柔肝散结法对肝癌大鼠干预作用的研究

1、柔肝散结法对肝癌大鼠干预作用的研究【摘要】目的讨论血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2X-2在肝癌大鼠中的表达以及柔肝散结法对其表达的影响。方法40只雄性SD大鼠，随机分为空白组、模型组、青消方组、青消方防治组简称“防治组，每组10只。除空白组外，其余3组大鼠均以含0.05%2-AAF的饲料喂养12周，防治组在诱癌的同时灌服青消方。青消方组于诱癌第4周开场给药，剂量均为25gkg-1d-1。12周末观察瘤体积及瘤重量的变化，并采用免疫组织化学方法检测各组大鼠标本中VEGF及X-2的表达。结果模型组VEGF及X-2的表达明显高于空白组(P0.01)；青消方组、防治组VEGF及X-2的表达明

2、显低于模型组(P0.01)；防治组优于青消方组。结论VEGF及X-2在肝癌大鼠中表达增强，柔肝散结中药青消方能降低肝癌大鼠VEGF及X-2的表达，早期治疗效果更佳。【关键词】柔肝散结法；肝癌大鼠；血管内皮生长因子；环氧合Abstrat：bjetiveTapprahtheexpressinftheVEGFandX-2inratsithliveranerandtheeffetfRuGanSanJieFa(RGSJF)nit.ethds40SDratseredividedintfurgrupsatrand:blankgrup,delgrup,QingXiaFanggrup,FangZhigrup,1

3、0ratsineverygrup.Exeptfrblankgrup,thetherthreegrupserefedithbaitvesselith0.05%2-AAFfr12eeks.FanZhigrupaslavagedithQingXiaFanghenanerasindued.QingXiaFanggrup25gkgd-1astreatedatthe4theekafteranerasindued.ThevlueandtheEightfneplaserebservedatthe12theek,andtheexpressinfVEGFandX-2ineverygrupasdetetedbyiu

4、nehistheialethd.ResultsTheexpressinfVEGFandX-2indelgrupasbviuslyhigherthanthatfblankgrup(P0.01).TheexpressinfVEGFandX-2inQingXiaFanggrupandFangZhigrupasbviuslylerthanthatfdelgrup(P0.01),FangZhigrupsurpassedQingXiaFanggrup.nlusinTheexpressinfVEGFandX-2asaugentedinratsithliveraner,QingXiaFangandepress

5、theexpressinfVEGFandX-2inratsithliveraner,espeiallyatearlierperid.Keyrds：RuGanSanJieFa;Ratsithliveraner;VEGF;X-2原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率占全部恶性肿瘤的第三位，易发生肝内外转移，预后较差。本实验利用肝癌大鼠模型，观察实验12周末瘤体积及瘤重量的变化，并采用免疫组织化学检测方法，检测血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2X-2在肝癌大鼠中的表达，讨论柔肝散结中药青消方对以上指标的干预作用，明确该方的局部作用处径及可能机制。1材料与方法1.1实验用药青消方由太子

6、参、白芍、绞股蓝、灵芝、冬凌草、鳖甲、蛇六谷等组成由河北医科大学中医院门诊药房提供；2-乙酰氨基芴(2-AAF)：Siga公司。1.2实验过程及观察指标40只雄性SD大鼠，体重12010g，随机分为空白组、模型组、青消方组、青消方防治组简称“防治组，每组10只。空白组以标准颗粒饲料喂养，其余3组大鼠均以含0.05%2-AAF的饲料喂养12周，防治组在诱癌的同时，灌服青消方25g/kgd。青消方组于诱癌第4周开场给药，剂量为25g/(kgd)。空白组和模型组给以等体积的蒸馏水。各组每日灌药3h前后均禁食。12周末处死大鼠，解剖腹腔，取出肝脏，观察肝脏大体形态，测定瘤体积及瘤重量。各组用10%福尔

7、马林液固定，石蜡包埋，制备成4厚的切片，用于VEGF及X-2免疫组织化学检测，明确其在蛋白方面的表达。1.3统计学处理使用SPSS11.5frinds统计软件，所有数据均用均数标准差表示，采用单因素方差分析法对实验结果进展统计学分析。2结果2.1各组瘤体积和瘤重量的比拟青消方组、防治组与模型组相比，瘤体积缩小，瘤重量降低，有明显差异P0.01；防治组瘤体积缩小及瘤重量降低优于组青消方组P0.01。表1实验末各组瘤体积及瘤重量的测定结果略2.2X-2及VEGF免疫组化结果VEGF及X-2蛋白主要分布于细胞浆中，VEGF阳性细胞显示棕黄色或棕褐色颗粒；X-2阳性结果呈棕黄色颗粒。4组大鼠每组选取1

8、0只大鼠标本，每个标本测量10个高倍镜视野。用阳性染色面积和显示屏面积的百分比表示该成分的相对含量。结果显示，模型组、青消方组及防治组VEGF和X-2相对含量与空白组相比明显升高，有显著性差异P0.01；青消方组、防治组与模型组相比均明显降低，有显著性差异P0.01；防治组明显低于青消方组P0.05。表2实验末各组肿瘤组织VEGF及X-2的相对含量略3讨论研究说明，滋阴养血药物擅长保护骨髓功能，增加血液的白细胞、血红蛋白和血小板；软坚散结类药物能直接抑制、杀伤癌细胞，减少肿瘤细胞转移。因此我们采用具有益气柔肝、软坚散结作用的中药青消方为研究对象。青消方由太子参、白芍、绞股蓝、灵芝、冬凌草、鳖甲

9、、蛇六谷等组成。现代药理研究显示蛇六谷具有明显抑瘤作用，在荷瘤小鼠体内有一定抑瘤率，达30.44%42.25%1；绞股蓝的抗癌成分中，以20S原人参二醇抗肿瘤活性最高；从苦参中提取的苦参碱具有诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡等作用。近年来研究说明，X-2在绝大多数的肝细胞癌组织内呈过度表达2。X-2与VEGF的研究主要集中在与肿瘤的发生开展的关系上3。本实验通过X-2与VEGF在肝癌大鼠中的表达，讨论中药复方青消方在控制肿瘤发生、开展过程中的作用。研究说明，血管生成是肿瘤发生、开展过程中的重要步骤，与肿瘤的生物学行为及患者预后有关。VEGF通过与其受体结合，释放各种生长因子与细胞因

10、子，促进内皮细胞的增殖与迁移，并通过VEGF的刺激促进肿瘤血管生成，增加血管通透性，协助肿瘤细胞进入脉管系统，促进肿瘤的侵袭及转移4。X-2可通过刺激肿瘤血管生成、抑制肿瘤细胞的凋亡、抑制免疫应答等途径来促进肿瘤的发生和开展,并诱导VEGF的表达而促进肝细胞癌肿瘤血管的生成和侵袭转移5。本实验结果说明，青消方组、防治组均能缩小肝癌大鼠瘤体积，减轻瘤重量，降低肝组织VEGF和X-2相对含量，防治组明显优于青消方组。提示本病应早期治疗，柔肝散结中药青消方具有一定防治作用。本实验结果为其临床应用提供了实验根据。【参考文献】1陈培丰,刘鲁明.中药蛇六谷抗癌活性及诱导癌细胞凋亡J.中国中医根底医学杂志,2000,69:30.2韩少良,唐槐静,林东昕,等.肝细胞癌组织内X-2表达的临床意义J.中华肝胆外科杂志,2002,8(5:307.3陈丽艳,胡双九.X-2与VEGF的表达及相关性研究进展J.中