《基因工程的原理和技术》教学-完整版课件

第二节基因工程的原理和技术将大鼠的生长激素基因导入到小鼠受精卵中，得到的“超级鼠”。1.简述基因工程的原理；2.描述基因工程基本步骤的几个步骤；3.举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理。基因工程的基本操作步骤第一步：获取目的基因第二步：形成重组DNA分子第三步：将重组DNA分子导入受体细胞第四步：筛选含有目的基因的受体细胞第五步：目的基因的表达一、获取目的基因人工合成利用PCR技术扩增已知序列：从基因文库获得未知序列：(DNAlibrary)聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)鸟枪法：散弹射击法供体细胞DNA限制酶许多DNA片段载入运载体导入受体细胞扩增产生特定性状分离目的基因从基因文库获得基因DNA文库的构建

将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。目的基因的mRNA逆转录单链DNA合成双链DNA（目的基因）蛋白质氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因人工合成法逆转录法根据已知氨基酸序列直接合成DNA二、形成重组DNA分子质粒DNA分子限制性核酸内切酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端常用受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等方法举例：

载体：质粒；

宿主细胞：大肠杆菌；

处理方法：氯化钙；

目的：增加细胞壁透性；三、重组DNA分子导入受体细胞四、筛选有目的基因的受体细胞

前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。筛选原理：质粒（载体）上含有抗生素抗性基因，受体细胞本身不能抵抗抗生素（不具有抗生素抗性基因），因此只有导入重组DNA分子（含目的基因）的受体细胞才能在含有抗生素的培养基中生存！五、目的基因的表达无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物

细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。例：用棉铃喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，说明摄入了抗虫基因并得到表达。1.在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是（）A.将目的基因从染色体上切割出来B.识别并切割特定的DNA核苷酸序列C.将目的基因与运载体结合D.将目的基因导入受体细胞B2.基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是（）A.限制酶只用于切割获取目的基因B.载体与目的基因必须用同一种限制酶处理C.基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶D.带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测A3.运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有（）A.抗虫基因B.抗虫基因产物C.新的细胞核D.相应性状4.转基因动物转基因时的受体细胞是（）A.受精卵B.精细胞C.卵细胞D.体细胞DA5.质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是：()①能自主复制②不能自主复制③结构很小

④蛋白质⑤