罗氏试剂盒说明书 Anti-CCP 05115671001V1

1、05115671001V1抗环瓜氨酸肽抗体（AntiCCP） 2008-02, V 3 中文 6/6 Elecsys 和 cobas e 分析仪05031656 190 100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601请注意不同检测系统得到的Anti-CCP检测结果会有差异，因此建议实验室使用固定的检测方法。不同检测方法的结果不具有可比性，并由此可能造成临床的判断错误。因此实验室的结果报告应包括“本实验结果由Elecsys Anti-CCP检测得到，其它厂商的检测结果不能通用。”主要用途Elecsys

2、 Anti-CCP试剂盒用于体外半定量检测人体血清或血浆中Anti-CCP。结合Anti-CCP与其他临床和实验室的检查结果，可以作为类风湿性关节炎的辅助诊断指标。Elecsys和cobas e 免疫分析仪的工作原理是电化学发光免疫分析“ECLIA”。临床应用类风湿性关节炎是一种最常见的自身免疫性疾病，影响全球约0.5-1%的人口。它是一种全身性疾病，以关节囊膜慢性炎症和关节进行性退化为主要临床表现，最终可导致残疾。类风湿性关节炎的临床诊断主要依赖临床症状和类风湿因子、C反应蛋白等实验室检测。但是类风湿因子是一种非特异性抗体，在健康的老年人、自身免疫性疾病和感染性疾病患者体内都可能存在。C反应

3、蛋白是一种常用的炎症标志物。最近证实，瓜氨酸是自身抗体的一种靶抗原，类似于抗核周因子，抗角蛋白抗体，抗丝集蛋白抗体等。通过检测类风湿性关节炎患者的血清，发现Anti-CCP对类风湿性关节炎具有高度的特异性。使用多重的瓜氨酸肽的第二代检测大大提高了其临床性能2，3，4，5，6，7，8，9，10，11。Elecsys Anti-CCP是使用一组环瓜氨酸肽的第二代检测方法。检测原理IgG捕获法，总检测时间：18分钟第一次孵育：15l样本、生物素化CCP以及钌复合物标记a的单克隆抗人IgG抗体一起孵育，当样本中存在特异性CCP抗体时，形成抗原抗体复合体。第二次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒进行孵育，抗

4、原抗体复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作用结合。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。Elecsys软件自动通过定标曲线计算得到检测结果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶6.5ml；包被链霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1生物素化CCP（灰色瓶盖），每瓶9ml：生物素化CCP（人工合成）约1.1g/mL，磷酸盐缓冲液10

5、0 mmol/L，pH5.0; 防腐剂。R2 钌复合物标记的抗人IgG（黑色瓶盖），每瓶10ml：钌复合物标记的单克隆抗人IgG抗体（鼠源）0.75 g/mL；磷酸盐缓冲液100 mmol/L，pH6.0; 防腐剂。Cal1 冻干的Anti-CCP定标液1（白色瓶盖），2瓶，每瓶1.0ml溶解液溶解： Anti-CCP抗体（人源）血清基质中浓度约20U/mL。Cal2 冻干的Anti-CCP定标液2（黑色瓶盖），2瓶，每瓶1.0ml溶解液溶解：Anti-CCP抗体（人源）血清基质中约浓度200U/mL。定标：不同批号试剂条码中编码有相应批号的定标值。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒

6、时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。所有人源性物质必须视为有潜在感染性。定标液（Cal1, 2）由献血员提供，经特殊制备而成，经检测HBSAg、HCV抗体、HIV抗体，均为阴性。所应用的检测方法经FDA认可或符合欧洲法令98/79/EC附件II列表A。但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人样本一样仔细处理。接触者必须遵循健康专业机构相应的法规12，13。若试剂超过保质期，则不能再使用。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒试剂盒（M,R1和R2）为即用型。定标液准确添

7、加1.0ml蒸馏水复溶瓶内物质，垂直加盖静置15分钟。充分混匀并避免产生气泡。将复溶后的定标液转移到CalSet Vials中，贴上标签。立即存放于-20C。试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于28。请垂直摆放Elecsys Anti-CCP试剂盒（M,R1,R2），确保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：试剂稳定性未开封试剂，28有效期内均可使用放置分析仪上1周或最多4周（冰箱和试剂盘内交替保存），58小时（15-25）定标液稳定性冻干定标液有效期内均可使用复溶后定标液（-20）4周（只可冻融一次）放置试剂盘上（2025）最多2小时融解后只能使用一次定标液要垂

8、直保存!确保定标液没有附着在瓶盖上。样本的采集和准备只有下列类型的样本才可检测，且样本量要充足。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂和K3-EDTA抗凝的血浆都适用。标准：斜率0.9-1.1，截距0.95。稳定性： 2-8C可保存3天；-20C可保存1月。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀和冰冻的样本检测前必须先作离心处理。热灭活的样本，添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须

9、室温平衡(2025C)。由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。26 小瓶标签4 个 有标签的有盖小空瓶需要的物品（未提供）货号05031664, PreciControl Anti-CCP, 规格2 x 2 mL，各含PreciControl Anti-CCP 1和2货号11776576, CalSet Vials, 有盖小空瓶规格2 x56实验室基础设备Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪蒸馏水或去离子水Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材

10、料：货号11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液货号11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,测量池洗液 货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液货号11933159, SysClean 适配器 货号11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反应管货号11706799, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：货号04880340,ProCell M,

11、2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293, CleanCell M, 2 x 2 L测量池洗液 货号03023141, PC/CC杯, 12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针。货号12102137,反应杯/吸头 组合装,84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器 M所有分析仪需要：货号11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL

12、 系统清洗液 检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。将定标液Cal1和Cal2 放在分析仪的样本架上。分装的定标液每次只能进行一次定标。定标溯源性：该方法可溯源至商品化的第二代A

13、ntiCCP检查方法。每套Elecsys AntiCCP试剂的条码标签上均含有其批号特异的定标信息。使用Elecsys AntiCCP Cal1和Cal2定标，可调整符合分析仪要求的预定义定标曲线。定校频率：不同批号试剂须使用Elecsys Anti-CCP Cal1, Cal2重新定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）根据需要：如失控。质控室内质控可使用Elecsys PreciControl Anti CCP 1和2。也可以使用其他合适的质控品。质控品1和质控品2至少每24小时内检测一次

14、，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。必要时，可重复检测相关样本。计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度，单位U/mL。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素427mol/L或25 mg/dl）, 溶血（血红蛋白0.348mmol/L或 0.5g/dl）, 脂血(脂肪乳剂 1500mg/dl）和生物素123nmol/L或30ng/ml的影响。回收率标准：25 U/mL样本回收率在初始值的15之内。对于接受高剂量生物素治疗的患者（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集

15、样本。浓度达150IU/ml的类风湿因子对检测无影响。IgG（高球蛋白血症）病理性的非特异性IgG对检测有影响。但是有报道类风湿性关节炎和-球蛋白病患者的检测结果很低14。高球蛋白血症可能导致Anti-CCP检测结果的假阴性。因此Anti-CCP检测在高球蛋白血症患者中不能用以诊断。体外对18种常用药物以及甲氨喋呤和氢化可的松进行试验未发现会影响检测。由于检测试剂中含有单克隆鼠抗体，因此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者样本检测结果可能有误。试剂添加了减少稀有血清和试剂成份发生了免疫交叉反应的物质。罕见病例中出现的高浓度钌抗体会影响检测结果。少数病例中极高浓度的链霉素抗体和钌会影响检测结果。

16、试剂含有的添加成份减少了上述因素的影响。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。检测范围7-1000U/mL（通过最低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低于检出限的值报告1000 U/mL。稀释Anti-CCP浓度超过检测范围的样本可以用Anti-CCP阴性血清进行手工稀释。推荐稀释比是1：2到1：5。手工稀释后，检测结果要乘以稀释倍数。注意：自身抗体具有异质性，某些样本可能会出现非线性稀释现象。参考范围使用Elecsys Anti-CCP检测420例表面健康者，792例确诊为类风湿性关节炎的患者及907例其他风湿性和非风湿性疾病患者，得到最佳Cut-off

17、值为17 U/mL；Anti-CCP浓度 17 U/mL判断为阳性（具体数据详见“临床灵敏度和特异性”章节）每个实验室应通过实验确定参考范围的适用性，必要时建立本实验室的参考范围。特殊的性能指标试剂在分析仪上的性能试验数据如下。各实验室由于具体情况不同，所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人血清样本和质控品验证重复性，按照CLSI的EP5-A2执行：每天2次，共21天 (n=84)；批内精密度n=21。下面是获得的结果。b)PC=PreciControl分析灵敏度功能灵敏度8 U/mL功能灵敏度是批间检测CV20%时得到的最低分析物浓度。最低检出限约7 U/mL最低检出

18、限是最低浓度标准品+2SD得到的浓度（厂商定标品1+2SD，批内精密度，n=21）。临床灵敏度和特异性通过检测792例确诊为类风湿性关节炎的患者，420例表面健康者及907例其他风湿性和非风湿性疾病患者，得到最佳Cut-off值为17 U/mL。该Cut-off值的诊断灵敏度为67.7%，特异性为97.0%。ROC曲线下面积为0.85。通过标准的临床生化和血液学检测以及主要的体格检查来确定420例表面健康志愿受试者（213男性，207女性）的健康状况。以医学问卷的形式排除有风湿性或自身免疫性疾病家族史的志愿者。这批确诊为类风湿性关节炎的患者包括未知病程长短的患者、已知病程超过2年和不足2年的患

19、者。病程计算以从风湿病学专家确诊开始。NElecsysAnti-CCP检测阳性样本数灵敏度%RA样本总数79253667.7RA,2年37827572.8临床特异性NElecsysAnti-CCP检测阳性样本数灵敏度%非RA样本总数13274097.0健康人群420499.0非RA疾病总数9073696.0非RA疾病分组结缔组织病166994.6血管炎47491.5脊椎关节病146894.5其他风湿性疾病108298.1肠炎520100非风湿性自身免疫性疾病31293.5肾衰竭31196.8肝硬化26292.3传染病300897.3方法学比较Elecsys Anti-CCP检测方法和商品化第二

20、代Anti-CCP ELISA检测方法进行比较的样本与临床性能评价的样本相同。两种检测方法均按照厂商所提供的试剂说明书进行操作。Cut-off值为17 U/mL的结果如下:*N=2119商品化的第二代Anti-CCP检测方法阳性阴性Elecsys Anti-CCP检测方法阳性54927阴性421501总数结果一致样本数一致性（%）95%置信区间阳性一致性59154992.990.8-94.9阴性一致性1528150198.297.5-98.9在临床亚群中的一致性非RA组1327128696.996.0-97.8RA组79276496.595.2-97.8所有样本一致性2119205096.79

21、5.9-97.5*各实验室由于具体情况不同，所得到的数据可能会稍有差异。所获得的数据做ROC分析。Elecsys Anti-CCP检测的ROC曲线下面积为0.85（95%置信区间:0.83-0.87）,商品化第二代Anti-CCP ELISA检测的ROC曲线下面积为0.82(95%置信区间:0.80-0.84)，证明两种方法在临床应用方面无差异。参考文献1. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Rheumatoid arthritis.Cell 1996;85:307-310.2. Raptopoulou A, Sidiropoulos P, Katsourak

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