钩藤散浸膏对亚急性衰老模型小鼠的影响

1、钩藤散浸膏对亚急性衰老模型小鼠的影响黄厚才1，胡元亮2，胡春萍1，彭蕴茹1，丁永芳【摘要】目的观察钩藤散浸膏对衰老模型小鼠智力、乙酰胆碱酯酶AHE、抗氧化酶SD、自由基DA的影响，讨论其抗衰老作用及机制。方法小鼠随机均分为6组，除正常对照组外，各组每天皮下注射D-半乳糖0.05g/kg，连续注射6周。从注射的第7天开场，3个实验组同时灌胃高、中、低剂量的钩藤散浸膏，阳性对照组灌以维生素E0.05g/kg模型对照组与正常对照组每天灌胃等量的蒸馏水，连续给药5周后测定小鼠的训练成绩、记忆成绩及血清SD、AHE和脑组织DA的含量变化。结果实验组的训练成绩显著P0.05，测试成绩极显著P0.01好于、

2、血清SD、AHE活力极显著P0.01高于、脑DA含量极显著P0.01低于模型对照组；与正常组比，除AHE偏高外，其余各指标相近。结论钩藤散能进步抗氧化才能，降低自由基含量，增强胆碱能神经系统功能，从而防止衰老。【关键词】D-半乳糖；钩藤散；衰老；小鼠【Abstrat】bjetiveTbservetheeffetsfGutengsanextratnery，alndiadehydeDA，superxidedisutaseSD，AHEinietstudytherapeutieffetsandehanisfGutengsannagingdel.ethdsieererandlydividedint6gr

3、ups.Allgrups，exeptthentrl，ereadinistratedipithD-galatse0.05g/kgfrsuessive6eeks.The3experientalgrupsereadinistratedigithhigh，iddleandldsagesfGutengsanextratrespetivelyafter7thdayftheinjetinfD-galatsehereasvitain-Eat005g/kgbdyEightservedasapsitiventrl.ThedelandntrlgrupseredailyadiniseredithD.D.frntinu

4、us5eeks.Aftertreatents，theSD，AHEativityinseruandDAinbrainfratseredeterined，thetrainingsreanderygradeerealsrerded.ResultsGutengsanextrateffetivelyinreasedthetrainingsresanderygrades.Als，theseruSD，AHEativitiesinGutengsanextrat-treatedieerehigherthanthatinntrlgrup.Hever，thebrainDAntentinGutengsanextrat

5、-treatedieaslerthanthatinntrlgrup.nlusinThisdatasuggestedthatGutengsanextrathadasignifiantanti-xidativeeffetbyreduingthefreeradialsasellasananti-agingeffetthrughtheenhaneentfhlinerginervesyste.【Keyrds】D-galatse;gutengsan;aging;ie老年痴呆是威胁人类安康的重大疾病之一，对其的防治一直是全球关注的焦点。钩藤散源于?本领方?，由钩藤、石膏、陈皮、麦冬、半夏、茯苓、人参、防风、

6、生姜、甘草、菊花等11味药组成，原为治疗肝厥头晕之证的经典方剂。本次实验进展了钩藤散浸膏的抗衰老实验，以观察钩藤散浸膏在抗衰老方面的影响及机制。1材料1.1药品与试剂1钩藤散：由本院中药制剂室按传统方法水提、浓缩、消毒等制成浸膏。临用前每19l钩藤散浸膏加蒸馏水配至100l，变成0.5g生药/l清膏溶液，实验中所用剂量均以生药量计。2维生素E胶丸：厦门鱼肝油厂批号：10842002。用前将维生素E胶丸用蒸馏水按10粒/100l蒸馏水配成溶液。3D-半乳糖：国药集团化学试剂批号：20220121。4乙酰胆碱酯酶AHE活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所批号：20220225。5超氧化物歧化酶S

7、D活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所批号：20221221。6丙二醛DA活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所批号：20221224。1.2动物清洁级K小鼠：18-22g，雌雄各半，由中科院上海实验动物中心提供，答应证号：SXK沪2002-0010。1.3仪器1G-2迷宫：张家港市生物医学仪器厂消费。2高速冷冻离心机：贝克曼产品。3721分光光度计：上海第三分析仪器厂产品。4高速分散器XHF-1：上海金达生化仪器厂产品。1.4实验环境清洁级，合格证号：SYXK苏2002-0007。2方法2.1分组、造模、给药将小鼠分为6组，每组12只，雌雄各半，先进展造模，正常对照组皮下注射等体积生理盐水

8、1l/kg，其余各组每天皮下注射D-半乳糖，0.05g/kg体重，连续注射6周。注射7天后开场给药，实验高剂量组每天灌胃给10g生药/kg体重，中剂量组5g/kg，低剂量组2.5g/kg，阳性对照组每天给维生素E0.05g/kg体重，模型对照组与正常对照组每天给等量的蒸馏水，每天灌胃1次，每次0.2l/10g体重；连续给药5周。2.2学习训练1最后1天给药后1h进展学习训练，训练时，将小鼠放入臂起步区停留3in后给予电击35V，按或连续试验：a项:小鼠到达平安区停留0.5in，然后取出放回原臂，1in后给予下次电击，到达连续2次直接逃至平安区后，以逃入的平安区作为起步区进展电击训练。当小鼠在三

9、臂均到达连续2次直接逃至平安区后，进展b项试验：小鼠在臂起步区停留1in后给予电击，逃至平安区停留0.5in，再以此区作为起步区予以电击，连续循环电击训练每两次电击之间休息1in，以小鼠连续10次或9/10正确反响直接逃入平安区作为空间区分记忆指标，每回连续学习的电击总次数一般不超过30次。最后将a项和b项相加作为训练成绩。2.3记忆测试训练后24h进展测试，测试方法同训练，将a项和b项相加作为学习成绩。2.4血中SD、AHE测定测试后眼眶取血，3000r/in离心，取上清液按试剂盒说明书所述步骤操作，测定AHE、SD活力。2.5脑中DA的测定小鼠取血后处死取脑，置匀浆器中，参加预冷生理盐水制

10、成10%g/l的脑匀浆，按试剂盒说明书所述步骤操作，测定蛋白质含量和DA含量。2.6统计学分析数据用xs表示，组间比拟用t检验。3结果3.1对学习记忆的影响模型组训练、测试成绩都极显著差于正常组P0.01，说明造模成功；实验组训练、测试成绩都和正常组相近，而极显著地好于模型组P0.01，说明给药后钩藤散浸膏抑制了D-半乳糖所致的衰老，使记忆恢复如常，见表1。表1钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠记忆的影响xs，n=12Tab.1EffetsfGTSextratneryfieddderydelsreatedbyD-galatse注：与模型组比拟，*P0.05，*P0.01，*P0.001；与正常

11、组比拟，P0.05，P0.01，P0.001；“/灌以等量的蒸馏水，下同3.2对血清中SD活力的影响见表2。表2钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SD活力的影响xs，n=12Tab.2EffetsfGTSextratnativityfSDinserufieddderydelsreatedbyD-galatse从表2可知，实验组血清中SD活力显著高于模型组P0.05，与正常组较近无明显差异，而模型组血清中SD活力显著小于正常组P0.05。说明钩藤散浸膏有助于D-半乳糖所致衰老模型小鼠SD活力的恢复，从而增强去除自由基的才能。3.3对脑中DA含量的影响从表3可知，实验组DA含量显著小于模型组

12、P0.05，与正常组比拟接近，差异无显著性，而模型组那么显著高于正常组P0.05。说明钩藤散有助于降低自由基DA的含量，从而延缓衰老。表3钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠脑中DA含量的影响xs，n=12Tab.3EffetsfGTSextratnntentfDAinbrainfieddderydelsreatedbyD-galatse3.4对血清中AHE活力的影响见表4。表4钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠血清AHE活力的影响xs，n=10Tab.4EffetsfGTSextratnativityfAHEinserufieddderydelsreatedbyD-galatse从表4可知，实

13、验组血清中AHE极显著高于模型组P0.01，与正常组比拟差异无显著性，而模型组那么显著低于正常组P0.05。说明钩藤散浸膏有助于维持AHE含量，确保神经递质处于正常程度，从而保证神经功能的正常进展。4讨论D-半乳糖造成动物的老化效应早有报道，青年小鼠长期注射D-半乳糖后，由于其代谢产物半乳糖醇不能被进一步代谢而堆积在细胞内，影响浸透压，导致细胞肿胀，代谢紊乱，体内活性氧程度升高，细胞脂质受损，以致产活力体多器官、多系统的功能减退，这些变化均与老龄小鼠相似。D-半乳糖还会引起脑神经元的一系列退行性变化，包括神经元数目减少，脑组织中SD活性下降，DA、脂褐素程度上升，表现为学习记忆下降2。因此现代

14、研究常用D-半乳糖所致亚急性衰老模型进展抗衰老药物作用机制的研究。众所周知，乙酰胆碱AH是进展及维持中枢胆碱能神经系统功能的一种重要介质。它传导的信号和认知、学习与记忆有关，其代谢过程和老年性痴呆AD严密相关3。它由胆碱乙酰化转移酶hAT催化合成，乙酰胆碱酯酶AHE催化分解。多数研究说明AD患者脑内hAT和AHE活性降低，AHE含量缺乏，导致中枢神经系统功能障碍，学习记忆才能下降4。显示了AD与胆碱能系统功能紊乱亲密相关。AHE活性的下降反映了乙酰胆碱的代谢转换率减慢。因此测定AHE含量能反映胆碱能系统的状况，更好地研究钩藤散对衰老模型小鼠的作用机制。自由基可引发肿瘤、心血管疾并神经变性疾并皮

15、肤衰老等退行性疾病，脂质过氧化的终产物是DA。SD是机体内去除自由基的重要抗氧化酶之一，其活力和含量反映了机体去除氧自由基的才能5。研究说明，随着年龄的增长，SD去除氧自由基才能的下降，引起氧自由基及脂质过氧化物LP日益增多，由于生物膜中不饱和脂肪酸被氧化成过氧化物时，可使细胞膜的通透性改变，线粒体、微粒体膜膨胀破裂，造成细胞代谢和功能形态的改变，最后导致机体衰老和老年性疾病的发生1。因此，目前SD活性的测定被认为是抗衰老药物的重要指标之一。本实验复制了老年小鼠模型，结果显示：AHE：模型对照组含量显著低于正常对照组，实验组含量极显著高于模型对照组而和正常对照组相近，说明小鼠老化后AHE活力有显著下降，而实验组能抵抗这种下降，维持正常程度。训练与学习成绩：实验组均显著好于模型对照组，说明给药后小鼠的记忆有了很大的改善，而模型对照组显著低于正常对照组，说明模型复制是成功的。SD：实验组活力显著高于模型对照组。DA含量：实验组显著低于模型对照组，而和正常对照组相近，说明给予钩藤散后，小鼠的抗氧化才能有了很大的改善，去除自由基的才能有了很大的进步。由此可见：1实验中衰老模型小鼠的复制是成功的；2钩藤散浸膏能抵抗D-半乳糖所致小鼠的衰老；3提示钩藤散浸膏抗小鼠衰老的机制：抵抗AHE活力的下降，维持胆碱能神经系统功能的正常，恢