免疫学技术在食品安全检测应用课件

1、免疫学技术在食品安全检测中的应用组员：小组成员分工资料搜索： PPT制作：后期审阅：所选论文：免疫学技术在食品安全检测中的应用论文作者：郎需龙 刘文森 王兴龙 作者所在单位： 解放军军事医学科学院 军事兽医研究所动物性食品安全研究室论文发表日期：2009年5月25日2 本小组所选的论文中一共提到8种免疫学技术，但其中只有4种是我们学过的，因此本次的PPT汇报中仅列出了学过的4项。3免疫荧光技术 论文中提及的检测技术酶联免疫吸附实验免疫芯片 免疫传感器技术12344酶联免疫吸附实验(ELISA) 酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，

2、是将可溶性抗原（抗体）吸附到某种固相载体表面，并保持抗原（抗体）免疫活性，这样在与标本中的抗体（抗原）反应后，只需经过固相洗涤的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其他物质分离，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。5试验所需试剂固相抗原或抗体酶标记的抗原或抗体酶作用的底物ELISA方法中78单击此处添加标题ELISA常用技术类型间接法双抗体夹心法竞争法捕获法10间接法 间接法是检测抗体最常用的方法，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）

3、与之结合形成固体抗原复合物。洗涤后，计入酶标二抗与故乡复合物中的抗体结合，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。最后加酶的底物显色，终止反应后，目测性或用酶标仪测光密度值测定，颜色的深度与标本中受检抗体的量成正比。11双抗体夹心法 双抗体夹心法常用于测定大分子及颗粒多价抗原。将已知抗体A吸附于固相载体上，加入待检标本（喊相应抗原）与之结合形成固相抗体-A-抗原复合物。温育后洗涤，加入酶标抗体B形成固相抗体-A-抗原-酶标抗体B夹心式复合物，固相载体上带有的酶量与标本中待测物质量成正比。最后加入底物，夹心式复合物的酶催化底物成为有色产物，颜色的深度与抗原的量成正比。12捕获法 捕获法（亦称反向间

4、接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。先将针对IgM的第二抗体（如羊抗人IgM链抗体）连接于固相载体，用以结合（“捕获”）样品中所有IgM（特异或非特异），洗涤出去IgG等无关物质，然后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异的酶标抗体，最后形成固相二抗- IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物作用显色后，即可对样品中待检IgM是否存在及其含量进行测定。14免疫荧光技术1517方法分类直接法间接法补体法18直接法192021免疫传感器技术22 免疫传感器是以抗原抗体作为分子感应器的生物传感器，利用抗原与抗体专一性结合引起的直接或间接物理化学变化，通过一定的信号

5、转化，大多转化为光信号，再经过放大处理即可检测出反应物量的变化，通过相关仪器可以进行某些物质的分析检测。 免疫传感器一般有三部分组成：分子感应器、转导体、电子滤波放大器 免疫传感器类型：非标记免疫传感器和标记免疫传感器24非标记免疫传感器 抗原抗体直接或间接的方式连接至转导体上，当抗原和抗体在相互结合后，它们的结构发生了变化，这种结构的改变可以通过化学、光学、压电和热量改变的变化表现出来，从而能被转导体直接或间接检测到。25免疫传感器在食品中的应用 免疫传感器在食品中的应用，主要体现在对食品中的有毒有害物质的检测。食品中的有毒有害物质有生物性物质，如细菌、真菌、有毒动植物和病毒及其产生的毒素或

6、特征蛋白质。目前已成功运用于测定污染食品的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门菌，利用光纤传感器与核酸放大系统相偶联，可检测食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物质（包括农药、激素等小分子半抗原物质）。27免疫芯片28 免疫芯片分析的实质是在很小的表面积上有序的集成多重抗原（或抗体），利用抗原与抗体可进行特异性的结合反应来进行检测。 免疫芯片是由于固定于不同种类支持载体上的抗原或抗体微阵列组成，阵列中固定成分的位置及组成是已知的，用标，然后精确定位提取信号，通过计算机综合记录分析。 免疫芯片根据原理不同可分为间接法、双抗体夹心法、竞争法免疫芯片和免疫-PCR芯片。29免疫芯片构建步骤一、确定检测目标，建立抗原抗体库二、载体及抗原或抗体的固定三、抗原抗体反应与分析检测30免疫芯片技术的优点 只需要少量的样品，最突出的优点是通过一次检测即可获得几种甚