高效液相色谱法测定鸭掌散不同煎液中甘草酸的含量及体外抗菌作用

1、高效液相色谱法测定鸭掌散差异煎液中甘草酸的含量及体外抗菌作用叶世芸冯华武孔云靳凤云贺祝英田维毅梁光义【摘要】目的观察用合煎传统汤剂、分煎配方颗粒汤剂要领制备的鸭掌散汤剂中甘草酸含量的变革，并比力其体外抗菌作用。要领创立高效液相色谱要领，接纳Dianisl18柱(2504.6，5)，甲醇-0.2l/L醋酸胺溶液-冰醋酸67331为活动相，流速1l/in，检测波长250n。阐发鸭掌散合煎液和分煎液样品中甘草酸的含量变革。接纳稀释法体外测试鸭掌散差异煎液对常见菌种的最低抑菌浓度(I)和最低杀菌浓度(B)。效果鸭掌散分煎液中甘草酸的均匀含量大于合煎液中甘草酸的均匀含量。鸭掌散分煎液对福氏痢疾杆菌有抑菌

2、作用，而合煎液没有；合煎液对白色葡萄球菌、黄曲霉菌的抑菌作用大于分煎液。结论与传统汤剂比力，鸭掌散配方颗粒汤剂中甘草酸的含量较高，抑菌谱较广。【关键词】鸭掌散甘草酸合煎分煎高效液相色谱体外抗菌“鸭掌散出自张时彻?摄生众妙方?，处方由麻黄、甘草、白果构成，具有敛肺定喘、化痰等成果。本实行以中药经方“鸭掌散中的有用身分甘草酸作为指标，比力该方合煎法与分煎法制得的汤剂中甘草酸含量差异以及体外抗菌活性的差异，探究中药复方汤剂差异制法对其有用身分溶出量的影响，亦对单味中药精制颗粒应用于临床提供一些理论根据。1东西1.1仪器安捷伦1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，1100/IND3D化学事情站。1.

3、2药材与试剂麻黄为麻黄科植物草麻黄EphedrasiniaStapf(河北)；白果为银杏科植物银杏GinkgbilbaL.贵州的枯燥成熟种子；甘草GlyyrrhizauralensisFish(内蒙)。以上3味药材饮片经贵阳中医学院陈德媛传授断定，根据2022版?中国药典?划定要领测定含量切合要求。甘草酸单铵盐比拟品(批号:0731-9704，中国药品生物成品检定所)；甲醇色谱纯，醋酸胺、冰醋酸阐发纯，水娃哈哈纯洁水。2要领与效果2.1甘草酸含量测定及比力比拟品溶液的制备：细密称取甘草酸单铵盐比拟品10g，置50l量瓶中，用活动相溶解并定容，即得甘草酸比拟品溶液每毫升甘草酸单铵盐比拟品0.23

4、92g，折合甘草酸为0.221g1，备用。合煎液样品溶液的制备(传统汤剂，利用传统煎煮法)：称取药材饮片，麻黄15.0g，甘草12.0g，白果10个，加8倍量的水煎煮，保持微沸30in，倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮两次，20in/次，归并3次煎液，减压枯燥成干粉。称取相称原药材处方量的干粉，置50l量瓶中，用开水溶解定容至刻度冷至室温。细密汲取2l，置25l容量瓶中，加活动相约20l，超声处置惩罚功率250，频率20kHz20in，取出，放冷，加活动相定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用的微孔滤膜0.45滤过，即得。分煎液样品溶液的制备配方颗粒汤剂，煎煮要领由贵州宏宇药业提供：别离称取上述量

5、的药材麻黄、甘草和白果。麻黄加10倍量的水煎煮保持微沸40in，倒出煎液，药渣再加6倍量的水煎煮40in；甘草加10倍量的水煎煮保持微沸60in，倒出煎液，药渣再加8倍量的水煎煮60in；白果加10倍量的水煎煮保持微沸60in，倒出煎液，药渣再加8倍量的水煎煮40in；别离归并各药材的两次煎液，减压枯燥成干粉。将各药材干粉混淆匀称，称取相称原药材处方量的干粉，同合煎液样品溶液制备法制得分煎液样品溶液。阴性比拟液的制备：再别离按上法制备不含甘草的合煎液、分煎液的阴性比拟液。2.2体外抗菌实行平凡肉汤造就基、平凡营养琼脂、血琼脂平板、沙氏琼脂造就基、沙氏液体造就基等。级生物宁静柜、生化造就箱。菌株

6、及药物的处置惩罚：将上述细菌菌株别离用相应造就基通例转种造就24h后，再用液体传代造就6h，然后作11000稀释备用。黑曲霉菌和青霉菌用暴皿法网络造就，洗脱孢子，调解浓度为2105个/l备用。取适量鸭掌散合煎液干粉参加50l容量瓶中，加开水至刻度，摇匀，配成浓度相称于1g药材/l的合煎液溶液。取适量鸭掌散分煎液干粉参加50l容量瓶中，加开水至刻度，摇匀，配成浓度相称于1g药材/l的分煎液溶液。抗菌强度定性实行：接纳通例琼脂扩散管碟法定性测定该药的抗菌强度(接种试验菌液0.1l，药物用上述100%浓度原液，药物量200l)。效果见表3。抗菌强度定量实行接纳试管法定量测定抗菌强度：每一菌株取干净试

7、管10支，于第1管参加上述100%浓度药液和相应造就液1l，第2管至第8管各参加相应造就液1l。将第1管中药液混匀后沿28管做等倍稀释，至第8管混匀后汲取1l弃去，由此得到12，14，181：256的稀释度。第9管只加稀释菌液1.05l作阳性比拟，第10管只加相应造就液1.05l作阴性比拟。别离汲取稀释菌液0.05l参加第1管至第8管，混匀。通例造就效果见表3。表3抗菌强度定性、定量实行效果3讨论接纳HPL法测定中药复方制剂中的甘草酸，文献报道可用多种差异构成的活动相体系2，3，本实行选择药典要领，甘草酸在13.515.5in之间出峰，并与杂质峰能到达基线分散。鸭掌散有敛肺定喘，化痰等成果，甘草有抗菌活性。因此，对鸭掌散合煎汤剂与分煎汤剂举行了甘草酸含量和体外抗菌活性的比拟研究。从以上研究效果可以看出，与鸭掌散合煎液比拟力，分煎液中甘草酸的含量较高。合煎液中的有用身分含量低是否是一个比力普及的征象，另有待更深化普及的研究才气确定。根据以上效果，合煎液对白色葡萄球菌、黄曲霉菌的抑菌作用略大于分煎液。分煎液对福氏痢疾杆菌有抑菌作用，而合煎液没有，是否在混淆煎煮历程中有某化学身分起按捺作用，两种汤剂对差异细菌抑菌的差异还必要进一步的实行研究。【参考文献】1国度药典委员会.中国药典