肠道传染病常见致病菌实验室检测课件

肠道传染病常见

致病菌实验室检测肠道传染病常见致病菌实验室检测一、肠道传染病概述二、几种常见致病菌的实验室检测

一、概述肠道传染病是由各种病原体经口侵入肠道，在肠道内繁殖并产生毒素，破坏肠粘膜组织，引起肠道功能紊乱和损害，病原体再从患者由粪便中排出感染他人的一类疾病。往引起腹痛、腹泻、恶心、呕吐及发热等症状，严重者可引起身体重度脱水、昏迷和休克，甚至有生命危险。传播途径1、经水传播：生活饮用水源被肠道传染病人和病原携带者排出的粪便、呕吐物污染或在水中洗涤病人的衣裤、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍乱、伤寒、细菌性痢疾等疾病的暴发流行。2、经食物传播：食品在加工、储存、制作、运输的销售等过程中被肠道传染病的病原体污染，可造成局部的流行和暴发流行。3、接触传播：通过握手、使用或接触过病人的衣物、文具、门具、门把手、人民币等造成病原体传播。4、昆虫传播：有些肠道传染病的病原体可在苍蝇、蟑螂等媒介昆虫体内存活一段时间，并随着昆虫的活动进行传播。病原体甲类传染病：霍乱；乙类传染病：伤寒和副伤寒、细菌性和阿米巴性痢疾、脊髓灰质炎、甲、戊型病毒性肝炎；丙类传染病：除霍乱、伤寒副伤寒、细菌性和阿米巴性痢疾以外的细菌、病毒、原虫等病原体引起的肠道感染。二、几种常见致病菌的实验室检测

（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）由伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起的急性肠道传染病。参照伤寒和副伤寒诊断标准（ws280-2008）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）3实验室病原学检查标本采集及送检分离培养形态与染色

生化反应

血清学及确定鉴定

（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）分离培养血液：按1：10加入血液增菌培养基或葡萄糖胆盐肉汤，36℃±1℃孵育，分别于1d、2d、7d转种血平板或营养琼脂平板，36℃±1℃培养24-48h骨髓：直接或增菌分离粪便：直接接种或于亚硒酸盐增菌培养基36℃±1℃增菌18-24h后接种于SS、MAC或沙门显色等培养基36℃±1℃培养18-24h（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）生化反应：纯化后挑取可疑菌落接种KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培养18-24h观察生化反应进行初筛。发酵葡萄糖、不发酵乳糖，除伤寒沙门菌不产气外，其余菌产生气体，动力阳性、吲哚阴性、不水解尿素，其KIA生化反应模式为：K/AGH2S(+)；MIU生化模式为：＋－－（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）血清学鉴定：凡生化反应附合沙门菌者，均应用血清学凝集试验确定相应群和生物型，基本原则：O:Vi:H1:H2

A-F群多价O血清多价凝集后再用每个O血清群的单价因子血清定群后用H因子检查第1相和第2相H抗原单价O因子血清不凝集，应排除Vi抗原(制成菌悬液100℃水浴30min破坏Vi抗原后再进行血清凝集)（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）确定鉴定：肠杆菌科细菌各属之间，生化有类似，抗原有交叉反应和不典型菌株的出现，需进一步做系统生化反应鉴定，可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统鉴定。（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）简称菌痢，是由志贺菌属细菌引起的肠道传染病。细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准（WS287-2008）分类：A群：痢疾志贺菌(S.dysenteriae)B群：福氏志贺菌(S.flexneri)C群：鲍氏志贺菌(S.boydii)D群：宋内志贺菌(S.sonnei)（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）3实验室病原学检查标本采集及送检分离培养形态与染色

生化反应

血清学及确定鉴定

（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）标本采集及分离：尽量在抗生素使用前，采集血液（怀疑菌血症）或新鲜粪便脓血、粘液部分(新鲜粪便置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中冷藏条件下8h内送检或转移至卡里-布莱尔Cary-Blair运送培养基的粪便试子冷藏24h内送检)。分离培养：血液：按1：10加入血液增菌培养基，36℃±1℃孵育，分别于1d、2d、7d转种血平板或营养琼脂平板，36℃±1℃培养24-48h，观察结果。粪便：直接划线接种于MAC或XLD（木糖赖氨酸去氧胆酸钠）培养基36℃±1℃培养18-24h。不建议使用SS，因其可抑制痢疾志贺氏菌A1型生长，漏检（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）生化反应：纯化后挑取可疑菌落接种KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培养16-20h观察生化反应。KIA生化反应模式为：K/AH2S(-)；MIU：－+/－－（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）血清学凝集：凡生化反应附合志贺菌者，均应用血清学凝集试验进行鉴定分型

无菌挑取KIA表面菌落，用志贺氏菌四种多价抗血清凝集；凝集者，再取痢疾志贺氏I、痢疾志贺氏II、宋内志贺氏、福氏志贺氏抗血清凝集；不凝者排除k抗原(制成菌悬液100℃水浴30min后再进行血清凝集)后，取鲍氏志贺氏菌抗血清凝集；若与某型血清发生凝集，应进一步作分型鉴定。确定鉴定：选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进一步做系统生化反应鉴定。（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一种革兰氏阴性，无芽胞，呈弧状、杆状、丝状等多种形状的嗜盐性细菌。进食含有该菌的食物可致食物中毒，临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。传染源主要为带菌的海产品，近海淡水鱼带菌较高。（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）实验室病原学检查标本采集及送检分离培养形态与染色

生化反应

确定鉴定

（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）标本采集及送检：急性期、用药前采集新鲜粪便，运送时间超过2h者应放入Cary-Blair运送培养基室温下24h内送检，或将粪便置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中室温条件下8h运送。分离培养：新鲜粪便或肛拭子直接划线接种或于3%氯化钠碱性胨水36℃±1℃增菌8-16h后接种于弧菌显色或硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂(TCBS)等培养基36℃±1℃培养18-24h。（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）生化反应：

纯化后挑取可以菌落接种KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培养18-24h观察生化反应初筛。KIA：K/AG

H2S(+)MIU++-

嗜盐试验：挑取纯培养的单个可以菌落，分别接种0%、6%、8%、10%不同氯化钠浓度的胰胨水，36℃±1℃培养24h，观察液体浑浊情况。6%、8%NaCL胨水中生长；0%、10%NaCL胨水中不生长。（三）感染性腹泻（副溶血