22追求至善凭技术开拓市场，凭管理增创效益，凭服务树立形象。05十一月202212:22:04上午00:22:0411月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十一月2212:22上午11月-2200:22November5,2022作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2022/11/50:22:0400:22:0405November2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。12:22:04上午12:22上午00:22:0411月-22一马当先，全员举绩，梅开二度，业绩保底。11月-2211月-2200:2200:22:0400:22:04Nov-22牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2022/11/50:22:04Saturday,November5,2022相信相信得力量。11月-222022/11/50:22:0411月-22谢谢大家！树立质量法制观念、提高全员质量意识。11月-2211月-2249厌氧性细菌及检验

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袁小澎厌氧性细菌及检验

临床微生物教研室50一定义有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌1836年Pasteur提出临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染---------------------需要重视一定义有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的51病原性真菌检验临床微生物学课件52二分类

1有芽孢厌氧性细菌一个梭菌属包括83个种2无芽孢厌氧性细菌40多个菌属，300多个菌种和亚种二分类1有芽孢厌氧性细菌53三感染分布原因临床症状三感染分布54厌氧菌在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道一芽孢菌G+杆菌梭状芽孢杆菌属二无芽孢菌（一）G+的杆菌双歧杆菌（二）G-的杆菌类杆菌属（三）G+的球菌消化球菌属（四）G-的球菌韦荣氏菌属000+000+++±++++++++++++++++±0+±±±±++++厌氧菌在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道一55致病的原因1组织缺氧或氧化还原电势降低穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿瘤压迫等等2机体免疫力低下致病的原因1组织缺氧或氧化还原电势降低56临床的症状1感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感染的特征2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴性的3其它等等临床的症状1感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏57厌氧菌标本的采集和送检标本的采集和送检------------1标本决不能被正常菌群污染；2应尽量避免空气厌氧菌标本的采集和送检标本的采集和送检-----------58标本的采集标本来源收集的方法封闭性脓肿妇女生殖道下呼吸道分泌物胸腔窦道，子宫腔，深部创伤组织尿道针管抽取后穹隆穿刺抽取肺穿刺术胸腔穿刺术静脉注射的塑料导管穿入无菌外科切开上阴部膀胱穿刺标本的采集标本来源收集的方法封闭性脓肿针管抽取59标本的送运与处理针筒送运法无菌小瓶送运法棉拭送运法大量标本送运法组织块送运法厌氧袋送运法标本的送运与处理针筒送运法60分离和鉴定

分离和鉴定

61病原性真菌检验临床微生物学课件62检验的方法1直接镜检一些特殊的特点，临床工作中的总结可对初步判断及临床应用做早一步的指导作用检验的方法1直接镜检632分离培养

1初步培养1）培养基的选择强化血琼脂平板卡那万古霉素冻溶血琼脂平板七叶苷胆汁平板等等2分离培养

1初步培养642）标本的接种每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的容器中，有时需要专用的培养基2）标本的接种65

3）厌氧培养法a厌氧罐培养法b气袋法c气体喷射法d厌氧手套箱法e其它等等

3）厌氧培养法662次代培养和厌氧菌的确定2次代培养和厌氧菌的确定673分离培养中可能失败的原因1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜检2）标本在空气中放置太久或接种时时间过长3）未用新鲜配制的培养基3分离培养中可能失败的原因684）未用选择性培养基5）无合适的厌氧罐或装备出现问题6）培养时间不足7）…..4）未用选择性培养基69鉴定实验1形态和染色重要的是为下一步的鉴定提供参考，时间

破伤风梭菌革兰氏染色改变拉丝实验加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性不能为阳性鉴定实验1形态和染色70PH

痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性6.0及以下革兰氏阳性杆菌

PH712菌落性状1）色素产黑色素类杆菌2~10天可产生黑色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红色色素2）溶血产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板上可产生双溶血环3）荧光2菌落性状723抗生素敏感实验4一些特殊的敏感实验——聚茴香脑磺酸钠敏感实验5生化特性6气液相色扑7PCR等等3抗生素敏感实验73有芽孢的厌氧菌简介梭菌属G+陈旧性培养基G-有芽孢的厌氧菌简介74四破伤风梭菌大量存在于人和动物的肠道粪便污染伤口被污染导致----------注意消毒清洁芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，呈梭状可以被用来生物技术，外毒素致毒四破伤风梭菌大量存在于人和动物的肠道75一）生物学性状染色，培养生化对我们实验诊断来说最重要一）生物学性状76破伤风梭菌菌体细长，长4～8um，宽0.3～0.5um，周身鞭毛，芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，破伤风梭菌菌体细长，长4～8um，宽0.3～0.5um77营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直78病原性真菌检验临床微生物学课件79一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40～50分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝80二）致病性与免疫性破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口（如剌伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧伤、坏死组织多，局部组织缺血或同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局部氧化还原电势降低。有利于破伤风杆菌生长二）致病性与免疫性破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵81破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetano82三）微生物学检验标本采集检验程序检验方法和鉴定三）微生物学检验标本采集83五气性坏疽病原菌以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重的急性外伤感染包括很多-----重点产气夹膜梭菌五气性坏疽病原菌以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重的急84产气夹膜梭菌生物学性状形态和染色培养特性生化反应致病性产气夹膜梭菌生物学性状85为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。单独或成双排列，有时也可成短链排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。单独或成双排列86厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固的蛋白质和血清。厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白87在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“汹涌发酵”，是本菌的特点之一。在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分88病原性真菌检验临床微生物学课件89能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发酵甘露糖或水杨苷，能液化明胶，产生硫化氢，能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发90致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，911．气性坏疽2．食物中毒3．急性坏死性肠炎1．气性坏疽921．直接涂片镜检从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性大杆菌，并有荚膜，常伴有其他杂菌，白细胞甚少，形态不规则，这是气性坏疽标本涂片的特点。1．直接涂片镜检从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革932．分离培养与鉴定取坏死组织制成悬液，接种于血球脂平板上或疱肉培养基中，厌氧培养，观察生长情况。取细菌培养物涂片镜检，并进一步用生化反应鉴定。2．分离培养与鉴定取坏死组织制成悬液，接种于血球脂平板上或943．动物实验取培养液0.5～1ml给小鼠或家兔静脉内