海洋刺参多糖对宫颈癌细胞周期的影响及其机制

1、海洋刺参多糖对宫颈癌细胞周期的影响及其机制海洋刺参多糖对宫颈癌细胞周期的影响及其机制【关键词】刺参属(动物);多糖类;宫颈肿瘤;hela细胞;细胞周期【摘要】目的研究海洋刺参多糖(sjap)对人宫颈癌细胞系hela细胞周期影响并讨论其作用机制。方法实验分为对照组(不用sjap)及1.6、3.2、6.4g/l不同剂量sjap组。应用免疫细胞化学法分别检测各组sjap对增殖细胞核抗原(pna)、细胞周期抑制蛋白d2表达的影响;流式细胞仪检测不同浓度sjap对hela细胞周期的影响。结果与对照组相比拟，1.6、3.2和6.4g/lsjap组均能抑制pna和d2的表达(f=209.02951.11，q

2、=18.9774.55，p0.05)，且具有一定的浓度依赖和时间依赖关系。经sjap处理的hela细胞发生g1期阻滞，对照组及1.6、3.2、6.4g/lsjap组细胞的凋亡率分别为0.25%、4.32%、11.36%和30.04%，差异有显著性(f=26.95259.21,q=3.3436.36,p0.05)。结论sjap对hela细胞的生长具有明显的抑制作用。其机制可能是sjap降低pna和d2蛋白的异常表达，使细胞周期发生g1期阻滞，从而起到抑制细胞增殖的作用。【关键词】刺参属(动物);多糖类;宫颈肿瘤;hela细胞;细胞周期keyrdsstihpus;plysaharides;uter

3、ineervialneplass;helaells;ellyle1材料与方法1.1材料sjap由中国海洋大学医药学院提取，纯度99.5%。人宫颈癌细胞hela细胞系，购于中国科学院上海细胞库。1.2细胞培养将hela细胞常规培养于含有体积分数0.10胎牛血清、105u/l青霉素和100g/l链霉素的de培养基中，置37、体积分数0.052培养箱中培养。1.3d2、pna蛋白的免疫组化检测hela细胞培养于不含sjap(对照组)及含不同浓度sjap(1.6、3.2、6.4g/lsjap组)的培养液中，分别于培养的13d消化离心搜集细胞，用pbs液洗涤2次，重悬于pbs中制成单细胞悬液，调整细胞密

4、度为2108/l，将上述细胞悬液参加有围孔的载玻片上，每孔20pl。室温下晾干，置于冷丙酮溶液-20下固定5in，取出自然枯燥后于-20保存。按试剂盒说明书分别进展d2、pna免疫细胞化学法检测。采用uidas21图像分析系统进展吸光度(a)值测定，每个标本测100120个细胞，取其均值。1.4细胞周期测定取不同浓度sjap与细胞共同孵育72h后(每个样本细胞密度109/l)，用胰酶消化，900r/in离心5in，弃上清，调整细胞密度为109/l，取1l细胞悬液，用pbs洗3次，参加200lpi染液(pi终浓度为50ng/l，rnasea终浓度为20ng/l)，4避光孵育30in，流式细胞仪分

5、析细胞周期，以上实验重复3次。1.5统计学处理采用spss12.0及pps1.57软件进展统计分析。计量资料以均数标准差表示，多组比拟采用单因素方差分析，两两比拟使用q检验;两组比拟采用t检验。2结果2.1sjap对hela细胞d2、pna蛋白表达的影响2.1.1d2蛋白的表达d2蛋白阳性细胞呈棕褐色。d2蛋白的表达与对照组相比，各组均有降低(f=302.91805.76，q=18.9768.27，p0.05)，并且随着剂量的增加，d2蛋白的表达降低(q=8.8268.27,p0.05)。随着时间的增加，d2蛋白的表达明显降低(f=96.97,q=5.4319.11,p0.05)。见表1。2.

6、1.2pna蛋白的表达pna蛋白阳性细胞呈棕褐色。与对照组相比，各组pna蛋白的表达均有降低(f=209.02951.11,q=34.7674.55，p0.05)，并且随着剂量的增加，pna蛋白的表达降低(q=8.1474.55,p0.05)。随着时间的增加，pna的表达降低(f=131.06,q=4.2921.62,p0.05)。见表2。2.2细胞周期测定随着sjap作用时间的延长，作用浓度的增加，其对hela细胞周期分布的影响越来越强。与对照组相比，1.6、3.2和6.4g/lsjap组的细胞周期分布发生了显著变化，细胞被阻滞在g0/g1期，其中6.4g/lsjap组g0/g1期细胞到达6

7、8%以上，而其他各期细胞均显著减少(f=26.95172.24,q=3.3429.38,p0.05)。各组凋亡率差异有显著性(f=259.21,q=4.9736.36,p0.05)。见表3。表1不同浓度sjap对hela细胞d2表达的影响表2不同浓度sjap对hela细胞pna蛋白表达的影响表3不同浓度sjap对hela细胞周期分布的影响(n=3,s)组别g0/g1g2/s凋亡率(3讨论pna是真核细胞dna合成所必需的一种核蛋白，它在g1期的表达逐渐增加，s期达最顶峰，而g2/期那么减少。pna的表达可能是dna多倍体形式表达的一个标记，也成为肿瘤细胞失调状态下的一个标记，检测pna可以客观

8、评价肿瘤细胞增殖状态8。本研究应用免疫细胞化学方法检测pna在hela细胞中的表达情况，结果说明，与对照组相比，各浓度sjap组pna的异常表达均显著降低(p0.05)，并且有一定的剂量依赖关系。这一结果与tian等9的研究结果一致。由此可见，sjap可通过抑制hela细胞的异常表达，引起细胞周期发生g期阻滞，从而发挥抑制细胞增殖的作用。齐鲁医学杂志2022年10月第25卷第5期edjqilu,tber2022,vl.25,n.5d2基因是一种癌基因，表达产物d2蛋白能与p53结合，抑制p53对肿瘤活性的抑制作用，促使肿瘤的发生和开展及造成肿瘤对放疗、化疗的耐受，与不良预后有关8。本研究采用免疫细胞化学法检测hela细胞d2蛋白的表达，结果显示，sjap作用与未作用的hela细胞均有d2蛋白的表达，但与对照组相比，不同浓度sjap组d2蛋白的表达均降低(p0.05)，并且具有一定的剂量依赖趋势，提示sjap可下调d2蛋白的表达，导致g1期阻滞，在细胞周期中发挥其抑制细胞