实验一 凯氏定氮课件

实验一：凯氏定氮法

测定豆粉中蛋白质含量

2008年中国三鹿或称2008年中国奶粉污染事件、2008年中国毒奶制品事件、2008年中国毒奶粉事件。事件起因是很多食用三鹿集团生产的奶粉的婴儿被发现患有肾结石，随后在其奶粉中被发现化工原料三聚氰胺。凯氏定氮法与奶粉蛋白含量按照国家药品食品监督管理局的规定，0—3个月婴儿食用的奶粉，蛋白质含量必须达到12%，3—6个月婴儿食用的奶粉，蛋白质含量应不低于10%。凯氏定氮法是食品中蛋白质含量的现行国家标准和国际通行测定方法：将待测样品分解，通过一系列的化学反应将蛋白质中的氮元素转化为氨气，然后再设法测定氨气的含量。即可反推得出蛋白质的含量。凯氏定氮法应用凯氏定氮法的普遍适用性、精确性和可重复性已经得到了国际的广泛认可。它已经被确定为检测食品中蛋白质含量的标准方法。蛋白质（%）=总氮量（%）*KK为换算因数，理想状态下的蛋白质中的氮含量约为16%，所以测量值乘以6.25即为蛋白质量。凯氏定氮法应用中存在问题由于不同的氨基酸序列，这种方法也需要许多不同的校正因子。凯氏定氮法还需要使用浓硫酸和较长时间的加热。凯氏定氮法应用中存在问题这种方法并不能给出真实的蛋白质含量，因为所测定的氮可能不仅仅是由蛋白质转化来的。三聚氰胺，一种含氮量较高的物质，被添加到了食品中以伪造较高的含氮量。为啥钟情于三聚氰胺？三聚氰胺的含氮量为66％。实验试剂和实验仪器:HCI标准溶液（0.01mol.L-1）H3BO3溶液(2%)H2SO4(浓)NaOH溶液(30%)K2SO4(固体)CuSO4.5H2O(固体)甲基红—次甲基蓝指示剂凯氏定氮装置移液管酸式滴定管容量瓶天平二、NH3的固定1、仪器的洗涤

打开橡胶管上的开关，在蒸气发生器中加约1/3体积自来水，关闭进水橡胶管的开关，沿小玻璃漏斗杯壁加入蒸馏水约10mL让水经插管流入反应室，但玻璃漏斗内的水不要放光，夹上橡胶管上的开关，保持水封，防止漏气。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从反应室水沸腾开始计时，连续蒸煮5min，然后移开酒精灯。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗2～3次，测定从冷凝管口排出的水pH值，如小于7，表示蒸馏装置内部已洗干净。用蒸馏水冲洗冷凝器下口，关闭酒精灯，仪器即可供测样品使用三、NH3的标定

1滴定样品蒸馏完毕后，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次。若振摇后复现绿色，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴，振摇观察瓶内溶液颜色变化，暗灰色在一二分钟内不变，当视为到达滴定终点。若呈粉红色，表明已超越滴定终点，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色，可以不滴定。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数，供计算用。四、蛋白含量计算

V2—滴定空白蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL；V1—滴定样品蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL；C—盐酸标准液的浓度，mol/L；0.014—氮的毫摩尔质量，g/