形态病理课件

1、形态牛君星目录组织包埋切片1染色2冰冻切片3组织包埋切片组织包埋切片简介组织包埋是将客户组织标本通过固定，取材，脱水等过程后，用石蜡作为包埋剂，将组织标本包埋在石蜡中！标本固定取材脱水、透明、透蜡包埋切片组织包埋切片过程步骤、一、固定：组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。这种处理就是固定。除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。组织包埋切

2、片过程步骤固定注意事项：固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的1015倍。2.根据组织的不同和实验目的不同，选取不同的固定剂。3.固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可从1小时到几十小时，有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的硬化作用较强，作用时间应严加控制，不能过长。组织包埋切片过程步骤二，取材：组织固定完成后，要进行脱水，在脱水前为了选取目的组织同时也为了脱水能够顺利进行，要对组织进行有目的性的切割，这个过程就叫取材。 心脏（心室 心房） 脑（海马 黑质 纹状体 .) 肠 （长条 圆环） 皮肤（全层）组织包埋切片过程步骤取材注意事项：1.切面要平整，厚度不易超过2mm，否则脱水效果不能

3、保证。2.对于有特许要求的组织，取材时要保证对目的组织的完整保留。组织包埋切片过程步骤三，脱水：生物组织中含有大量的水分，它和石蜡是不能相溶的，致使在包埋时石蜡无法渗入组织内部，因此须使用脱水剂将水分除尽，这就是脱水的作用。组织包埋切片过程步骤五、透蜡和包埋：组织脱水后在透明剂（二甲苯）中透明后，融化的石蜡就容易进入组织中，然后将组织放入模具中倒入液体的石蜡，待凝固，组织就包埋成组织蜡块了。组织包埋切片过程步骤六、切片：包埋好的蜡块就可以进行切片，一般切 片的厚度在3到6微米（默认4微米），过薄过厚 都不容易切片！ 植物 脂肪（5-8微米） 染色 活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内

4、各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。 针对组织的不同及需要观察特异性，染色里面分很多中，下面，我们来看看一些常见的染色。HE染色苏木精 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科

5、研中最基本、使用最广泛的技术方法。HE染色染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。Masson染色主要用途： 主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。检验结果： 胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色、胞核染蓝黑色。PAS糖原染色染色原理PAS染色全称为过碘酸雪夫氏染色（periodic acid shiff，PAS），又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、

6、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。等可显示阳性反应，呈紫红色。适用范围用于显示糖原和多糖类中性粘液和酸性粘液物质，而且还能显示基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性、淀粉样等物质。特殊染色天狼猩红 （胶原纤维）甲苯胺蓝 尼氏染色 LFB 镀银番红固绿 阿利新蓝茜素红 vonkossa（钙结节）EVG 维多利亚蓝（弹性纤维）TRAP（破骨细胞）维多利亚蓝染色冰冻切片冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断切片厚度（8微米）冰冻切片优点1简便，可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续即可进行切片，减少了一些中间环节。2快速，用时短。3组织变化不大。4能很好保存脂肪，类脂等成分。5能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类，特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。冰冻切片缺点1不容易做连续切片。2切取的组织不能过