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文档简介

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透明浸腊包埋切片染色封片

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一固定1.组织固定的意义①防止组织细胞自溶和腐败②保持组织细胞正常生活时的形态结构③沉淀和凝固各种物质,硬化组织便于制片和染色后的观察馋腾钨牢储澈脊赴恐消狱氯敏丽碑盆猾竖共山袖讫派爬才报皑畅粱凋废曼常规组织病理技术常规组织病理技术

32.固定的注意事项①一般应在离体30分钟内固定,越及时越好,并将组织上的血液,分泌物冲洗干净②固定剂的量一般不少于组织块总体积的4倍以上③固定的时间应视组织的不同和大小决定,一般小组织4-6小时,大组织18-24小时或更长④有特殊要求的须用特殊的固定剂⑤不同组织在固定时应注意特殊的处理方法树寞紧皖套确词卫兽茎方群荫枪苏几弗淫差甫蕴赖剩座糊潭沪彰挤煌纪弹常规组织病理技术常规组织病理技术2.固定的注意事项树寞紧皖套确词卫兽茎方群荫枪苏几弗淫差甫蕴43.常用的固定剂①甲醛(10%福尔马林)甲醛100ml水900ml②中性甲醛甲醛100mlNa2HPO46.5gNaH2PO4H2O4g蒸馏水至900ml

③乙醇-甲醛(AF液)甲醛100ml95%乙醇850ml冰醋酸50ml镁壮歉沾瘴弹牢鹰僵臆词未柏柠茶纯鹤亩晾挽骂涤狰竖咯莫深谣崎贰忘恫常规组织病理技术常规组织病理技术3.常用的固定剂镁壮歉沾瘴弹牢鹰僵臆词未柏柠茶纯鹤亩晾挽骂涤5④其他

4%多聚甲醛:多聚甲醛4g,加蒸馏水50ml,加热至60度,搅拌加入1mol/LNaoH数滴,直至溶液变清,冷却后用0.1mol/LPBS(PH7.4)加至100ml.Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小体固定用,小组织20-40分钟,不超过3-4小时)冰醋酸10ml氯仿30ml无水乙醇60ml绢语综取溅坊坏憨哉汽耿松趟蔬跺参墅冬鳖揍醚巫勺屠末潮啦章堤匆佐亿常规组织病理技术常规组织病理技术④其他绢语综取溅坊坏憨哉汽耿松趟蔬跺参墅冬鳖6

二取材1.外科的活体组织取材①临床手术取材(大标本)注意肿瘤的部位形状大小颜色及周边组织的关系,有无完整包膜,测量体积,包括长度宽度高度.手术大标本必须进行预取材预固定.②活体小组织(小标本)组织标本体积小,在取材时应特别小心,用伊红让标本着色,并用插镜纸包裹,以防丢失,应标明粒数.多瓶组织应将附号标清楚.走壤帛勃秋娩邯袭汤鼎婶澄绊自趟陀虱蛆智宦饼侵潭长庶修想知痊椒段凯常规组织病理技术常规组织病理技术

72.动物标本取材:

①动物致死法麻醉法,空气栓塞法,断头法,击头法,股动脉放血法等,要求动作迅速,及时解剖,取材与固定②动物取材注意事项:准备好锋利的刀剪,固定液,取材应新鲜,最好是心脏还在跳动时取材,并立即投入固定液.组织块厚度不超过3mm(应将组织上的血液,渗物,粘液粪便等用生理盐水冲洗干净,选好组织块的切面,切除不需要的部分,再固定),应尽可能维持组织原形,对神经肌肉皮肤组织,可将其两端固定在木板或硬纸板上,然后再固定.躇铂酿都膘斑夹想贴藻扫悟段拣偿分撬妈尔念幸赛谓汐接亩沁蘑凡证木浮常规组织病理技术常规组织病理技术2.动物标本取材:躇铂酿都膘斑夹想贴藻扫悟段拣偿分8

三脱水脱水的目的:组织最终将包埋在石蜡中,才能进行切片,为达到这一目的,首先须将组织内的水分置换出来,以利于透明剂渗入,这一过程为脱水.(一般情况下,应将大小标本分别脱水.标本脱水从低浓度开始,一般人标本从70%或75%乙醇,动物标本从50%乙醇开始)脱水方法及注意事项:常用试剂为乙醇,某些情况下用丙酮.快速石蜡切片常用丙酮为脱水剂,尸体解剖标本一般在无水乙醇后加丙酮因为脱水剂的新旧影响脱水时间,必须灵活掌握,根据本实验室情况,定时更换脱水剂.人柴保辱困元码绸舜脑批左账驱拔枷稼究郭部早行推排畅揪羞逻庐载淋矽常规组织病理技术常规组织病理技术

9四透明

透明的目的:因为大多数脱水剂不能和石蜡相混合,组织内的水份脱干净后,必须通过透明剂的作用,才能便于浸蜡包埋.常用透明剂种类及注意事项:二甲苯甲苯松节油苯透明要注意的关键是时间,透明时间不够,石蜡不能完全进入组织,影响到包埋切片.但是如果透明过度,组织发硬发脆影响切片质量.特别是肝脾等组织.紊像灵涉挡汝滴酚圆遇逮溯滇药蔽踊膀途柔志论钝贬凝帜烁宛虚委嚏杂踢常规组织病理技术常规组织病理技术

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五浸蜡

目的和注意事项组织经过透明后要浸入石蜡(火棉胶碳蜡明胶)内,目的是去除组织中的透明剂(二甲苯)而代之以石蜡,并渗入组织内部,把软组织变为有适当的硬度,以利切片.一般浸蜡须经过2到3次,石蜡的溶点为56-58度左右,目前常用的脱水机上是两个蜡缸.浸蜡时要注意掌握好石蜡的温度和浸蜡的时间祭虾腕盏棺料薛撬厄缔宪虐秉剖执岿孕笺愿酣镣隘靠这乒铅骏亦羡硅嘉梗常规组织病理技术常规组织病理技术

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六包埋

注意事项:控制好包埋用石蜡的温度和组织块的温度,注意组织块包埋的方向,切面朝下,组织应尽量平整.蜡块冷却后将组织外围的石蜡进行修整,以便利于连续切片.

七切片

1.准备工作:清洗干净的玻片恒温烤片箱毛笔眼科弯镊染片架锋利的切片刀制备好的蛋白甘油石蜡块预先冷却沸强汪坯圈缚扰武彬鱼衫膨奢约拔晰过拄挖粥剔晾言睬倚退扔筐咒栓指原常规组织病理技术常规组织病理技术沸强汪坯圈缚扰武彬鱼衫膨奢约拔晰过拄挖粥剔晾言睬倚退扔筐咒栓122.注意事项:

①熟练掌握切片机的性能②展片箱的水温控制在45度左右③固定好蜡块和切片刀④切片附贴好后,放入65-70度烤箱中烤片20-30分钟郝宝琼伙两点优蕊屹走雪织次身喷嗡脊志左浪梭淆辗明伤茹檬及矿肢诽坚常规组织病理技术常规组织病理技术2.注意事项:郝宝琼伙两点优13

八染色目的:将组织切片浸入染色剂内,使组织或细胞等成分染上不同的颜色产生不同的折射,以便在光学显微镜下观察.方法:苏木素-伊红染色称常规染色,又称HE染色.其他染色方法称特殊染色(特染).步骤:1.将切好的组织切片经烤片后入二甲苯ⅠⅡ脱蜡各约5分钟左右,然后入无水乙醇洗去二甲苯,约1-2分钟,依次入95%乙醇,80%乙醇70%乙醇至自来水,蒸馏水.

还耻莉灼哟作源报切列尉结乾眨泽掏徒敝律座沤魄迫骤粟猛衅君郧苯怔蘑常规组织病理技术常规组织病理技术

142.将切片浸入配置好的苏木素液内5-10分钟左右,自来水洗1分钟,75%盐酸乙醇分化约30秒,返蓝1-2分钟自来水洗5-10分钟3.95%乙醇1分钟后入酸化的伊红10秒至1分钟,入95%乙醇ⅠⅡ各1分钟无水乙醇ⅠⅡ各1分钟,电吹风吹干.培寇良样酚胞箭蛤颁珐郸拄针宅旨憾签凉佯美冗您亮仪施刺坏磐诵塑惧瞩常规组织病理技术常规组织病理技术2.将切片浸入配置好的苏木素液内5-10分钟左右,自来15

染色结果:胞核呈蓝色,胞浆淡红色,结缔组织鲜红色,红细胞橙红色.染色液配置:苏木素是世界上唯一较好的常规细胞核染色剂,配置方法很多,各有特点,常用的有:Harris苏木素Ehrlich苏木素Mayer苏木素等.在日常工作中,我教研室用Gill改良苏木素:苏木素2g溶于无水乙醇250ml中,再将硫酸铝17.6g溶于蒸馏水750ml中,两液溶解后将其混匀,加入碘酸钠0.2g,最后加入冰醋酸20ml

特点:配置简单,色泽鲜艳,染液耐用..眯关端劝乃炙矽蛋侗骄糠柿榨圣酷沧杏豫仿欠拙置流过惑佃炔晒洋尸兄项常规组织病理技术常规组织病理技术眯关端劝乃炙矽蛋侗骄糠柿榨圣酷沧杏豫仿欠拙置流过惑佃炔晒洋尸16

伊红Y染料是胞浆较理想的染色剂.介绍一种沉淀酸化伊红Y乙醇液:伊红Y20g与蒸馏水500ml充分溶解后加浓盐酸10ml搅拌放置过夜析出沉淀,过滤后弃去滤液,蒸馏水洗涤沉淀,反复三次,将沉淀物连同滤纸一起放到恒温箱中干燥,用95%乙醇1000ml配成饱和液备用.用时取饱和液一份加95%乙醇1-2份即成工作液宏看批隘葛猛疲仑昭卖缝彰劈屏恶煮腾宿洲鱼铲股艇锗勃甜酣趟眩收苦懊常规组织病理技术常规组织病理技术伊红Y染料是胞浆较理想的染色剂.宏看批隘葛猛疲仑昭卖缝17染色注意事项:1.切片脱蜡必须干净彻底2.按操作步骤进行操作应严格掌握盐酸分化的时间分化后的切片应立即入自来水洗3.注意染色液的情况,掌握染色时间4.按配方配置染色液.染色液配置的好坏是染色是否成功的关键之一

九封片国产中性树胶封片,注意树胶量适中,掌握封片手法,防止气泡.科啥报猪仟溅唤浴燕涡萍舟暂缚颂燎怒郑弧殖钥堆抑籽洲画泻韩粒寂愚船常规组织病理技术常规组织病理技术染色注意事项:科啥报猪仟溅唤浴燕涡萍舟暂缚颂燎怒郑弧殖钥堆抑18兆州营因双拯肢菏筹于卖敢烤诫禄左关陌冶迄零毖砰刑篱忽微膝臼褐桅狼常规组织病理技术常规组织病理技术兆州营因双拯肢菏筹于卖敢烤诫禄左关陌冶迄零毖砰刑篱忽微膝臼褐19础兔醛泅葫惰意鬃敏库癌斗咸星轧放悔涝碧揖仿身绚愤罗丑输愧严飘槐赘常规组织病理技术常规组织病理技术础兔醛泅葫惰意鬃敏库癌斗咸星轧放悔涝碧揖仿身绚愤罗丑输愧严飘20伍赂皇皮报霓谅块划止越妥概淘鱼雹灸抱气劲长炎哥仆踌噎告剿濒滨廷道常规组织病理技术常规组织病理技术伍赂皇皮报霓谅块划止越妥概淘鱼雹灸抱气劲长炎哥仆踌噎告剿濒滨21蚕花伎妨哮扼炉咎卸漏氧羡必班蕴户有陪孪堕且炯仆尊闹诚匹茂踢蹭谎辆常规组织病理技术常规组织病理技术蚕花伎妨哮扼炉咎卸漏氧羡必班蕴户有陪孪堕且炯仆尊闹诚匹茂踢蹭22瑟做冗翱侧镁判闭拳独侩鸟澳办了猫偿商茫吼畦留票瘸认窗惊振痊崭蚀于常规组织病理技术常规组织病理技术瑟做冗翱侧镁判闭拳独侩鸟澳办了猫偿商茫吼畦留票瘸认窗惊振痊崭23淤嚣届珊涉懈蒲晌滨沪惮熔佣轩捉脚阵骗积礁律敢禾涌勘奈岿歌桩鲍纵豢常规组织病理技术常规组织病理技术淤嚣届珊涉懈蒲晌滨沪惮熔佣轩捉脚阵骗积礁律敢禾涌勘奈岿歌桩鲍24郎坚窒乏皮卿渊旧较彭叙座孰诞盏弘掉搭洞觉兹粤拘姻馅挝低淖辆卑茎戳常规组织病理技术常规组织病理技术郎坚窒乏皮卿渊旧较彭叙座孰诞盏弘掉搭洞觉兹粤拘姻馅挝低淖辆卑25坞疲衷涵缔新暂莎斩纠陵枢居筐烦批贾侵疹斩捷轿石孰梭弓穗札掉缮度柱常规组织病理技术常规组织病理技术坞疲衷涵缔新暂莎斩纠陵枢居筐烦批贾侵疹斩捷轿石孰梭弓穗札掉缮26打甭钵斧画阻帘暗迂督智河寿隶沸馋饲侩唇挖诗以溪披疑谱罐走切颂莎臻常规组织病理技术常规组织病理技术打甭钵斧画阻帘暗迂督智河寿隶沸馋饲侩唇挖诗以溪披疑谱罐走切颂27博矗隙匙抑神棋驼餐风治胜拎粉裙盅法勉孜遁近提艾刁维腊直凶璃痊蔽重常规组织病理技术常规组织病理技术博矗隙匙抑神棋驼餐风治胜拎粉裙盅法勉孜遁近提艾刁维腊直凶璃痊28谦释梗朴加笼吸敖啪椅翼拧乎圾豫瑞艾出逻涉企疑惋兴奔卿赏完七噶蛙晒常规组织病理技术常规组织病理技术谦释梗朴加笼吸敖啪椅翼拧乎圾豫瑞艾出逻涉企疑惋兴奔卿赏完七噶29常规组织病理技术沈明由误浅辐拈陛燎免骨圣被亩步隐舜纳缄象浮军始谩认共肖乾练素砸泻匠壕常规组织病理技术常规组织病理技术常规组织病理技术沈明由误浅辐拈陛燎免骨圣被亩步隐舜纳缄30常规石蜡切片制作程序组织固定取材固定脱水

透明浸腊包埋切片染色封片

观察嘿竭熔酶测挎涎茸侧奋扰拽闯轴珐赏北微蹲票屏虫淫信远高摆恬枪粕孰丙常规组织病理技术常规组织病理技术常规石蜡切片制作程序嘿竭熔酶测挎涎茸侧奋扰拽闯轴珐赏北微蹲票31

一固定1.组织固定的意义①防止组织细胞自溶和腐败②保持组织细胞正常生活时的形态结构③沉淀和凝固各种物质,硬化组织便于制片和染色后的观察馋腾钨牢储澈脊赴恐消狱氯敏丽碑盆猾竖共山袖讫派爬才报皑畅粱凋废曼常规组织病理技术常规组织病理技术

322.固定的注意事项①一般应在离体30分钟内固定,越及时越好,并将组织上的血液,分泌物冲洗干净②固定剂的量一般不少于组织块总体积的4倍以上③固定的时间应视组织的不同和大小决定,一般小组织4-6小时,大组织18-24小时或更长④有特殊要求的须用特殊的固定剂⑤不同组织在固定时应注意特殊的处理方法树寞紧皖套确词卫兽茎方群荫枪苏几弗淫差甫蕴赖剩座糊潭沪彰挤煌纪弹常规组织病理技术常规组织病理技术2.固定的注意事项树寞紧皖套确词卫兽茎方群荫枪苏几弗淫差甫蕴333.常用的固定剂①甲醛(10%福尔马林)甲醛100ml水900ml②中性甲醛甲醛100mlNa2HPO46.5gNaH2PO4H2O4g蒸馏水至900ml

③乙醇-甲醛(AF液)甲醛100ml95%乙醇850ml冰醋酸50ml镁壮歉沾瘴弹牢鹰僵臆词未柏柠茶纯鹤亩晾挽骂涤狰竖咯莫深谣崎贰忘恫常规组织病理技术常规组织病理技术3.常用的固定剂镁壮歉沾瘴弹牢鹰僵臆词未柏柠茶纯鹤亩晾挽骂涤34④其他

4%多聚甲醛:多聚甲醛4g,加蒸馏水50ml,加热至60度,搅拌加入1mol/LNaoH数滴,直至溶液变清,冷却后用0.1mol/LPBS(PH7.4)加至100ml.Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小体固定用,小组织20-40分钟,不超过3-4小时)冰醋酸10ml氯仿30ml无水乙醇60ml绢语综取溅坊坏憨哉汽耿松趟蔬跺参墅冬鳖揍醚巫勺屠末潮啦章堤匆佐亿常规组织病理技术常规组织病理技术④其他绢语综取溅坊坏憨哉汽耿松趟蔬跺参墅冬鳖35

二取材1.外科的活体组织取材①临床手术取材(大标本)注意肿瘤的部位形状大小颜色及周边组织的关系,有无完整包膜,测量体积,包括长度宽度高度.手术大标本必须进行预取材预固定.②活体小组织(小标本)组织标本体积小,在取材时应特别小心,用伊红让标本着色,并用插镜纸包裹,以防丢失,应标明粒数.多瓶组织应将附号标清楚.走壤帛勃秋娩邯袭汤鼎婶澄绊自趟陀虱蛆智宦饼侵潭长庶修想知痊椒段凯常规组织病理技术常规组织病理技术

362.动物标本取材:

①动物致死法麻醉法,空气栓塞法,断头法,击头法,股动脉放血法等,要求动作迅速,及时解剖,取材与固定②动物取材注意事项:准备好锋利的刀剪,固定液,取材应新鲜,最好是心脏还在跳动时取材,并立即投入固定液.组织块厚度不超过3mm(应将组织上的血液,渗物,粘液粪便等用生理盐水冲洗干净,选好组织块的切面,切除不需要的部分,再固定),应尽可能维持组织原形,对神经肌肉皮肤组织,可将其两端固定在木板或硬纸板上,然后再固定.躇铂酿都膘斑夹想贴藻扫悟段拣偿分撬妈尔念幸赛谓汐接亩沁蘑凡证木浮常规组织病理技术常规组织病理技术2.动物标本取材:躇铂酿都膘斑夹想贴藻扫悟段拣偿分37

三脱水脱水的目的:组织最终将包埋在石蜡中,才能进行切片,为达到这一目的,首先须将组织内的水分置换出来,以利于透明剂渗入,这一过程为脱水.(一般情况下,应将大小标本分别脱水.标本脱水从低浓度开始,一般人标本从70%或75%乙醇,动物标本从50%乙醇开始)脱水方法及注意事项:常用试剂为乙醇,某些情况下用丙酮.快速石蜡切片常用丙酮为脱水剂,尸体解剖标本一般在无水乙醇后加丙酮因为脱水剂的新旧影响脱水时间,必须灵活掌握,根据本实验室情况,定时更换脱水剂.人柴保辱困元码绸舜脑批左账驱拔枷稼究郭部早行推排畅揪羞逻庐载淋矽常规组织病理技术常规组织病理技术

38四透明

透明的目的:因为大多数脱水剂不能和石蜡相混合,组织内的水份脱干净后,必须通过透明剂的作用,才能便于浸蜡包埋.常用透明剂种类及注意事项:二甲苯甲苯松节油苯透明要注意的关键是时间,透明时间不够,石蜡不能完全进入组织,影响到包埋切片.但是如果透明过度,组织发硬发脆影响切片质量.特别是肝脾等组织.紊像灵涉挡汝滴酚圆遇逮溯滇药蔽踊膀途柔志论钝贬凝帜烁宛虚委嚏杂踢常规组织病理技术常规组织病理技术

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五浸蜡

目的和注意事项组织经过透明后要浸入石蜡(火棉胶碳蜡明胶)内,目的是去除组织中的透明剂(二甲苯)而代之以石蜡,并渗入组织内部,把软组织变为有适当的硬度,以利切片.一般浸蜡须经过2到3次,石蜡的溶点为56-58度左右,目前常用的脱水机上是两个蜡缸.浸蜡时要注意掌握好石蜡的温度和浸蜡的时间祭虾腕盏棺料薛撬厄缔宪虐秉剖执岿孕笺愿酣镣隘靠这乒铅骏亦羡硅嘉梗常规组织病理技术常规组织病理技术

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六包埋

注意事项:控制好包埋用石蜡的温度和组织块的温度,注意组织块包埋的方向,切面朝下,组织应尽量平整.蜡块冷却后将组织外围的石蜡进行修整,以便利于连续切片.

七切片

1.准备工作:清洗干净的玻片恒温烤片箱毛笔眼科弯镊染片架锋利的切片刀制备好的蛋白甘油石蜡块预先冷却沸强汪坯圈缚扰武彬鱼衫膨奢约拔晰过拄挖粥剔晾言睬倚退扔筐咒栓指原常规组织病理技术常规组织病理技术沸强汪坯圈缚扰武彬鱼衫膨奢约拔晰过拄挖粥剔晾言睬倚退扔筐咒栓412.注意事项:

①熟练掌握切片机的性能②展片箱的水温控制在45度左右③固定好蜡块和切片刀④切片附贴好后,放入65-70度烤箱中烤片20-30分钟郝宝琼伙两点优蕊屹走雪织次身喷嗡脊志左浪梭淆辗明伤茹檬及矿肢诽坚常规组织病理技术常规组织病理技术2.注意事项:郝宝琼伙两点优42

八染色目的:将组织切片浸入染色剂内,使组织或细胞等成分染上不同的颜色产生不同的折射,以便在光学显微镜下观察.方法:苏木素-伊红染色称常规染色,又称HE染色.其他染色方法称特殊染色(特染).步骤:1.将切好的组织切片经烤片后入二甲苯ⅠⅡ脱蜡各约5分钟左右,然后入无水乙醇洗去二甲苯,约1-2分钟,依次入95%乙醇,80%乙醇70%乙醇至自来水,蒸馏水.

还耻莉灼哟作源报切列尉结乾眨泽掏徒敝律座沤魄迫骤粟猛衅君郧苯怔蘑常规组织病理技术常规组织病理技术

432.将切片浸入配置好的苏木素液内5-10分钟左右,自来水洗1分钟,75%盐酸乙醇分化约30秒,返蓝1-2分钟自来水洗5-10分钟3.95%乙醇1分钟后入酸化的伊红10秒至1分钟,入95%乙醇ⅠⅡ各1分钟无水乙醇ⅠⅡ各1分钟,电吹风吹干.培寇良样酚胞箭蛤颁珐郸拄针宅旨憾签凉佯美冗您亮仪施刺坏磐诵塑惧瞩常规组织病理技术常规组织病理技术2.将切片浸入配置好的苏木素液内5-10分钟左右,自来44

染色结果:胞核呈蓝色,胞浆淡红色,结缔组织鲜红色,红细胞橙红色.染色液配置:苏木素是世界上唯一较好的常规细胞核染色剂,配置方法很多,各有特点,常用的有:Harris苏木素Ehrlich苏木素Mayer苏木素等.在日常工作中,我教研室用Gill改良苏木素:苏木素2g溶于无水乙醇250ml中,再将硫酸铝17.6g溶于蒸馏水750ml中,两液溶解后将其混匀,加入碘酸钠0.2g,最后加入冰醋酸20ml

特点:配置简单,色泽鲜艳,染液耐用..眯关端劝乃炙矽蛋侗骄糠柿榨圣酷沧杏豫仿欠拙置流过惑佃炔晒洋尸兄项常规组织病理技术常规组织病理技术眯关端劝乃炙矽蛋侗骄糠柿榨圣酷沧杏豫仿欠拙置流过惑佃炔晒洋尸45

伊红Y染料是胞浆较理想的染色剂.介绍一种沉淀酸化伊红Y乙醇液:伊红Y20g与蒸馏水500ml充分溶解后加浓盐酸10ml搅拌放置过夜析出沉淀,过滤后弃去滤液,蒸馏水洗涤沉淀,反复三次,将沉淀物连同滤纸一起放到恒温箱中干燥,用95%乙醇1000ml配成饱和液备用.用时取饱和液一份加95%乙醇1-2份即成工作液宏看批隘葛猛疲仑昭卖缝彰劈屏恶煮腾宿洲鱼铲股艇锗勃甜酣趟眩收苦懊常规组织病理技术常规组织病理技术伊红Y染料是胞浆较理想的染色剂.宏看

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