医学遗传学课(诊断)8课件

1、遗传病的诊断Diagnosis of Genetic Disease遗传病的诊断是一项复杂的工作，需要各学科的密切配合常规诊断：即通过对病人的病史、症状、体征和实验室、影像学等检查建立初步诊断。特殊诊断：利用系谱分析、染色体和染色质检查、基因分析、特殊酶和蛋白质生化分析等检查进行诊断。临床诊断症状前诊断出生前诊断一、病史、症状和体征病史采集：遵循准确、详细的原则家族史婚姻史生育史临床诊断症状和体征遗传病特有的症状和体征：外貌特征、身体发育快慢、智力增进情况、性器官及第二性征发育是否异常系统、完整三代以上各个成员的资料死者的死因调查及核查近亲婚配、死胎、流产和新生儿死亡等系谱分析去伪存真患者及家

2、属提供资料遗传咨询医师核实资料两个DMD家系DMD家系1DMD家系2系谱分析孟德尔式遗传病AD遗传病外显率：不完全外显、延迟显性表现度：不规则显性性别影响：从性显性、限性显性基因多效性系谱分析孟德尔式遗传病AR遗传病遗传异质性系谱分析非孟德尔式遗传病线粒体遗传病母系遗传晚发、进行性疾病系谱分析多基因病非孟德尔式遗传病出生缺陷慢性晚发性疾病家族聚集性系谱分析动态突变特殊遗传方式三、细胞遗传学检查即染色体检查或称核型分析智能发育不全、生长迟缓或伴有其他先天畸形者夫妇中有染色体异常，如平衡易位、嵌合体等家族中已发现染色体异常或先天畸形个体多发性流产的妇女及其丈夫原发闭经和女性不育症者无精子症和男性不

3、育症者有两性内外生殖器畸形者疑为先天愚型的患儿及其父母原因不明的智力低下伴有大耳、大睾丸和多动症者35岁以上的高龄孕妇染色体检查的指征1、性染色质检查X性染色质检查Y性染色质检查2、染色体显带技术3、染色体荧光原位杂交(FISH)四、生物化学检查苯丙酮尿症, PKU酶活性检查PAH肝脏血液滤片法Guthrie testFeCl3显色反应苯丙酮酸绿色Guthrie test上海：19811987年对284 396名新生儿进行PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯丙氨酸血症4名。（一）核酸分子杂交斑点杂交直接将待测DNA或RNA样品固定于小孔径硝酸纤维素膜或尼龙膜上，再与已标记的探针杂交South

4、ern印迹杂交斑点杂交（一）核酸分子杂交最经典和应用最广泛的杂交方法，用于分析DNASouthern印迹杂交斑点杂交Northern印迹杂交（一）核酸分子杂交用于分析mRNASouthern印迹杂交斑点杂交Northern印迹杂交原位杂交（一）核酸分子杂交（二）、聚合酶链式反应(PCR)PCR-ASO：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交 使用只有几十个核苷酸的探针，检测被检DNA中的同源序列。由于探针比较短，当被检DNA序列与探针不完全互补，甚至只要有一个碱基的差异，杂交分子就不能稳定形成，因此该方法的灵敏度非常高，特异性也非常好。PCR-ASO ASO斑点杂交PKU, AR正常探针突变探

5、针（二）、聚合酶链式反应(PCR)PCR-ASO：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交PCR-RFLP：PCR-限制性片段长度多态性连锁分析PCR 利用一对或数对特异性引物，将目标DNA扩增；酶切 利用某些限制性内切酶消化PCR产物;电泳 利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。PCR-RFLPRFLP连锁分析PAHSph11.0 kbSphSph9.7 kbPAHSph11.0 kbSphSph7.0 kbSph2.7 kb正常突变RFLP连锁分析PKU，AR1 21 2Sph11.0 Kb 9.7 Kb 7.0 Kb（二）、聚合酶链式反应PCR-ASO

6、：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交PCR-RFLP：PCR-限制性片段长度多态性连锁分析可变数目串联重复序列（VNTR）和短串联重复序列（STR）多态性分析STR连锁分析X R DXS84 geneABCDESTR连锁分析XR DXS84 geneABCDESTR连锁分析ABCDESTR连锁分析ABCDE（二）、聚合酶链式反应PCR-ASO：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交PCR-RFLP：PCR-限制性片段长度多态性连锁分析可变数目串联重复序列（VNTR）和短串联重复序列（STR）多态性分析PCR-SSCP：PCR-单链构象多态性当双链DNA变性为两条单链后，各自会在中性条件下形

7、成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化，甚至只有一个碱基变化，空间构象也有可能发生变化，电泳条带也随之变化。PCR-SSCP1989年，Orita等建立的PCR产物单链DNA凝胶电泳技术。（二）、聚合酶链式反应PCR-ASO：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交PCR-RFLP：PCR-限制性片段长度多态性连锁分析可变数目串联重复序列（VNTR）和短串联重复序列（STR）多态性分析PCR-SSCP：PCR-单链构象多态性PCR产物变性梯度凝胶电泳（DGGE）（二）、聚合酶链式反应PCR-ASO：PCR-等位基因特异性寡核苷酸探针杂交PCR-

8、RFLP：PCR-限制性片段长度多态性连锁分析可变数目串联重复序列（VNTR）和短串联重复序列（STR）多态性分析PCR-SSCP：PCR-单链构象多态性逆转录PCR（RT-PCR）PCR产物变性梯度凝胶电泳（DGGE） （三）、DNA测序 （四）、基因芯片技术 症状前诊断常染色体显性遗传病的杂合子个体往往发病年龄延迟，可通过系谱分析及DNA检查作出症状前诊断出生前诊断在遗传咨询的基础上，对有高风险的妊娠进行产前诊断，确认正常胎儿则继续妊娠至足月生产，是预防遗传病患儿出生的有效手段。需产前诊断的对象：夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者染色体正常，但出生过染色体异常患儿的夫妇；35

9、岁以上的高龄孕妇；夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇；夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇；X连锁遗传病基因携带者孕妇；原因不明的习惯性流产的孕妇；羊水过多的孕妇；夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇；具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。 虽然具备了上述条件，但如果出现先兆流产、妊娠时间过长、有出血倾向者，则不宜做有创性产前诊断，另外应拒绝仅要求做胎儿性别的检查。注意：羊膜腔穿刺有创性检查用注射器经腹取羊水时间：妊娠1020周，最适宜时间1516周流产率：0.51%羊膜腔穿刺有创性检查绒毛取样经宫颈或经腹在绒毛区取绒毛作活检时间：妊娠79周流产率：1%羊膜腔穿刺有创性检查绒毛取样脐静脉穿刺超声检查有异常、羊水培养失败时采用时间：妊娠1921周流产率：23%羊膜腔穿刺有创性检查绒毛取样脐静脉穿刺胎儿镜检查无创性检查母体血清三项筛查对具有较高妊娠风险的孕妇检测血清AFP、uE3、HCG时间：妊娠1520周神经管缺陷： AFPDown综合征： A