细胞工程第八核移植技术与动物克隆

细胞工程第八核移植技术与动物克隆21997年2月27日的英国《自然》杂志报道了一项震惊世界的研究成果：1996年7月5Roslin）的伊恩·维尔穆特（Wilmut）领导的一个科研小组，利用克隆技术培育出一只小母羊。这是世界上第一只用已经分化的成熟的体细胞(乳腺细胞)克隆出的羊。克隆羊多利的诞生，引发了世界范围内关于动物克隆技术的热烈争论。它被美国《科学》杂志评为1997年世界十大科技进步的第一项，也是当年最引人注目的国际新闻之一。3名字：Dolly性别：雌编号：6LL3出生日期：1996年7月5日出生地点：英国爱丁堡市罗斯林研究所死亡日期：2003年2月14日死亡原因：被确诊患进行性肺病后处以安乐死创造者：威尔马特及其领导的小组基因母亲：一只芬兰多塞特白面绵羊线粒体母亲：一只苏格兰黑脸绵羊生育母亲：另一只苏格兰黑脸绵羊子女：生育6名，存活5名4克隆羊与体细胞核移植5多利的夭折原因①克隆动物确实存在早衰现象，它们从一出生起身体的衰老程度就类似于被克隆个体，所以它们的寿命被缩短。②克隆技术过程中的一些物理化学伤害导致了多利的健康隐患。③多利属于普通患病死亡。6国际克隆动物进展72002年美国克隆猫诞生82002年，法国克隆兔诞生92003年美国《自然》杂志5月29日报道称，世界上第一头克隆骡子已于一个月前在美国诞生102003年意大利科学家8月6日宣布，世界上第一匹克隆马已经在意大利出生，而且这是世界上首例哺乳动物生下它自己的克隆体。11中国学者周琪在法国完成的克隆大鼠12一、动物克隆？动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体之中，可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。这种不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同的动物个体的技术，就叫做动物克隆。13核移植技术：所谓核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。二、核移植技术14胚胎克隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段的胚胎，叫做胚胎克隆。体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体，叫做体细胞克隆。1.核移植技术的类型152.核移植技术的一般操作程序

核移植克隆哺乳动物的技术操作过程主要包括：核受体和核供体的处理和制备、核移植、重组胚的体内或体外培养、核移植胚胎移入代孕母畜（寄母）等步骤。16（1）核受体细胞的准备去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。这是因为在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表达程序发生重新排列，使已经分化了的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体发育过程。卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MⅡ卵母细胞。二是从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受体。17（2）核供体细胞的准备在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组；其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。

18（3）细胞核移植

常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质内注射是用一个外径5～8μm的注核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的方法。透明带下注射则是把供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合。1920212223（4）激活卵母细胞的激活涉及的因素很多，无论是受精引起的卵母细胞激活还是人工的激活，都会引起卵母细胞发生一系列的反应，这些反应是胚胎发所必需的。其激活原理是通过电刺激、钙离子载体等方法，使卵母细胞从MII期中解放出来，并转到“受精”的状态。24（5）重组胚的体内或体外培养

经融合和激活的重组胚移入中间受体作体内或体外培养，观察重组胚的发育率。羊、牛、猪的核移植胚常采用体内培养方法获得桑椹胚和囊胚，即羊和牛的重组胚用琼脂包埋后移入休情期的母羊结扎的输卵管中体内培养4-7d，发育至桑椹胚和囊胚。猪的核移植重组胚移入同期化受体母猪输卵管内作体内培养7d，发育为囊胚。大鼠、小鼠和兔的核移植胚多作体外培养，发育至桑椹胚或囊胚。25（6）胚胎移植重组克隆胚胎移植的受体母畜要选择皮毛颜色与供体品种不同、繁殖性能强、体格稍大的当地品种，进行同期发情处理，按常规方法移植代孕母畜（寄母）的子宫中，待其发育到产仔。263.核移植技术的应用（1）制备转基因克隆动物，

进行生物药物生产；（2）培育优良畜种，扩大良种种群；（3）开展异种动物克隆，拯救濒危动物；（4）与干细胞技术结合，开展治疗性克隆（5）利用核移植技术，研究生物学的基本问题。273.核移植技术的应用（1）制备转基因克隆动物，

进行生物药物生产；（2）培育优良畜种，扩大良种种群；（3）开展异种动物克隆，拯救濒危动物；（4）