鹅沙门氏菌的分离与鉴定沙门氏菌的分离和鉴定

1、鹅沙门氏菌的分离与鉴定沙门氏菌的分离和鉴定沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病。目前,已发现的沙门氏菌的血清型有2000多种1、2。沙门氏菌属中的许多类型细菌对人、畜以及其他动物均有致病性。各种年龄的动物均可感染，但幼年者较成年易感。近年来，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重。由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。沙门氏菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要意义。近年来，随着抗菌药物的滥用和不当使用，沙门氏菌病的耐药性日趋严重,加强对该菌耐药性的监测力度和耐药机制的研究迫在眉睫。2009年

2、3月，凤阳某养殖户饲喂的800多只10日龄鹅出现死亡，34d后死亡100多只，发病鹅主要症状有精神沉郁，卧地不起，眼睑浮肿，食欲减退，饮水正常，排出绿色稀糊状粪便并污染肛门周围的绒毛、腿软，有的病鹅出现呼吸道症状。剖检可见：肝脏瘀血肿大，表面有弥漫性针尖至粟粒大的灰白色坏死灶。胆囊充盈，心肌、胰脏上有坏死灶，脾脏瘀血肿大，气囊混浊有黄色干酪样分泌物，心包膜增厚与心脏粘连，直肠内充满绿色稀粪。为查明病因，控制该病，特进行病原的分离与鉴定。一、材料和方法.材料病料凤阳某养殖户送检来的10只病死鹅。设备与器材隔水式恒温培养箱、手提式压力蒸汽、电炉、托盘天平、FA004型电子分析天平、搪瓷量杯、显微镜

3、、漏斗、记号笔、称量纸、药匙、镊子、棉线、精密pH试纸及各种玻璃器皿等，以上仪器设备及器材均由安徽科技学院动物医学实验室提供。药品与试剂各种培养基、革兰氏染液、生化试剂、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、药敏纸片等均由杭州天和微生物试剂有限公司生产。药敏纸片（美满霉素、阿米霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素、四环素、新霉素、强力霉素、氨苄西林钠、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、）等均由安徽科技学院动物医学实验室提供。.方法细菌分离培养和形态学观察细菌分离培养无菌取病死鸡的肝脏组织分别划线接种于麦康凯平板和SS琼脂平板上，37培养24小时，分别取上述菌落涂片，革兰氏染色镜检，

4、在油镜下观察细菌的形态及染色特性。观察是否存在杂菌。对于已经纯化的细菌进行冷冻保存，未纯化的重复划平板、镜检，直至纯化为止。培养特性观察分别接种普通肉汤培养基、三糖铁琼脂培养基、普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯培养基和SS培养基，于37c恒温箱内培养24h,观察该菌的培养特性。生化试验自制各种糖发酵管，取纯培养物分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖等生化管中，置于37恒温培养箱中，培养1824h,观察发酪管的反应情况。按要求自制各种生化试剂，取纯培养物分别做糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验、尿素酶利用实验、柠檬酸盐利用试验、半固体琼脂试验。药敏试验参照文献进行。对分离到的菌株进行了药敏试

5、验，共检测15种药物，包括美满霉素、阿米霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素、四环素、新霉素、强力霉素、氨苄西林钠、丁胺卡那霉素、恩诺沙星。结果判断标准：抑菌圈直径大于20mm为高度敏感，抑菌圈直径在1020mm为中度敏感，抑菌圈直径小于10mm为耐药。二、结果.细菌分离培养麦康凯琼脂平板上呈淡黄色透明,圆形微凸起,表面光滑湿润，小菌落；SS琼脂平板上半透明灰白色的菌落。.形态观察结果在上述试验中得到一株革兰氏阴性单独散在的小杆菌。.培养特性观察结果该菌在麦康凯琼脂呈淡黄色透明，光滑，边缘整齐小菌落；在SS琼脂上呈半透明灰白色的菌落；在伊红美蓝琼脂上呈半透明、无

6、色的微隆起的表面光滑无金属光泽的菌落；在普通肉汤培养基呈均匀一致浑浊，而且有沉淀；普通琼脂培养基呈圆形、无色、半透明表面光滑小菌落。.生化试验结果糖发酵试验该菌可发酵葡萄糖产酸又产气，不发酵乳糖、蔗糖，发酵麦芽糖仅产酸。三糖铁底层呈黄色，斜面呈红色呷噪试验阴性，M-R试验阳性，VP试验阴性，能利用柠檬酸盐，不能利用尿素酶，半固体琼脂试验表明该菌有鞭毛能运动。.药敏试验结果（见表1）三、讨论近些年来,为了控制和预防某些细菌感染,在饲料添加剂及治疗中常盲目使用一些抗菌药物,导致产生许多耐药菌株，像沙门氏菌就属于此类细菌。迄今为止,沙门氏菌共有2000种以上的血清型，而且不同地区差别比较大，不相同的

7、菌株交叉之后不具有保护作用，极易产生耐药性。由由试验可知，该群鹅死亡的主要原因是由于感染了沙门氏菌，通过现场调查发病的主要原因可能是由该养殖户为养鹅老户，鹅舍为塑料大棚，棚内湿度大，卫生条件差，鹅群密度大，粪便堆积通风不良，加之发病前温度忽高忽低，饲料和饮水供应不良，在一定程度上诱发该病。表1药敏试验结果注：其他抗菌药物如：美满霉素、四环素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素均为耐药，故未列入。药敏试验结果表明，本次分离的沙门氏菌对新霉素、丁胺卡那霉素、氨苄西林钠、恩诺沙星、阿米卡星高度敏感，强力霉素、卡那霉素中度敏感，而对美满霉素、四环素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素均耐药。对余下的鹅进行选用丁胺卡那霉素饮水2d后，该群鹅疫情得到控制。目前，随着耐药菌株的产生,沙门氏菌对抗菌药物的敏感性也越来越低,所以在治疗本病时，临床上应严格掌握抗菌药物的适当使用，防止错用，滥用抗菌药，最好先进行