人乳头瘤病毒（HPV）疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒〔HPV〕疫苗的研究希望[关键词]宫颈癌康健网讯:李娟王佑春宫颈癌是严峻危害妇女康健和生命的疾病，每年约有50万新发病例，25万人死亡，是引起妇女殒命的第二大缘故原由，此中大部门在生长中国度，占80%摆布［1］。1977年德国粹者ZurHausen等从宫颈癌标本中创造白人乳头瘤病毒〔huanpapillavirus，HPV〕DNA，推测HPV熏染与宫颈癌产生有关。进一步的分子盛行病学证据表白，HPV与人类多种癌症，特殊是与宫颈癌有着严密的干系。由国际癌症研究机构〔IAR〕构造在22个国度举行了针对引起侵袭性宫颈癌〔I〕的HPV范例的观察［2］。构造学确诊为I的1000个病例中有99.7%创造HPVDNA阳性，其上HPV的范例重要为HPV16〔53%〕和HPV18〔15%〕。1机体对HPV熏染的免疫反响HPV属乳头多瘤空泡病毒科〔Papvaviridae〕乳头瘤病毒属，是一类熏染表皮和粘膜鳞状上皮的小DNA病毒。其基因组为双链环状DNA，长7.5～8.0kb，含8个开放阅读框〔penreadingfraes，RFs〕，依成效差异分3个区:〔1〕早期区〔earlyregin，E区〕:别离编码E1、E2、E4、E5、E6、E7等六个早期卵白，到场病毒DNA的复制、转录、翻译调控和转化等成效。〔2〕晚期区〔lateregin，L区〕:编码重要外壳卵白L1和次要外壳卵白L2。〔3〕非编码区〔undingregin，UR〕或上游调控区〔URR〕:含有HPV基因组DNA的复制出发点和HPV表达所必须的调控元件。根据HPV熏染与宫颈癌产生的伤害性，将HPV分为低危型〔HPV1，6，11等〕和高危型〔HPV16，18，31，45等〕。低危型HPV重要引起表皮细胞良性增生，如HPV6和11型可引起生殖器疣和儿童复发性乳头瘤。高危型HPV与宫颈上皮内瘤的产生和恶变以及其他上皮性肿瘤的产生相干。HPV熏染在人群中较为平凡，大部门人在性生存开始后，都熏染过该病毒。病毒通过受损的上皮构造进入基底层细胞，其复制周期受严酷的调治，并依靠于病毒编码的卵白质和宿主上皮细胞的分化程度。病毒熏染通常为局部限定性，不引起炎症反响。大多数人都能自行扫除病毒，只有一小部门人由于免疫体系的缘故原由无法扫除病毒，造成HPV连续存在，继而生长为宫颈癌。很多证据表白HPV熏染能引发宿主免疫反响，如大多数皮肤疣两年内可自觉消退，且多处熏染灶同时消退［3］。大多数人在性生存开始后，都熏染过HPV，随后熏染率低落，说明免疫体系可以扫除病毒并恒久产生庇护作用。HPV中和抗体可以庇护机体免受病毒的熏染，但对已经存在的病毒，那么必要细胞免疫来扫除已感染的细胞。在宫颈损伤病人的消退历程中大多可检测到细胞免疫反响的升高［4］;而免疫按捺如器官移植时，病人患疣的机率增大;HIV病人比康健人患锋利湿疣的机率高2～7倍;由此可见，细胞介导的免疫机制对付操纵HPV熏染有紧张的作用。2HPV疫苗研究近况由于从熏染灶构造中很难分散到病毒体，迄今未能创立体外造就体系举行病毒造就。如今对宫颈癌的治疗根本以手术和放疗为主，给病人带来很大的痛楚。防范HPV相干癌症的最有用的要领是研制特异性的疫苗，诱导机体产生中和抗体，引发庇护性免疫反响，到达有用防范与癌症相干型的HPV流传的目的，低落宫颈癌的发生率，而且大概低落与HPV熏染弱相干的癌症如肛门、外阴或扁桃体癌的产生率。由于E6、E7卵白具有转化活性，利用全病毒做疫苗有致癌的伤害，因此，如今的研制标的目的重要会合在亚单元疫苗方面。根据其成效差异，疫苗分为防范性疫苗和治疗性疫苗。防范性疫苗多以HPV的重要衣壳卵白L1体外表达形成的病毒样颗粒〔VLPs〕为靶抗原，诱导机体产生特异性的中和抗体。治疗性疫苗那么以HPV早期卵白如改造过的E6、E7卵白作为靶抗原，诱导产生特异性的细胞免疫反响，用于IN和宫颈癌的免疫治疗。比年来研究的如嵌合型病毒样颗粒疫苗、HPV假病毒疫苗等同时具有防范和治疗双重成效。2.1病毒样颗粒〔VLPs〕HPV有两种衣壳卵白，重要衣壳卵白L1和次要衣壳蛋白L2。在天然HPV病毒颗粒形成历程中，衣壳卵白包装病毒DNA形成成熟的病毒颗粒。研究表白，在很多表达体系如哺乳动物细胞、酵母和细菌［5，6］中，单独L1或L1和L2共表达后可自行组装成不含病毒DNA的病毒样颗粒〔VLPs〕，这种VLPs布局与天然的病毒颗粒相似，用来免疫动物诱导产生高滴度的中和抗体，证明在VLP外貌存在中和抗体的表位［7］。由于L1抗体识别构象依靠的型特异表位，因此，保持必然的空间构象对VLP的免疫原性非常紧张。当其变性后便失去诱导产生中和抗体的本领。HPVVLPs还能通过HI途径诱导产生细胞免疫。HPV16型L1装配成的VLPs经鼻免疫小鼠后，可在脾及阴道淋巴构造中产生淋巴细胞增殖。以产生IFN-γ的D4+T细胞增为主，髂骨淋巴细胞中增生的T淋巴细胞具有TL活性，说明VLPs可诱导HI类限定性D8+反响［8］。动物实行证明VLP诱导产生的抗体对动物的庇护率险些到达100%，说明体液免疫充足庇护机体免受病毒的熏染。对VLP疫苗举行的一些临床试验也证明白其宁静有用性。在康健人群中举行的随机、双盲实行对HPV16L1VLP的宁静性和免疫原性进行了评价。结果表白全部的疫苗均有极好的耐受性，受试者均产生血清阳转，在没有佐剂的环境下也有很好的免疫原性［9］。HPV11L1VLP在康健志愿者中举行的Ⅰ期临床试验得到相似的结果。由erk，GlaxSithKline和NIH消费的VLPs疫苗和差异的早期卵白与L1/L2卵白构成嵌和病毒样颗粒VLP正在举行Ⅲ期临床试验［10］。Ⅰ和Ⅱ期临床实行证明HPVVLPs疫苗是宁静的，并有高度的免疫原性，VLPs免疫后诱导产生的中和抗体效价是天然熏染的100倍。1998年10月～1999年11月，在美国女性中举行了HPV16L1VLP临床试验。酵母表达的VLP纯化后吸附于铝佐剂，免疫组抗体效价远远高于比较组。免疫后17.4个月跟踪观察表现，比较组HPV16连续熏染率为3.8%，免疫组为0。全部9例HPV16相干的宫颈上皮内瘤均产生在比较组［11］。该实行结果充实说明白VLP是最有前程的疫苗之一。高危型HPV的早期卵白E6、E7连续表达于HPV熏染的肿瘤细胞上，因此，可作为诱导肿瘤特异性TL反响的最正确靶抗原。uller等［12］用HPV16E7卵白部门序列取代L1卵白端34的氨基酸，构建了VLP。实行证明端插入60个氨基酸不影响VLP的形成，免疫动物后诱导产生中和抗体。因此，利用这一特点，端还可以插入别的HPV特异序列或非HPV特异序列，如的肿瘤抗原的T细胞表位。种种研究证明差异HPV诱导的中和抗体的庇护作用具有型特异性。利用ELISA和交织中和实行对九种HPV〔6，11，16，18，31，33，35，39，45〕亚型举行了免疫活性阐发，HPV衣壳卵白具有高度的免疫原性和型特异性，但差异范例之间的交织中和活性很低［13］。体外熏染实行表白只有同型的VLP抗血清才气中和假病毒颗粒。因此，很多疫苗接纳多型混淆免疫的计谋，如包罗16，18，31和45的VLPs可以或许防范75%的宫颈癌［1］。在防范性疫苗VLPs中至少还应该包罗一种非癌基因型HPV，如HPV6重要引起生殖疣，针对它的抗体与HPV11有交织中和活性，而HPV11是引起生殖疣的第二大缘故原由。包罗低危型HPV的多价疫苗有大概办理生殖疣高频率产生的题目和治疗上的困难。2.2DNA疫苗DNA疫苗是将编码外源卵白基因的质粒DNA直接导入体内，外源基因表达后呈递给免疫体系，别离诱导产生细胞免疫和体液免疫应答。在已往的十多年里，DNA疫苗研究已经从实行室生长到开端的临床试验阶段，成为防治熏染并肿瘤的研究热门。如今研究的HPVDNA疫苗既有包罗早期基因的治疗性疫苗，也有包罗晚期基因的防范性疫苗。HPV16L1DNA疫苗能有用刺激阴道D8+T细胞，这对消除病毒熏染的细胞非常紧张。当生殖道粘膜基底层鳞状上皮细胞表露于病毒时，就会熏染HPV。有用防范HPV熏染的疫苗应该在病毒入侵的局部提供免疫庇护作用。排泄型IgA能够与病毒结合，制止其附着上皮细胞，因此，具有病毒中和活性的SIgA在防范局部熏染和疾病的产生中起着紧张的作用，是防范病毒侵入的第一道防地。在人和猴子的生殖道粘膜构造中检测细胞免疫和抗体排泄细胞证明，适当的免疫途径可以或许在生殖道诱发产生抗体和TL反响。HPV16L1DNA疫苗鼻腔免疫BALB/后，产后细胞免疫和阴道粘膜局部免疫，但只能诱发弱的体液免疫反响。因此，鼻内免疫不克不及作为一个有用的途径，可以与HPV16L1VLP结合利用，加强VLP的免疫本领［14］。其他的一些实行证明粘膜免疫不但产生在疫苗注射部位，还可产生在远端粘膜部位［15］。HPV16E7DNA疫苗免疫小鼠，诱导产生较强的E7特异性TL反响，庇护小鼠免受肿瘤细胞的打击。利用突变的E7DNA疫苗免疫产生的庇护作用优于野生型DNA疫苗免疫结果。由于E7卵白的转化活性，接纳差异要领将其突变来消除转化活性，增长疫苗的宁静性［16］。利用改革过的DNA免疫57BL/6小鼠，不但诱导产生E7特异性TL，还能庇护小鼠免受E7阳性肿瘤细胞的打击。DNA疫苗的宁静性，特殊是免疫后质粒的构造漫衍和整合是限定其应用的重要题目。差异实行室对此类题目举行了多方面的研究［17，18］，没有创造外源DNA与基因组整合的证据，同时还证明DNA疫苗接种后不会诱导产生自身DNA抗体，引起免疫体系成效紊乱。19GaL，hainB，Sinlair，etal.Iunerespnsethuanpapillˉavirustype16E6geneinalivevainiavetr.JurnalfGeneralVirlgy，1994，75:157-164.20Dariusz，Kalzyk.VaineregienfrpreventinfsexuallytransittedinfetinsithHPV16.Vaine，2001，19:3583-3590.21LndnLP，hatfieldS，TindleR，etal.IunizatinfieusingSalnellatyphiuriuexpressingHPV16E7epitpesinsertedinthepatitisBvirusreantigen.Vaine，1996，14:545-552.22JabbarIA，FernandGJP，Sa