中药材掺假染色检测方法的研究课件

1、中药材掺假染色检测方法的研究中国药品生物制品检定所中药室 鲁 静2009-05色彩与人类生活息息相关“红心鸭蛋”事件 中药材掺假染色 中药材掺假染色检测方法研究的必要和紧迫性 着色物：色素、染料、颜料等的滥用，严重危害人民身体健康和生命安全；掺伪、造假等现象屡禁不止 ，严重影响中药的声誉和健康发展。中药材掺假染色的主要方式和品种增重掺假染色 红花 冬虫夏草、青黛等劣质药材染色 五味子 蒲黄 延胡索 等造假染色 西红花 血竭 朱砂 等 着色物的种类食用色素（水溶性色素） 食品添加剂合成染料 可溶于使用介质 纺织品着色 被纤维吸附、固着有机颜料 不溶于使用介质 非纺织品着色 靠树脂、胶黏剂等于着色

2、物结合 无机或矿物颜料禁用染料 含有偶氮结构的染料在经过裂解后有可能产生以下24种致癌芳香胺的染料是被欧盟和许多国家禁止使用的。 24种致癌芳香胺是： （1）4-氨基联苯 （2） 联苯胺 （3）4-氯-2-甲基苯胺 （4）2-萘胺 （5）4-氨基-3,2-二甲基偶氮苯 （6）2-氨基-4-硝基甲苯 （7）2,4-二氢基苯甲醚 （8）4-氯苯胺 （9）4,4-二氨基二苯甲烷 （10）3,3-二氯联苯氨 （11）3,3-二甲氧基联苯胺 （12）3,3-二甲基联苯胺 （13）3,3-二甲基-4,4-二氨基二苯甲烷 （14）2-甲氧基-5-甲基苯胺 （15）4,4-亚甲基-二（2-氯苯胺） （16）4

3、,4-二氨基二苯醚 （17）4,4-二氨基二苯硫醚 （18）2-甲基苯胺 （19）2,4-二氢基甲苯 （20）2,4,5-三甲基苯胺 （21）2-甲氧基苯胺 （22）4-氨基偶氮苯 （23）2,4-二甲基苯胺 （24）2,6-二甲基苯胺 食用色素天然食用色素：焦糖色素、红曲红、高梁红、栀子黄、萝卜红、叶绿素铜钠盐、胡萝卜素、可可壳色、姜黄等我国食品添加剂使用卫生标准（GB27601996）列入的合成色素有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝、二氧化钛（白色素）等等。 合成食用色素合成色素具毒性(包括毒性、致泻性和致癌性)。这些毒性源于合成色素中的砷、铅、铜、苯酚、苯胺、乙醚

4、、氯化物和硫酸盐，它们对人体均可造成不同程度的危害。我国食品添加剂使用卫生标准，其中规定使用合成色素的种类，并定出了最大使用量。合成色素的纯色素含量不得低于8599；砷1ppm; 铅10ppm; 铜20ppm; 苯酚5ppm，苯胺4ppm; 各种氯化物不应超过0.5等，这些规定是为了限制色素中的杂质，以减少对人体的毒害。 三芳基甲烷类金胺O孔雀石绿颜料普通有机颜料 偶氮类颜料 酞箐颜料无机颜料 二氧化钛 铅铬绿 等等中药材掺假染色检测方法研究的内容（1）关注药材质量，及时发现问题；（2）确定掺伪物、染色物的种类；明确化学组成；（3）建立检测用对照物质；（4）建立检测方法，进行必要的方法验证；（

5、5）按规定程序申报补充检验方法，作为法定检验的依据。中药材掺假染色检测的技术方法经验鉴别、理化鉴别快速筛查薄层色谱法定性鉴别、常规检测高效液相色谱法定性鉴别、常规检测液-质联用法结构鉴定、方法验证中药材掺假染色检测方法研究实例 单一色素或染料染色7 34 39 40 42 A B C D E F G H I J K L 对照红花染色物 金橙II的检测硅胶G薄层板展开剂：氯仿-甲醇-冰乙酸(7：1：2)金橙II的HPLC检测色谱柱：Diamonsil C18流动相：乙腈0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）(40：60) 检测波长：484nmUVES-E

6、S+UVES-ES+金橙II红花药材蒲黄掺伪染色的检验蒲黄掺伪染色的检验 8 20 30 32 34 A B C D E F G 对照金胺O的薄层色谱检测硅胶G薄层板展开剂：二氯甲烷乙酸乙酯甲醇氨水（4：5：1：1）的下层溶液上：金胺O对照试剂；中34#样品（阳性样品）；下：样品E（阴性样品）金胺O的HPLC检测色谱柱：Diamonsil C18流动相：乙腈0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值3.0）（35：65）检测波长:432nm 金胺O对照试剂蒲黄药材中相应色谱峰中药材掺假染色检测方法研究实例不同来源样品，多种色素或染料染色1 2 3 4 5 6 7 8

7、 9 10 11 12 13 14 15硅胶G薄层板展开剂：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1：3：3：1：1)五味子染色物的HPLC色谱图柱：Diamonsil C18，4.6 x 250mm 流动相：以甲醇-0.05mol/L醋酸铵梯度洗脱；检测波长为508nm 复合色素染色乌梅染色物： 苋菜红 亮蓝 日落黄 硅胶GF254板，展开剂：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）可见光检视 乌梅染色物HPLC检测Waters C18，5m，250 x 4.6mm；甲醇-0.02mol/L乙酸铵（冰乙酸调pH4.0），梯度洗脱500nm检测苋菜红和日落黄，630nm检测亮蓝。 染

8、色物、掺伪物同时检测血竭伪品血竭样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9显色前，可见光检视 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9显色前，紫外光灯（254nm）检视 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9显色后，可见光检视 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9显色后，紫外光灯（365nm）检视TLC检查伪品血竭中松香酸、808猩红和苏丹红 血竭伪品药材HPLC分析检测Agilent C18 (4.6 X 250mm)；流动相：乙腈水（95

9、5） 阳性样品中相应色素成分峰的DAD吸收光谱 检出成分的确证样品#色谱峰保留时间吸收峰1吸收峰2检出大红粉的样品18.1549751968.05496519大红粉对照 8.03496517检出苏丹红IV的样品 21918350518 4 1920350518苏丹红对照19.13350518血竭伪品（大红粉）HPLC/MS/MS图2-羟基-3-苯胺羰基-1-偶氮苯基-萘m/z 368.1394808 猩红(808 Scarlet)苏丹红IV峰的二级质谱 伪品血竭中松香酸的HPLC/MS/MS图 松香酸伪品血竭检测情况样品编号样品提供或购买地点

10、TLCHPLC808猩红苏丹红松香酸808猩红苏丹红松香酸1安徽亳州中药材市场+-+-+2安徽亳州中药材市场-+-+-3安徽亳州中药材市场-+-+4重庆解放碑中药材市场-+-+5成都荷花池中药材市场-+-+6澳门药店+-+-+已批复的中药材染色补充检验项目和检验方法品种批准件编号检测指标和方法蒲黄2007007金胺O薄层色谱和HPLC检查黄芩片（饮片）2007008金胺O薄层色谱和HPLC检查红花2007009金橙II薄层色谱和HPLC检查五味子2007014胭脂红、赤藓红和酸性红73薄层色谱和HPLC检查朱砂2008003808猩红薄层色谱和HPLC检查血竭2008004808猩红、苏丹红I

11、V和松香酸薄层色谱和HPLC检查乌梅(炙乌梅)2009001苋菜红、亮蓝、日落黄薄层色谱和HPLC检查其它已批复的有关中药材掺伪等的检测方法 沉香 穿山甲 胆南星 海金沙 细辛 桔梗关于中药材补充检验方法研究和建立原则的几点思考根据中药材的质量问题，结合监管需要；建立针对性检测指标；检测方法适用性强：快速、简便、准确；研究样品有代表性，覆盖面广；格式完整规范方法验证的内容专属性 正常药材样品的比较 HPLC/MS验证检测限 检测成分的结构确证 对照物对照 质谱等光谱数据比较等阳性样品的HPLC/MS验证补充检验方法格式项目 检查 检测成分方法描述 供试品溶液制备 对照品溶液制备 分析检测条件

12、结果判断 “应不得检出.” “若检出., 按方法试验” 乌梅（炙乌梅）WumeiFRUCTUS MUME检查 （1）取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，溶液颜色不得显墨绿色。若溶液呈墨绿色，则采用下列方法检查。（2）苋菜红、亮蓝、日落黄 薄层色谱法 取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，取上清液离心，作为供试品溶液。另取苋菜红、亮蓝、日落黄溶液（国家标准物质，标示浓度0.5mg/ml，国家标准物质研究中心）各1ml，分别加70%乙醇稀释至5ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）试验，吸取供试品溶液5l，对照品溶液各2l，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置应不得检出相同颜色的斑点。若检出相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法进一步检查。（3）高效液相色谱法 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）测定。色谱条件与系统适用性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/L醋酸铵（冰乙酸调pH4.0），梯度洗脱程序为：0-45分钟，流动相A 20%50%；流动相B，8