临床微生物学肺炎链球菌检验课件

1、致病性球菌葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌链球菌属 链球菌 肺炎链球菌奈瑟菌属 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌1致病性球菌葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌1 肺炎链球菌 (S.pneumoniae)属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。 2 肺炎链球菌 (S.pneumoniae)属链球菌科，链球菌一、生物学性状1形态结构2培养特性3生化反应 4抗原结构5抵抗力特点 6. 变异性3一、生物学性状1形态结构31.形态结构G+，呈矛尖状，成双排列，标本或液体培养中成链状。有荚膜，无鞭毛，不形成芽胞。41.形态结构G+，呈矛尖状，成双排列，标本或液体培养中成链状55

2、2.培养特性 营养要求较高，含血液或血清的培养基中生长。 兼性厌氧，C02 5-10%生长最好。溶血性菌落周围有草绿色溶血环。 液体培养基中培养24h，呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清 62.培养特性 营养要求较高，含血液或血清的培养基中生长。63生化反应 可分解多种糖类，产酸不产气。胆汁溶解试验阳性：加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37.，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。73生化反应 可分解多种糖类，产酸不产气。788Optochin敏感试验阳性：单个菌落涂于血平板上，用optochin纸片贴于接种区中央，35需氧培养过夜，抑菌圈 18mm。9Optochin敏感试验阳性：单

3、个菌落涂于血平板上，用opt10104抗原结构 荚膜多糖抗原：多糖抗原，型特异性，共85型，型引起大叶性肺炎。菌体种属特异性抗原：多糖抗原，存在于细胞壁，称C多糖。在钙离子存在时,C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)的球蛋白结合，发生沉淀。 114抗原结构 荚膜多糖抗原：多糖抗原，型特异性，共85型，5抵抗力特点 较弱，加热56 ，20min即死亡。 对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。 125抵抗力特点 较弱，加热56 ，20min即死亡6. 变异性 荚膜变异：有荚的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。136. 变异性

4、 荚膜变异：有荚的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜20、把小鼠随机分成两组，进行肺炎球菌荚膜形成试验，分别将两株细菌接种于不同组动物腹腔（每组接种一株细菌）。12小时后杀死小鼠解剖，取腹腔作荚膜染色试验。结果有一组只有少量细菌，且未见荚膜主要原因是什么？A、 动物对细菌不敏感 B、 染色试剂不合标准 C、 细菌毒力发生了变异D、 采标本时间过早1420、把小鼠随机分成两组，进行肺炎球菌荚膜形成试验，分别将两二、致病性1致病物质2所致疾病15二、致病性1致病物质151. 致病物质荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及

5、致死作用。161. 致病物质荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用2. 所致疾病 存在于正常人上呼吸道。仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。如大叶性肺炎，支气管炎等。 172. 所致疾病 存在于正常人上呼吸道。17三、微生物学检验 (一) 标本采集 痰、脓液、血液等。18三、微生物学检验 (一) 标本采集18(二) 检验方法及鉴定 1. 直接涂片 革兰氏色染色，荚膜染色19(二) 检验方法及鉴定 1. 直接涂片 192. 分离培养。 胆汁溶菌试验。 菊糖发酵。 Optochin试验。 与草绿色链球菌鉴别202. 分离培养。203. 小鼠毒力试验 有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。21

6、3. 小鼠毒力试验21第四节 奈瑟菌属（neisseria）22第四节 奈瑟菌属22 为一群G-双球菌，严格寄生菌，人是自然宿主 主要致病菌是脑膜炎球菌(merningococcus)和淋病球菌(gonorrhoeae)23 为一群G-双球菌，严格寄生菌，人是自然宿主23一、脑膜炎球菌即脑膜炎奈瑟菌，是流行性脑脊髓膜炎的病原体 24一、脑膜炎球菌即脑膜炎奈瑟菌，24（一）、生物学性状1形态结构2培养特性3生化反应4. 抗原结构5. 抵抗力特点25（一）、生物学性状1形态结构251形态结构G-，肾形成双排列在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。261形态结构G-，肾形

7、成双排列262培养特性营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。易自溶。272培养特性营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的巧克力平板，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。卵黄双抗（EPV）平板：为无色，光滑湿润的菌落。血清肉汤：呈微混浊。28巧克力平板，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。283.生化反应分解葡萄糖、麦芽糖硝酸盐还原反应阴性，不分解尿素氧化酶试验阳性293.生化反应分解葡萄糖、麦芽糖294.抗原结构可分9个血清群，对人致病的主要试A群304.抗原结构可分9个血清群，对人致病的主要试A群305抵抗力特点

8、对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，60 5min死亡。采集标本：注意保温迅速送检。对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。 315抵抗力特点对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，612、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？ A、 低温 B、 保温 C、 防干燥 D、 快速3212、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？32（二）、致病性与免疫性1致病物质2所致疾病3. 免疫性33（二）、致病性与免疫性1致病物质331. 致病物质：内毒素、荚膜，菌毛2. 所致疾病：寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约2%-3%的人表现为流脑症状341. 致

9、病物质：内毒素、荚膜，菌毛343. 免疫性：病原可产生群特异性抗体，但不持久。353. 免疫性：病原可产生群特异性抗体，但不持久。35(三) 微生物学检验 1标本采集 菌血症期病人采集血液 有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液 有脑膜刺激症状，抽取脑脊液 36(三) 微生物学检验 1标本采集 362检验方法直接涂片检查 脑脊液或瘀斑渗出液，干燥固定后革兰染色，若发现G-双球菌，呈肾形成对，可初报372检验方法直接涂片检查37分离培养鉴定 过氧化酶试验：阳性 触酶试验：阴性 血清凝集试验：阳性38分离培养鉴定38二、淋球菌 即淋病奈瑟菌，为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源39二、淋球菌 即淋病

10、奈瑟菌，39（一）、生物学性状1形态结构2培养特性3. 生化反应4抵抗力特点40（一）、生物学性状1形态结构401形态结构G-，球形或肾形，成对排列有荚膜，无芽胞和鞭毛 411形态结构G-，球形或肾形，成对排列412培养特性营养要求高，30-37 生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基初次分离，须5-10%CO2才能生长发育菌落：凸起，光滑、圆形，灰白色，半透明 422培养特性营养要求高，30-37 生长，须在含有血液或血3.生化反应氧化酶试验：阳性触酶：阳性只分解葡萄糖 ，不分解麦芽糖易自溶433.生化反应氧化酶试验：阳性434抵抗力特点抵抗力弱，在干燥环境中仅能存

11、活1-2h，湿热55 5min,100 立即死亡。室温下存活1-2d。对消毒剂极敏感444抵抗力特点抵抗力弱，44（二）、致病性与免疫性1致病物质2所致疾病3. 免疫性45（二）、致病性与免疫性1致病物质451致病物质菌毛，外膜蛋白等 461致病物质菌毛，外膜蛋白等 462所致疾病侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病) 472所致疾病侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病) 473. 免疫性 病后可产生相应的细胞和体液免疫，但免疫力弱，不足以保护再感染。483. 免疫性 病后可产生相应的细胞和体液免疫，但免疫力(三) 微生物学检验49(三) 微生物学检验491标本采集 泌尿、生殖道的各种分泌

12、物、尿液 立即送检501标本采集 泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液502直接涂片镜检急性淋病：嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌具有诊断意义慢性淋病：镜检较困难 512直接涂片镜检急性淋病：嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌3.分离培养鉴定 即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的营养培养基上培养。523.分离培养鉴定 即采集即培养，常用含有两种以上抗氧化酶试验：阳性触酶：阳性（多数奈瑟菌为阴性）发酵葡萄糖，不分解麦芽糖 PCR：灵敏，特异，标本不变限制(不需活菌)53氧化酶试验：阳性53微生物和微生物学检验 郭刚 临床微生物及免疫学教研室54微生物和微生物学检验 绪

13、论 55 绪论 55一、微生物（microorganisms）：概念：一群肉眼看不见的微小生物，包括：细菌、螺旋体、立克次体、衣原体、支原体、放线菌（原核）、病毒（非细胞）、真菌（真核）。原核与真核细胞的区别：细胞核的区别56一、微生物（microorganisms）：概念：一群肉眼看最新生物进化分类法： 古细菌： (Archaeobacteria) 嵌合进化或共生进化 真细菌： 真核生物：57最新生物进化分类法：57微生物与人类的关系：（1）大多数不致病，甚至是对人、动、植物有益和必需的，如：固氮菌；酿酒、制醋、抗生素、肠道正常菌群。（2）病原微生物 : pathogenic microor

14、ganisms58微生物与人类的关系：（1）大多数不致病，甚至是对人、动、植物二、微生物学(microbiology)：微生物的进化分类、生命活动规律及与动植物、人类、自然相互关系。按研究对象分：细菌、病毒、真菌学按应用领域分：工业、农业、医学、兽医按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、 微生态学 等 59二、微生物学(microbiology)：微生物的进化分类、医学微生物学(medical microbiology)：与医学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免疫性及有关技术和理论的应用。临床微生物学(clinical microbiology)：测重研究感染性疾病诊断方法，提供诊断依据

15、和指导用药。60医学微生物学(medical microbiology)：与三、医学微生物学发展简史1、微生物学的经验时期：（）酿酒、制醋、腌腊等食品生产、保存；（）师道南天愚集：清乾隆年间，“东死鼠，西死鼠，人见死鼠如见虎。鼠死未几日，人死如圻堵”； “三人行未十步路，忽死两人横截路” （）人痘接种法：免疫最早概念。61三、医学微生物学发展简史1、微生物学的经验时期：612实验微生物学时期（17世纪始）： 显微镜培养基（） 微生物的发现：列文虎克、巴斯德（发现微生物的作用，创立巴氏消毒法）、李斯特、郭霍氏（固体培养、染色技术） 郭霍氏法则：、。逐渐被淘汰。 新的病原确定方法：核酸确定法 （）

16、 免疫学的兴起、分离：牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动物血清治愈白喉。（） 抗生素的发现：目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高 622实验微生物学时期（17世纪始）：623 现代微生物学时期：近二、三十年（1）新病原微生物的发现a传统病原卷土重来；b新型病原。（2）致病机理的深入研究a采用新技术；b. 各种致病因素的分子机理及调控。633 现代微生物学时期：近二、三十年63（3）诊断技术的发展：三大标记技术各种分子生物学技术：核酸杂交，PCR，微量化，自动化。（4）各种新型疫苗的研制传统疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗。（5）免疫学独立远远超越感染免疫的范畴。64（3

17、）诊断技术的发展：64思考：（）预测微生物学发展下一阶段；（）目前科学界研究热点？65思考：654基因组微生物学（）微生物在基因组前时代在生物学研究中的地位； （）结构简单，可做为模型，模式生物；（）在基因组时代，作为急先锋；（）微生物基因组的研究成功，必然极大地改变微生物学科现状。因此，微生物学研究正面临前所未有地机遇和挑战。从上看出，医学微生物学的发展，也是各种技术方法的发展，也是临床微生物学的发展历史。 664基因组微生物学66四、 临床微生物学的任务研究感染性疾病的病原体特征： 传统的病原微生物 条件致病菌提供快速、准确的病原学诊断；指导合理使用抗生素；目前检验科的主要任务。对医院感染

18、进行监控。67四、 临床微生物学的任务研究感染性疾病的病原体特征：67五、临微学习方法：重要性：与毕业后工作紧密相关。（）平时注意预习、复习；（）对内容上，紧紧围绕诊断，诊断又是由各种典型特性建立的方法来进行的 抓特性、去共性（）注意新动向。 68五、临微学习方法：重要性：与毕业后工作紧密相关。68第一篇微生物学 细菌学总论69第一篇微生物学 细菌学一、细菌(bacterium)的形态与结构（一）形态：个体微小、形态各异球菌（coccus）杆菌 (Bacillus) 弧菌与弯曲菌螺旋菌及螺旋体不规则形。70一、细菌(bacterium)的形态与结构（一）形态：个体微（二）结构： 71（二）结构

19、：71基本结构：包括胞壁、胞膜、胞浆及核质细胞壁： 主要成分肽聚糖。72基本结构：包括胞壁、胞膜、胞浆及核质72 乙酰胞壁酸 聚糖骨架 .4糖苷键 乙酰葡糖胺 四肽侧链 五肽桥（苷氨酸）菌肽聚糖厚、层数多、立体状坚固。 73 乙酰胞壁酸7图 金黄色葡萄球糖细胞细胞壁的肽聚糖结构图 大肠杆菌细胞壁的肽聚糖结构74图 金黄色葡萄球糖细胞细胞壁的图 大肠杆菌细胞壁的肽聚糖 膜磷壁酸菌细胞壁 壁磷壁酸 特殊结构 表面蛋白：SPA、M蛋白菌细胞壁 磷脂特殊结构 脂蛋白 类脂：毒性部分(外膜) 脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异 特异多糖：种和型特异75 膜磷壁酸75和菌细胞壁差异：特 征革

20、兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 强度较坚韧较疏松 厚度厚，2080nm薄，510nm 肽聚糖层数多，可达50层少，13层 肽聚糖含量多，可占胞壁干重5080%少，占胞壁干重1020%磷壁酸 +-外膜 - + 结构三维空间（立体结构）二维空间（平面结构）76和菌细胞壁差异：特 征革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 强型细菌：细胞壁缺陷型细菌。 高渗培养基中：油煎蛋样菌落。 在临床上注意型带来的漏诊。77型细菌：细胞壁缺陷型细菌。772. 特殊结构荚膜(capsule)：（）保护作用；（）致病作用：侵袭力；（）免疫原性；（）鉴别与分型。 782. 特殊结构78鞭毛(flagellum)：运动器官，抗原。79鞭毛

21、(flagellum)：运动器官，抗原。79菌毛(Pilus)：（）普通菌毛：粘附素；（）性菌毛：根，长而粗，菌转移质粒，耐药及毒力质粒。 80菌毛(Pilus)：（）普通菌毛：粘附素；（）性菌毛：芽胞(Spore)：不利环境中的一种抵抗形式，是休眠体而非繁殖体。81芽胞(Spore)：不利环境中的一种抵抗形式，是休眠体而非繁二、细菌的繁殖与新陈代谢：掌握几个概念：自养菌、异养菌；需氧菌、专性厌氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌。82二、细菌的繁殖与新陈代谢：掌握几个概念：82专性厌氧菌有氧不生长，原因有二：厌氧菌缺乏细胞色素与细胞色素氧化酶，因此不能氧化那些氧化还原电势较高的氧化型物质。厌氧菌缺乏过

22、氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶,不能清除有氧环境下所产生的超氧离子（O2-）和过氧化氢（H2O2），因而难以存活。83专性厌氧菌有氧不生长，原因有二：83 群体细菌的生长繁殖曲线：迟缓期、对数期、稳定期、衰退期84 群体细菌的生长繁殖曲线：84四、消毒与灭菌掌握几个概念： 消毒（Disinfection）：杀灭病原微生物的方法。 灭菌（Sterilization）：杀灭物体上所有的微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的方法。 无菌（Asepsis）：物体上或容器内无活菌存在的意思。 防腐（Antisepsis）：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。85四、消毒与灭菌掌握几个概念：85

23、 五、微生物的遗传变异（一）遗传变异的物质基础 染色体 质粒（plasmid）：细菌存在于染色体外的少部分（约12%）DNA，可决定细菌的一些生物学特性。 转位因子：插入顺序、转座子 、转座噬菌体 86 五、微生物的遗传变异（一）遗传变异的物质基础86 质粒的生物学性质：1质粒并非细菌生存所必不可少的遗传物质。 2质粒的传递（转移）是细菌遗传物质转移的一个重要方式。 3质粒可自行失去或经人工处理而消失。 4质粒可以独立复制。 5可有几种质粒同时共存在于一个细菌内。87 质粒的生物学性质：87（二）细菌的变异现象 形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异88（二）细菌的变异现象88（三

24、）细菌变异的机制 突 变 基因的转移和重组转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体菌的部分遗传特性。转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。接合(conjugation)是两个通过直接接触，在暂时的沟通中进行基因转移的过程。89（三）细菌变异的机制899090(四)遗传变异研究的实际意义在细菌分类上的应用在诊断中的应用在预防中的应用在治疗中的应用检查致癌物质的作用在遗传工程方面的应用91(四)遗传变异研究的实际意义91六、微生物的致病性与感染（一）微生物与宿主的关系 常居菌 正常菌群 过路菌 （）抵抗力下降； （）长期化疗、放 疗、 条件致病菌： 免疫抑制剂患者； （）外伤； （）菌群失调：菌群失调症。92六、微生物的致病性与感染（一）微生物与宿主的关系