高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究

1、高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究【摘要】目的进步雷公藤片的质量标准，探索高效液相色谱HPL法测定雷公藤片含量的方法。方法采用高效液相色谱法，18柱，流动相为甲醇-水4060，检测波长218n。结果雷公藤甲素线性范围为0.04760.4760g，r=0.9991，平均回收率为101.2%，RSD为2.1%n=6。结论雷公藤片含量测定限度暂定为：每片含雷公藤以雷公藤甲素37H2214计，不得少于0.01g/片。【关键词】雷公藤片雷公藤甲素高效液相色谱雷公藤片为卫矛科木质藤本植物雷公藤TripterygiuilfrdiiHk.f，药材经醋酸乙酯提取后制成的片剂，原卫生部药品标准采用薄层扫描法

2、1测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量，因雷公藤药材中成分较为复杂，采用薄层法难以得到较好的别离效果，且其展开显色后极不稳定，显色剂褪色较快，难以得到较好的测定结果。为了有效地控制其质量，国家药品标准行动方案组下达了进步雷公藤片质量标准的任务。通过实验研究，本文建立了HPL法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量，经研究其中雷公藤甲素在所选用条件下别离较好，检测灵敏度高，测定专属性强，可以作为本品的含量测定控制方法。1仪器与试药HP-1100型高效液相色谱仪Ajilent公司，美国；大连依利特Hypersil18液相色谱柱2004.6，5；雷公藤甲素对照品中国药品生物制品检定所，批号0857-9601；甲醇

3、为色谱纯，水为重蒸水；其他试剂为分析纯；雷公藤片由湖北三九黄石药业提供。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为大连依利特Hypersil18液相色谱柱2004.6，5；甲醇-水4060为流动相；检测波长218n；流速1l/in；柱温：35；理论板数按雷公藤甲素峰计不低于3000。2.2供试液制备方法和洗脱液用量的选择2.2.1供试液制备方法的选择雷公藤制剂中成分较为复杂，不经提取精制难以得到较好的别离效果，参照常雪灵等2的文献报道，进展了提取精制方法的考察。精细称取样品粉末约1g，加醋酸乙酯20l，超声使溶解，加5%Hl溶液15l洗涤两次，弃去酸液，醋酸乙酯液加10%NaH溶液20l，水浴加热15

4、in，分取碱液，并用10%NaH溶液20l萃取两次，合并碱液，加稀Hl调pH至4，以醋酸乙酯20l萃取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10l作为供试品溶液。精细称取样品粉末约1g，加氯仿10l，超声10in，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱内径12，100200目，10g，以醋酸乙酯溶液洗脱，搜集洗脱液150l，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10l作为供试品溶液。精细称取样品粉末约1g，加氯仿10l，超声10in，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱内径12，100200目，10g，以10%醋酸乙酯石油醚609050l洗脱，再以1%乙醇醋酸乙酯溶

5、液洗脱，搜集洗脱液100l，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10l作为供试品溶液。取上述3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表1。表13种提取别离方法测定结果略结果说明：采用上中性氧化铝柱提取别离效果较萃取法好，方法3中用10%醋酸乙酯石油醚609050l洗脱主要是除去杂质，但经比拟此法对别离影响不大，而以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脱对测定结果无多大影响，但洗下较多杂质，基线波动较大，杂质峰较多，对别离造成一定影响，故采用方法2作为含量测定方法。2.2.2溶剂用量的选择精细称取样品粉末约1g，共3份，分别加氯仿10l，超声10in，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱内径12，100

6、200目，10g，以醋酸乙酯溶液洗脱，分别搜集洗脱液100，150，200l，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10l作为供试品溶液。将3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表2。表23种溶剂用量测定结果略结果说明，以醋酸乙酯溶液洗脱，搜集洗脱液150l较适宜。2.2.3流动相的选择以乙腈-水3070作为流动相进展试验，结果雷公藤甲素出峰较快，样品溶液难以得到较好别离，改用1585，2080，2575等雷公藤甲素均不出峰，最后选用甲醇-水4060为流动相，雷公藤甲素出峰时间约为11in，样品溶液别离较好，无杂质峰干扰。2.3含量测定2.3.1对照品溶液的制备精细称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制

7、成每毫升含0.01g的溶液，作为对照品溶液。2.3.2供试品溶液的制备取本品30片，称定重量，研碎，精细称取10片量，加氯仿10l，超声10in，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱内径12，100200目，10g，以醋酸乙酯溶液洗脱，搜集洗脱液150l，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10l作为供试品溶液。2.3.3线性关系考察精细称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.0238g的溶液作为对照品贮备液。精细汲取对照品贮备液1，2，4，6，8，10l，分别置10l容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20l，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，雷公藤甲素对照品进样量为横坐标，

8、绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=2110.8X+3.7，r=0.9991，结果说明雷公藤甲素对照品在0.04760.4760g范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.3.4精细度实验精细汲取同一对照品溶液20l，重复进样5次，测定雷公藤甲素的吸收峰面积，RSD为1.84%，说明精细度良好。2.3.5稳定性实验精细汲取同一供试品溶液批号040311，分别间隔2h进展测定，以雷公藤甲素的吸收峰面积进展考察，进样6次，测得RSD为2.39%，说明样品在12h内根本稳定。2.3.6重复性实验分别精细称取同一批号批号040311样品粉末5份，每份约1g，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，结果样品中雷公藤

9、甲素的平均含量为11.48g/g，RSD为1.36%，说明本法重复性良好。2.3.7加样回收实验精细称取含量的样品批号0403116份，分别精细参加雷公藤甲素对照品溶液0.05048g/l1l，参加氯仿10l，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。6次平均回收率为101.2%，RSD为2.1%。结果见表3。表3加样回收实验结果略2.3.8样品含量测定取本品30片，称定重量，研碎，精细称取10片量，按供试品溶液制备方法制备。精细汲取供试品溶液及对照品溶液各20l，依法进展测定，结果见表4。雷公藤甲素和雷公藤片样品的高效液相色谱图见图12。表4样品含量测定结果略3小结本实验结果说明，HPL法可以取代原标准中用薄层扫描法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量。4批样品雷公藤甲素含量均在0.01g/片之上，但考虑到雷公藤片片重差异