再用CTAB溴化十六烷基三甲铵络合法进一步精制得银耳多糖纯品并课件

1、再用CTAB溴化十六烷基三甲铵络合法进一步精制得银耳多糖纯品并再用CTAB溴化十六烷基三甲铵络合法进一步精制得银耳多糖纯品 实训七、银耳多糖的制备及鉴定 实验原理 2材料用具 3操作方法 4目的要求 2155注意事项 实训七、银耳多糖的制备及鉴定 实验原理 目的要求了解银耳多糖制备的基本原理 掌握糖类物质提取纯化的基本操作技术 目的要求了解银耳多糖制备的基本原理 掌握糖类物质提取纯化的基原理 银耳多糖主要成分为酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类，不含核酸、蛋白质类物质。 可利用银耳子实体经水浸泡捣碎，酶浸提，乙醇沉析分离可制得银耳多糖粗品，再用CTAB (溴化十六烷基三

2、甲铵)络合法进一步精制得银耳多糖纯品并进行多糖的鉴定。 原理 银耳多糖主要成分为酸性杂多糖、中性杂多糖、可利用银耳子材料用具 银耳子实体干品（50g左右） 烧杯 、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、量筒、离心机、恒温水浴锅、透析袋 、滤纸、组织捣碎机、不锈钢锅。材料用具 银耳子实体干品（50g左右） 烧杯 、布氏漏斗、抽试剂 （1）1复合酶制剂(含果胶酶、纤维素酶和中性蛋白酶食品级复合酶)；（2）2溴化十六烷基三甲铵（CTAB）配制：取2 g CTAB溶于100 mL蒸馏水中，摇匀备用；（3）-萘酚配制：-萘酚5g溶于95乙（4） 5%三氯乙酸-正丁醇溶液；（5）2molL的氢氧化钠溶液；（6）甲苯

3、胺乙醇溶液； （7）2molL氯化钠溶液；（8）2molL盐酸溶液；（9）活性炭；硅藻土。（10）1融菌酶制剂；（11）无水乙醇；（12）浓硫酸； （13）乙醚。试剂 操作方法 20 g锈钢锅中 加水1600 mL 2025浸泡30min 捣碎机中捣碎 银耳浆液 操作方法 20 g加水2025捣碎机银耳操作方法2molL盐酸溶液调pH至 加入1复合酶制剂 50下酶促反应40min 银耳浆液 80灭酶，保温浸提约 80水浴浓缩 操作方法2molL盐酸溶液调pH至 加50下银耳 80操作方法等体积5三氯乙酸-正丁醇溶液 摇匀 离心（3000r/min）15 min 浓缩液 3.多糖的沉淀（有机酸除

4、杂） 下层清液备用 吸去上层正丁醇中层变性蛋白 操作方法等体积5三氯乙酸-正丁醇溶液 摇匀 离心浓缩液 3操作方法2molL的氢氧化钠溶液调pH至7 摇匀 抽滤 3.多糖的沉淀（脱色、透析 ） 下层清液备用 加1活性炭80加热15 min脱色 滤液扎袋流水透析12h 80水浴浓缩抽滤 操作方法2molL的氢氧化钠溶液调pH至7 摇匀 抽滤 3操作方法加3倍量95乙醇 摇匀 3.多糖的沉淀（乙醇沉析 ） 抽滤液离心（3000r/min）15min 沉淀用无水乙醇洗2次 乙醚洗涤1次 50以下真空干燥 操作方法加3倍量95乙醇 摇匀 3.多糖的沉淀（乙醇沉析 操作方法4.精制（一） 取粗品1 g

5、溶于100 mL水中 搅拌静置2h2 CTAB 滤液 离心除不溶物60解离4 h 离心3000r/min15 min80热水洗 氯化钠 2molL溶液100 mL 操作方法4.精制（一） 取粗溶于100 mL水中 搅拌2滤操作方法4.精制（二） 解离液加三倍量95乙醇 透析液80浓缩 离心3000r/min15 min精品银耳多糖 离心3000r/min15 min沉淀用无水乙醇、乙醚洗涤 上清液流水透析10h 50真空干燥 操作方法4.精制（二） 解离液加透析液精品沉淀上清液50操作方法5.多糖的鉴定（一） 观察硫酸层与糖溶液界面处颜色变化 透析液1 mL -萘酚溶液2滴 颜色变化摇匀 沿管壁缓加入浓硫酸1.5 mL(勿振动)操作方法5.多糖的鉴定（一） 观察硫酸层与糖溶液界面处颜色变操作方法5.多糖的鉴定（二） 透析浓缩透析浓缩2 mL 点于滤纸 甲苯胺乙醇溶液染色 加入2CTAB溶液24滴 观察现象 操作方法5.多糖的鉴定（二） 透析透析点于滤纸 甲苯胺乙醇注意事项1.酶促反应的时间、温度应控制好。 2.在制备全流程中应时刻注意温度， 不能超过80 注意事项1.酶促反应的时间、温度应控制好。 2.在制备全流程思考 题1加入复合酶制剂有何作用？ 2CTA