巨细胞病毒IgGIgM目录

PAGEPAGE23赛润ELISAclassic巨细胞病毒IgG/IgM目录用途诊断意义赛润ELISAclassic-检测原理试剂盒组成检测所需物质，试剂盒未提供储存和稳定性赛润ELISAclassic的检验步骤注意事项检验前的准备工作和储存试剂盒反应试剂的准备检测程序概要检测过程检测结果评估4PL单点定量法检验有效性标准计算赛润ELISAclassi巨细胞病毒IgG/IgM（定量）检测结果分析性能特性重复性敏感性和特异性警告警告和安全措施废料处理参考文献V10.03/07-1赛润ELISAclassic巨细胞病毒IgG/IgM试剂盒酶联免疫法测定人体抗体（IgG/IgM）-只限用于体外诊断-IgG试剂盒(定量)编号:ESR109GlgM试剂盒(定性)编号:ESR109M检测评估标准DadeBehringBEP®III/BEP®2000,DSX,手动操用途：赛润ELISAclassic巨细胞病毒IgG/IgM试剂盒主要用于人血清、脑脊液或血浆中抗巨细胞病毒抗体的定性和/或定量测定，IgM-ELISA试剂用于确定急性感染，而IgG-ELISA试剂则用于近期感染和血清学状态的诊断。诊断意义巨细胞病毒（CMV）DNA病毒，它是人病原体-疱疹病毒属的一种。巨细胞病毒的主要感染途径（输血，移植手术。初期感染后就会相继发生终生的潜在性感染。巨细胞病毒寄生淋巴细胞中，可以在特定的环境下被激活。巨细胞病毒在发达和不发达国家的感染率在45-50%90%2-315-30间。初期感染通常没有症状，临床表现的轻重一般是取决于病人的年龄、机体对局部感染到全身性感染的免疫能力高低。免疫能力低下的人被感染后可能会出现严重的临床症状甚至死亡。在免疫活性正常的成年人体内，病毒的再激活及产生分泌物通常是无症状的，而在免疫能力低下的机体内巨细胞病毒的再激活可能会导致严重的临床疾病。巨细胞病毒感染是医源性免疫抑制如器官移植病人和艾滋病患者出现并发症的主要原因。怀孕妇女的初期与激发感染一样都会导致胚胎受损，初期感染胎儿病变的风险比40%10-15%的被感染婴儿会有不同程度的后期临床症状。巨细胞病毒感染是最常见的先天感染和后天的感染性疾病。ELISA检验原理用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异结合IgG、IgAIgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除底物（对硝基苯磷酸盐度与特异性抗体含量成正比。试剂盒的组成试验成分微孔条（此微孔条可以掰开单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原）1个微孔条框架包被的抗原为灭活抗原标准血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；防腐剂：<0.1%叠氮化钠染色剂：紫红色O阴性质控血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；防腐剂：<0.1%叠氮化钠染色剂：里沙明绿V酶标记的抗人IgG,IgA,IgM（立即可用）IgA,多克隆液封闭。防腐剂:0.01%甲基异噻唑啉酮，0.01%溴化硝基二垩烷浓缩洗液（10002030mMTris防腐剂：0.1%叠氮化钠稀释缓冲液磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20防腐剂：<0.1%叠氮化钠，0.01克/升的溴酚蓝钠盐终止液1.2N氢氧化钠底物（立即可用）邻硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液防腐剂：<0.1%叠氮化钠（瓶子未盖好底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量）带有标准曲线和评估表的质量控制认证文件（抗体以IU/毫升或U/毫升计量）

IgG试剂盒 IgM试剂数量/容积12 122×2毫升 2×2毫升1×2毫升 1×2毫升13毫升 13毫升1×33.3毫升 1×33.3毫升2×50毫升 2×50毫升15毫升 15毫升13毫升 13毫升1 1其它检测所需物质普通实验室所需的仪器装置IgMRf—吸附剂（Rf-吸附剂/T200/20ml）405620690（例如650纳米）- 37℃温箱湿盒蒸馏水。6.储存及稳定性试剂储存稳定性微孔条(包被抗原)开封后放在2-8℃装有干燥剂的密封铝箔袋中。4星期有效期内；质控血清/标准血清 开封后保存于2-8℃。 24个月酶标记抗体稀释缓冲液洗涤液

2-8避免污染（使用无菌针头。开启后于2-8℃储存。有絮状时丢掉未开封浓缩液开封后保存于2-8℃。工作液在2-8℃。工作液在室温下。盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并丢弃混浊溶液。

有效期内24个月18个月有效期内36个月有效期内2星期1星期2-8℃储存，避光。 有效期内底物 避免污染（使用无菌针头。当溶 24个液变为黄色时应予以丢弃（水作空0.25时。终止液

开封后保存于室温下。

有效期内赛润ELISAclassic的检验步骤注意事项只有全部使用赛润ELISAclassic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润ELISAclassic试剂盒。classic试剂盒内所有试剂均在标定的期内有效。详细的稳定性和储存资料在“6.储存及稳定性”内将加以详述。每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。开始试验前，将所有试剂置于室温。无菌技术以吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。试验结果的可重复性依赖于充分混合试有稀释过的溶液（例如使用混合器。小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。只有严格遵守赛润ELISAclassic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。洗涤不充分将影响试验结果：（710.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。检验前的准备工作和储存样品不应加热灭活。样品准备赛润ELISAclassic巨细胞IgG开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2：V1+V2=1+100V1+V2=1+100加10患者待测样品于1000稀释缓冲液稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混合。赛润ELISAclassic巨细胞IgMIgM的自体抗体IgMIgM抗体（类风湿因子）IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结合IgMIgG的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。Rf—吸附剂（T200,20ml）IgG含有一定量的对照抗原。类风湿因子和抗体可识别宿主细胞的膜成份，并与之结合。不必进行微量孔内覆有对照抗原的平行试验。SERIONELISARF另行购买:巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释：V1+V2=1+4V1+V2=1+4加200微升Rf-吸附剂/对照抗原于800微升稀释缓冲液中然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释：V1+V3=1+100加10微升患者待测样品于1000微升Rf-稀释缓冲液中样品储存2-87-20避免样品反复冻融。2-8℃保存一星期。试剂盒反应试剂的准备微孔条微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取下并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。对照血清/标准血清对照和标准血清立即可用，不必进一步稀释。试验时，可直接使用。对于每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括阴性阳性对照孔。界定对照应作双份。如果是定量试验，标准血清也做双份。不要用RF吸附剂处理对照血清！抗人IgAIgM抗体稀释液，用AP（即用）禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。同一试剂盒才能具最佳检测效果。洗液1：30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）V2例如：浓缩缓冲液（V1）33.3毫升1.0毫升样品的稀释缓冲液（即用）

终体积（V2）1000毫升30毫升底物（即用）试验时戴手套以避免污染。必须以无菌针头吸取底物溶液。终止液（即用）检测程序概要

巨细胞病毒IgG/IgM定量进行IgM检测时先吸除RF因子,见7.2.1154样品稀释液（病人血清）1+100将稀释的样本，和立即可用的对照血清/标准血清，加到微量孔内（100微升）6060/湿盒中洗涤加入已稀释的酶标记抗体溶液（100微升）30/湿盒中洗涤加入底物溶液（100微升）30/湿盒中加入终止液（100微升）在405纳米处读数在405纳米处读数检测过程将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的一个孔为底物空白使用，例如：IgG/IgM抗原微量孔A1B1C1E1底物空白1……7.5.3 将样品于湿盒内60分钟（±5分钟。孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板：吸去或甩去洗液300微升洗液吸去或甩去洗液重付息涤过程3次（共4）将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体加入酶标记抗体。于适当孔内（底物空白除外）加入100微升IgG/IgM/IgA酶标记抗体7.5.6 30分钟（1分钟）*。孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上）加入底物于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）7.5.9 30分钟（1分钟）*。*请您注意：在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。终止反应每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。读取消光度以底物空白为空白对照液，60405OD620纳米-690纳米（650纳米。检测结果评估：赛润ELISAclassic巨细胞病毒lgG,IgM(定量)检测4PL单点定量法通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。用赛润ELISAclassic逻辑对数模型（4PL4）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算公式如下：D-AD-AOD=A+1+eB(C-lnconc.)参数A、B、C和D能够反映曲线的精确形状。1.下端渐进线参数A2.曲线斜率参数B3.转折点参数C4.上端渐进线参数D标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要也可取得相关的评估软件。为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保ELISA标准血清数值可能是临界值或阴性结果。有效性标准OD0.25阴性对照必须为负值ELISAOD盒专用的质量控制证书中给定（）ELISAOD盒专用的质量控制证书中给定（）如果未达到以上标准，试验无效且必须重做。赛润ELISAclassicIgG/IgM的定量计算IgG抗体活性以“U/ml”为单位，活性高低与德国保罗•埃利希（PaulEhrlich）研究IgG300U/ml。非自动评估OD抗体活性值。标准血清的参考值和有效范围已在评估表格（质量控制证书）中给定。所有的OD值在求值前必须先减去空白（A1。方法1：定性评估OD乘（见专用公式，例如：OD=0.502xMW(STD) 临界值上限OD=0.352xMW(STD) 临界值下限如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64, 那么临界值的范围即为0.225-0.321。方法2：用评估表精确评估抗体活性ODOD0.57-0.610.62-0.65IU/ml或U/ml其它<0.06<0.070.07-0.12<55-100.13-0.2211-190.23-0.3220-300.33-0.4031-40用已测得的患者样品OD0.57-0.610.62-0.65IU/ml或U/ml其它<0.06<0.070.07-0.12<55-100.13-0.2211-190.23-0.3220-300.33-0.4031-400.64OD0.62-0.65OD0.23,20-30方法3：利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。测定间差异（指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异）可用校正系数F与当前测定数值相乘进行校正。校正系数的计算公式为：（标准血清）OD（标准血清）ODF=（标准血清）OD用户利用专用的标准曲线对检测试验的偏差进行校正是非常必要的。首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数F进行校正。OD校正系数“F”的计算：用给定的参考数值除以标准血清消光数的平均值。F=标准血清的参考消光数值/标准血清消光数的平均值将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数“F”相乘。U/ml活性。赛润ELISAclassic巨细胞病毒IgG:阳性结果:>40U/ml不确定性结果:25-40U/ml阴性结果:<25U/ml赛润ELISAclassic巨细胞病毒IgM:阳性结果:>15U/ml不确定性结果:10-15U/ml阴性结果:<10U/mlSERIONeasybase4PL软件/SERION输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。如果标准血清的消光值超出有效范围，SERIONeasybase4PL软件就会显示如下信息：“标准已超出允许范围”和/或“标准差异大于20%SERION评估软件只用英语显示：„Standardvaluesoutofrangesinfollowinggroups:Group1-24.Standardvaluediffermorethan20%infollowinggroups:Group1-24.”出范围：组1-24。以下组样品标准值差异大于20%：组1-24）在这种情况下，此轮试验无效，需重做。只有更换批号时，参数和参数值才需要改变（评估表中标有参数与参考值特异性数据的正确输入与否可以以标准血清的IU/ml或U/ml值为基础进行检验。计算出的平均单位值需与组别特异性认证书所示的单位值相对应。可自动校正测定值。使用标准版本打印机会显示如下内容：样品编号样品编号OD值IU/ml或U/ml结果说明检测结果说明血清学诊断主要用于巨细胞病毒易感或潜在感染的检测、也可用临床疾病（述内容）的诊断。IgM8-12能长期持续存在。lgG-IgG血清转化是初期感染唯一的血清学证据。IgGIgM再激活不受当时体内抗体水平的影响。血清学诊断结果的解释必须与临床表现相结合，对可疑的病例应采取其它诊断技术（如抗原检测）进一步诊断。IgM除可能的非特异性反应，也应当考虑与其它疱疹病毒的交叉反应以及非洲淋巴细IgMIgG-IgG-抗体水平升高。性能特征重复性检测内结果的重复性通过在同一批试验中检测20次不同反应的血清来判断，而检测间结果的重复性通过分别在5天进行10次独立的血清检测分析来判断。变异系数(CV)=

标准差平均值

×100赛润ELISAclassiclgM:平均消光值检测内分析平均消光值检测间分析(OD)(CV%)(OD)(CV%)样品弱阳性0.4733.10.4166.6强阳性1.3462.31.09814.2赛润ELISAclassic巨细胞病毒lgG:平均消光值检测内分析平均消光值检测间分析(OD)(CV%)(OD)(CV%)样品弱阳性0.5485.700.47710.30阳性1.1667.001.0418.60强阳性2.6444.802.2766.70敏感性与特异性以其它的巨细胞病毒IgG/IgM-ELISA试剂（以抗人免疫球蛋白碱性磷酸酶复合物作为检测系统）331份病人的血清（包括怀孕妇女、器官移植病人、HSV[单纯疱疹病毒]VZV[水痘带状疱疹病毒]HHV6[6]EBV[非洲淋巴细胞瘤病毒]、风疹病毒和弓形虫感染的病人）进行了检测。结果如下:IgG-检测敏感性99.0%IgG-检测敏感性99.0%IgM-检测100%特异性99.2%92.0%轻微至中级的溶血(n=25)、脂血症(n=15)和黄疸(n=60)病人的血清样品对检测结果没有影响。警告警告和安全措施赛润ELISAclassic试剂盒是针对熟悉实验室操作人员所设计使用的。所有试剂盒试剂及人类标本必须采用已有的良好实验技术，小心处理：- 此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV有潜在的感染性。移液过程禁止用口。在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。底洗手清洁。患者样本及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。试剂应保存在安全的地方，禁止儿童接触。终止液：具有腐蚀性（；发生酸烧伤（R34手套和试验服。废料处理请注意相关要求！参考文献Forbes,B.A.AcquisitionofCytomegalievirusInfection:anUpdateClin.Microbiol.Rev.2,204-216,1989Enders,G.InfektionenundImpfungeninderSchwangerschaft2.Aufl.,VerlagUrban&SchwarzenbergMünchen-Wien-Baltimore1991Eis-Hübinger,A.M.etal.VirologischeundserologischeMethodenzumNachweiseineraktivenCytomegalievirus-InfektioninderpostoperativenPhasenachNierentransplantationKlin.Lab.39,547-550,1993Schmuth,M.etal.Cytomegalievirus-InfektionnachLungentransplantationDtsch.med.Wschr.118,365-370,1993Drew,W.L.NonpulmonaryManifestationsofCytomegalievirusInfectioninImmunocompromisedPatientsClin.Microbiol.Rev.5,204-210,1992Reimer,K.undMeisel,H.HumanesZytomegalievirus,in:DiagnostischeBibliothek,Bd.1,Porstmann,T.(Hrsg.),BlackwellWissenschaftsverlag,279-290,1996Steinmann,J.undBischoff,J.ComparisonofserologicalmethodsforthedetectionofCytomegalovirusinfection.Lab.Med.15,585-589,1991.赛润ELISAclassic标签注释：LOT签号/lotLOTREF /referenceorordernumberx…y℃ x…y/storebetweenxandydegreecelsiusCE 98/79/CEmarkingaccordingtoIVDguideline98/79ECCE0197 按照欧共体标准98/79附录II,B/CEmarkingaccordingIVDguideline98/79ECaccordingtoannexII,listBMTPAGCAGSTDPOSCMTPAGCAGSTDPOSC/O微孔板/microtiterplate(breakablestrips)抗原/antigenNEGAPC+++/control/standardserum/positivcontrolNEGAPC+++阴性对照/negativecontrol酶标记的抗人/alkalinephosphataseconjugateanti-human低浓度的酶标记物/conjugatewithlowconcentration/conjugatewithmediumconcentration2222+++RFRf/CAG+++RFRf/CAGDILBWASHpNPPSTOPRF/rheumatoidfactorabsorbent(rf-absorbent)赛润对照抗原类风湿因子RF/rheumatoidfactorabsorbent(rf-absorbent)withDILBWASHpNPPSTOP/dilutionbufferfor/washingsolutionconcentratepNPP/pNPPsubstrat终止液/stoppingsolutionCERTINFORTUCERTINFORTUCONCDILAQUAIVD128132120120112111611713713111312134109130

有腐蚀性/corrosive标准曲线和评估表/certificate(standardcurveandevaluationtable)用法说明书/instructions立即可用/ready-to-use浓缩/concentrate稀释或溶解/diluteordisolvein蒸馏水/aquadetillata体外诊断使用/in-vitrodiagnosticuse腺病毒/Adeno,Virus烟曲霉/Aspergillusfumigatus百日咳/Bord