实验植物的组织培养

1、实验11 植物的组织培养第一页，共二十二页。大多绿色开花植物靠种子繁殖（有性繁殖），不用种子繁殖（无性繁殖）的方法有： 组织培养营养繁殖扦插嫁接压条 无性繁殖第二页，共二十二页。组织培养就是取一部分植物组织（外植体），如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。一、组织培养概述1.概念第三页，共二十二页。2、植物组织培养的原理是什么？ 植物细胞具有全能性，即生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。3.植物组织培养的基本过程:离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根芽植物体生长发育第四页，共二十

2、二页。植物组织培养过程示意图 烟草植株根细胞培养形成愈伤组织发育成幼胚长成幼苗成熟植株第五页，共二十二页。4.植物组织培养条件: 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。细胞分裂素多，生长素少诱导芽的生成细胞分裂素少，生长素多诱导根的生成细胞分裂素适中，生长素少愈伤组织只生长不分化细胞分裂素生长素比例合适诱导根芽的分化第六页，共二十二页。二、实验培养基配制外植体的选取消毒接种培养移栽和栽培等。第七页，共二十二页。1、实验材料（1）MS培养基：大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co有机成分：

3、甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等（3）发芽培养基： MS培养基+BA+NAA+琼脂+蒸馏水（2）萘乙酸NAA、苄基腺嘌呤BA（4）生根培养基： MS培养基+NAA+琼脂+蒸馏水第八页，共二十二页。2、步骤1.取外植体超净台上将无菌幼苗(无菌水冲洗)切段，每段至少1张叶片2.生芽培养生芽培养基中，放入1-3段切段（茎一部分插入培养基），盖上封口膜。日光灯下保持1825的温度培养，每天光照不少于14.5h。3.生根培养23周后，将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。第九页，共二十二页。5.定植将苗转移到土中培养。4.适应锻炼将苗转移至草炭土或蛭石中继续生长，用玻璃罩或塑料布

4、保持80以上的湿度，23天后打开减低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。第十页，共二十二页。幼苗外植体丛芽生根锻苗消毒 接种愈伤组织胚状体定植 植株生根培养生芽培养第十一页，共二十二页。1.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？不相同天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，效果显著。课后题第十二页，共二十二页。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微

5、量元素两大类。4. 同LB培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？3.如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应采取什么措施保证样本不被污染?（1）操作环境清洁（2）植物样本的洁净（3）操作敏捷迅速第十三页，共二十二页。第十四页，共二十二页。 脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。 再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。愈伤组织第十五页，共二十二页。1、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁污染途径第十六页，共二十二页。污染的预防措施（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁第十七页，共二十二页。第十八页，共二十二页。思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高 利于根和愈伤组织的形成适中 利于根芽的分化第十九页，共二十二页。1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？第二十页，共二十