食品安全地方标准 玉米赤霉烯醇测定

1、PAGE 6食品安全地方标准植物源性食品中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了植物源性食品中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮液相色谱-质谱/质谱 的测定方法。本标准适用于成品粮及其加工制品（面粉、淀粉等）、食用植物油脂及其加工制品等中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的定性确证和定量测定。本标准方法的检出限见附录A中表A.1。2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8

2、170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 SN/T 0800.1 进出口粮油、饲料检验 抽样和制样方法 GB/T 5524 植物油脂检验 取样、扦样法3 原理试料中-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮经三氯甲烷提取，采用碱性水溶液萃取并调至中性后，再经二氯甲烷萃取后，使用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法量。4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 三氯甲烷（CHCl3）。4.2 二氯甲烷（CH2Cl2）。4.3 无水硫酸钠（Na2SO4）。4.4氯化钠（NaCl）。4.5氢氧化钠（NaOH）。4.6一水合柠檬酸（C6H8O7H2O）。4.7 甲醇

3、（CH3OH），色谱纯。4.8 乙腈（C2H3N），色谱纯。4.9 标准品：-玉米赤霉烯醇（C18H24O5，CAS：36455-72-8）、玉米赤霉烯酮（C18H22O5，CAS：17924-92-4），纯度均大于99%。4.10 饱和氯化钠溶液：称取36 g氯化钠（4.4）溶于100 mL水中。4.11 2 %氢氧化钠溶液：称取20 g氢氧化钠（4.5）用水溶解并定溶至1 L。4.12 106 g/L柠檬酸溶液：称取106 g一水合柠檬酸（4.6）用水溶解并定溶至1 L。4.13 乙腈-水溶液（1+1，体积比）：取500 mL乙腈（4.8）和500 mL水混合。4.14 甲醇-水溶液（1+

4、1，体积比）：取500 mL甲醇（4.7）和500 mL水混合。4.15 标准储备液：分别准确称取-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮标准物质（4.9）适量（精确至0.000 1 g）用乙腈溶解，配制成浓度为1 000 mg/L的标准储备液。0 4 避光保存，有效期为6个月。4.16 标准中间液：准确量取标准储备液1 mL于100 mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（4.13）定容至刻度，混匀备用。0 4 避光保存，有效期为1个月。4.17 混合标准工作液：分别准确量取-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮标准储备液适量，于一组容量瓶中，用乙腈-水溶液（4.13）稀释至刻度，配制成浓度为0.500 ng/mL、1.0

5、0 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL的标准工作液。此溶液现用现配。4.18 滤膜：孔径为0.22 m，有机相型。仪器与设备5.1液相色谱-质谱/质谱仪。5.2分析天平：感量0.0001 g和0.01 g。5.3旋转蒸发仪。5.4 氮吹仪。5.5 振荡提取器。5.6 漩涡混合器。5.7 分液漏斗：125 mL。5.8 实验室常用玻璃器皿。分析步骤6.1试样制备与保存根据不同类型的样品，分别按SN/T 0800.1和GB/T 5524 的要求制备试样。固体样品粉碎后全部通过0.425 mm的标准网筛。6.2提取称取试料10 g（精确至0.01 g）于10

6、0 mL具塞锥形瓶中。固体样品加入50 mL三氯甲烷（4.1），植物油脂样品加入35 mL三氯甲烷（4.1），盖紧塞子，于振荡提取器上（5.5）振荡提取30 min。净化使用中速滤纸过滤提取液（7.1）并用三氯甲烷定容至50 mL（V1）。吸取25.0 mL提取液（V2）至125 mL分液漏斗（5.7）中，加入5 mL饱和氯化钠溶液（4.10），混匀，再加入25 mL 2%氢氧化钠（4.11）溶液，剧烈振荡1 min，静置分层，弃去三氯甲烷层。再用25 mL 三氯甲烷重复萃取一次，弃去三氯甲烷层。加入25 mL柠檬酸溶液（4.12），混匀。再加入25 mL二氯甲烷（4.2），剧烈振荡1 min

7、，静置分层。将二氯甲烷层溶液通过装有5 g无水硫酸钠（4.3）的漏斗。再用25 mL二氯甲烷重复萃取一次，操作同上。另用5 mL二氯甲烷冲洗无水硫酸钠，合并二氯甲烷萃取液至浓缩瓶中，40 以下于旋转蒸发仪上浓缩至近干。残留物用5 mL二氯甲烷溶解并转移至玻璃离心管中，于40 以下用微弱氮气吹干，残留物用1.0 ml乙腈-水溶液（4.12）溶解，于漩涡混合器上（5.6）漩涡混匀后，过0.22 m有机滤膜（4.18），供仪器测定。6.4 空白试验除不加试料外，采用完全相同的分析步骤。测定6.4.1 仪器参考条件6.4.1.1 色谱参考条件色谱参考条件如下：色谱柱：C18色谱柱，100 mm2.1

8、mm，粒径1.8 m，或性能相当者；柱温：40 ；流动相、流速及洗脱梯度：流速0.3 mL/min；洗脱梯度见表1；进样量：30 L。表1 流动相、流速及洗脱梯度时间/min流速/（mL/min）A相：水/%B相：乙腈/%0.00.350505.00.325755.10.3010010.10.3010010.20.3100018.10.310006.4.1.2 质谱参考条件质谱参考条件如下：a）电离方式：电喷雾电离；b）扫描方式：负离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM）；d）离子源温度：350 ；e）干燥气流量：10 L/min；f）监测离子、去簇电压及碰撞能量：见表2。表2 -玉米赤霉

9、烯醇和玉米赤霉烯酮监测离子、去簇电压及碰撞能量化合物名称监测离子去簇电压碰撞能量-玉米赤霉烯醇319/275a；319/160-160-15；-30玉米赤霉烯酮317/175a；317/131-150-25；-25 a定量离子6.4.2 定性分析按照7.4.1仪器参考条件对标准溶液和样品进行测定，如果样品的色谱峰与标准物质色谱峰保留时间偏差5 %范围内、定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相对丰度偏差在允许范围内（相对丰度偏差不超过表3的规定），则可判定样品中存在相应的测定物。标准溶液的MRM色谱图见附录A。表3 定性离子相对丰度最大允许偏差 单位：%相对离子丰度502050102010最

10、大允许偏差202530506.4.3 定量测定按浓度由小到大的顺序，依次分析混合标准工作液（4.17）按照7.4.1仪器参考条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。同时按相同条件对样品测定液进行测定，利用标准曲线对样品中被测组分按照外标法进行定量。高浓度样品应适当稀释，保证被测组分在标准曲线范围内。结果计算试料中分析物的含量，按式（1）或用仪器数据处理机计算。（1）式中：X i 试料中被测组分的含量， 单位为毫克每千克（mg/kg）；ci 从标准曲线上得到的试样溶液中分析物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1 提取液定容的体积，单位为毫升（mL）；V2 吸取三氯

11、甲烷提取液的体积，单位为毫升（mL）；V3 试样溶液最终体积，单位为毫升（mL）；m 试料的质量，单位为克（g）。7.2 平行测XX果用算术平均值表示，数值修约按照GB/T 8170执行，保留两位有效数字。8 回收率及精密度回收率及精密度测定数据见附录B。8.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测XX果的绝对差值不超过算术平均值的15%。8.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测XX果的绝对差值不超过算术平均值的20%。9 检出限和定量限以样品取样量为10 g，确定-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮检出限分别为0.002 mg/kg和0.001 mg/kg、定量限分别为0.006 mg/kg和0

12、.003 mg/kg。（资料性附录） 标准溶液多反应监测（MRM）色谱图 图 A.1 0.5 ng/mL标准溶液MRM色谱图1-玉米赤霉烯醇、2玉米赤霉烯酮PAGE 3 （资料性附录）实验室内回收率及重复性测定数据表B.1实验室内回收率及重复性测定数据样品名称被测组分添加浓度/（g/kg）回收率范围/%相对标准偏差（RSD）/%玉米-玉米赤霉烯醇6.076.496.59.0412.077.292.36.4460.075.395.68.58玉米赤霉烯酮3.076.398.39.266.082.398.66.8060.084.397.65.92大豆-玉米赤霉烯醇6.079.498.58.3612.

13、083.297.36.0460.080.398.97.85玉米赤霉烯酮3.078.398.98.926.085.597.95.7660.085.998.45.52水稻-玉米赤霉烯醇6.078.496.98.0912.082.496.35.9160.081.394.96.39玉米赤霉烯酮3.077.397.98.836.084.596.95.5360.084.697.45.05花生-玉米赤霉烯醇6.074.291.98.4412.072.491.37.8960.078.390.95.95玉米赤霉烯酮3.076.392.97.856.076.592.46.6660.080.691.95.31玉米淀

14、粉-玉米赤霉烯醇6.073.292.48.5212.071.689.37.4060.073.389.37.42玉米赤霉烯酮3.072.691.58.716.072.590.17.5460.075.691.47.36表B.1（续）样品名称被测组分添加浓度/（g/kg）回收率范围/%相对标准偏差（RSD）/%面粉-玉米赤霉烯醇6.071.290.48.4112.073.389.56.8860.072.090.17.71玉米赤霉烯酮3.072.790.47.806.074.589.16.4860.073.691.47.70大豆油-玉米赤霉烯醇6.070.988.48.0612.071.389.88.

15、4460.071.990.47.56玉米赤霉烯酮3.071.590.38.246.072.889.97.3760.072.789.57.69玉米色拉油-玉米赤霉烯醇6.071.490.58.3712.073.391.88.0460.073.992.67.35玉米赤霉烯酮3.072.891.38.016.072.690.17.5060.073.590.57.57芝麻油-玉米赤霉烯醇6.070.189.08.8912.072.190.48.2260.071.790.47.64玉米赤霉烯酮3.072.991.68.066.070.688.17.7760.072.589.57.76表B.2实验室间回收

16、率及重复性测定数据样品项目添加水平/（g/kg）不同实验室平均测定回收率/%平均值/%RSD/%ABCD玉米-玉米赤霉烯醇6.075.50 89.1598.33 87.4887.66 10.70 1289.58 87.0579.58 86.2285.41 4.99 6089.38 85.8983.22 86.1386.16 2.93 玉米赤霉烯酮3.091.33 86.0579.33 85.8885.57 5.74 6.081.50 90.0573.83 90.1581.79 9.58 6091.47 90.6875.23 91.3985.79 9.30 表B.2（续）样品项目添加水平/（g/

17、kg）平均测定回收率/%平均值/%RSD/%XX省质检院XX商检XX市质检院本所大豆-玉米赤霉烯醇6.089.83 89.8281.17 88.4886.94 4.78 1293.33 89.7274.75 88.7285.93 9.50 6092.05 88.3884.88 88.1888.44 3.31 玉米赤霉烯酮3.081.67 89.4880.33 86.3283.83 5.04 6.074.33 91.2373.83 90.5779.80 12.18 6080.78 92.4584.95 91.8786.06 6.55 大米-玉米赤霉烯醇6.090.83 88.7292.00 86.5590.52 2.66 1275.92 89.4290.67 88.4285.34 8.03 6091.22 87.8994.55 87.6091.22 3.58 玉米赤霉烯酮3.090.67 86.9579.67 85.9885.76 5.33 6.082.36 89.8393.17 89.7