硫磺熏蒸对菊花中有效成分含量影响研究

1、硫磺熏蒸对菊花中有效成分含量影响研究【摘要】目的考察硫熏枯燥对菊花中有效成分的含量影响。方法采用HPL法测定自然枯燥和硫磺熏蒸枯燥菊花中绿原酸、槲皮素、木犀草素的含量；采用分光光度法测定菊花中总黄酮的含量；采用盐酸副玫瑰苯胺法测定各菊花中S2的残留量。结果与自然枯燥的菊花相比，硫熏菊花中的槲皮素、木犀草素和总黄酮含量低于前者，而绿原酸含量高于前者，S2的残留量远远高于前者。结论硫磺熏蒸对菊花中有效成分的含量变化有一定的影响，建议产地加工时应限制使用硫熏枯燥法。【关键词】菊花；硫熏枯燥；绿原酸；槲皮素；木犀草素；总黄酮菊花是菊科植物菊花hrysantheurifliuRaat的枯燥头状花序,为我

2、国常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒之成效。临床上主要用于治疗头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮肿毒等症。目前市售的菊花多采用硫磺熏蒸的方法加以枯燥，以到达漂泊、美化外观和防霉生虫等目的。但硫磺熏蒸后的药材是不利于入药的，因为其中残留的亚硫酸盐会对人体造成咽喉疼痛、胃部不适等伤害。此外，熏蒸后产生过多的S2也会对大气造成严重污染。为考察硫磺熏蒸对菊花中绿原酸和黄酮类化合物含量的影响，今对自然枯燥菊花与硫熏菊花中绿原酸、槲皮素、木犀草素及S2的残留量进展了含量测定研究，为菊花资源的科学应用提供参考。1仪器与材料1.1仪器戴安Ultiate3000高效液相色谱仪,Ultiate3000四元泵，Ul

3、tiate3000variableavelength检测器，haelen工作站，KQ-250B超声波清洗器昆山市超声仪器，Spetru922E型分光光度计。1.2材料白菊花采自河北安国祁药标准化种植基地。芦丁对照品100080-202207、绿原酸对照品110753-202203、木犀草素对照品111720-202203、槲皮素对照品100081-202206均购自中国生物制品检定所。甲醇采用色谱醇，水为重蒸馏水，其余均为分析醇。2方法与结果2.1硫磺熏蒸菊花的制备将新采摘的菊花头状花序摊放于直径为90的带有支架的尼龙丝网圆筛中，把自制的体积约1.263聚氯乙稀罩自上而下套在外面，距地面约为1

4、0。将适量的硫磺置于陶瓷器皿中，点燃后迅速推入到垂直于圆筛的下方地面上，待其燃烧完全后，将聚氯乙稀罩下调至和地面充分接触，形成密封环境，保存12h后取出，通风至干，备用。2.2绿原酸的含量测定12.2.1色谱条件及系统适用性色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1l/L磷酸二氢钠溶液-甲醇7030为流动相；检测波长328n，流速1l/in。此条件下绿原酸的保存时间为6.61in。2.2.2对照品溶液的制备精细称取绿原酸对照品适量，置于棕色量瓶中，加水制成64g/l，即得。2.2.3供试品溶液的制备取菊花粉末约2g，精细称定，置锥形瓶中，精细参加甲醇100l，称定质量，加热回流2h，冷却，再

5、称定质量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤液5l，蒸干，残渣参加氯仿5l，浸3in，弃去，加水适量溶解，转移至10l量瓶中，加水至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得。2.2.4标准曲线的制备分别精细汲取对照品品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，3.0l，定容至10l，摇匀。汲取以上溶液80l，注入液相色谱仪，定量20l测定。以峰面积对浓度进展回归，得回归方程：Y=1085.82467X-1.33989R=0.9996，说明绿原酸在浓度0.0640.382g/l范围内线性关系良好。2.2.5精细度实验取供试品溶液，重复进样5次，记录绿原酸的峰面积，计算RSD=1.21%，说明精细度良

6、好。2.2.6重复性实验精细称取供试品5份，按“2.2.3项下方法分别制成供试品溶液，进样分析，记录绿原酸峰面积，结果RSD=1.67%，结果说明本法重复性良好。2.2.7稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，6，8h测定，记录绿原酸峰面积，计算RSD=1.33%，外表样品在8h内稳定。2.2.8回收率实验精细称取供试品1.0g，按高、中、低分别参加绿原酸，照“2.2.3项下方法制备、测定，测得绿原酸平均回收率为97.51%，RSD=1.98%。2.2.9样品的测定分别精细称取各种样品，按“2.2.3项下方法，制成供试品溶液，注入高效液相色谱仪进展测定，记录绿原酸的峰面积，计算含量。

7、结果见表1。表1各菊花中绿原酸含量测定结果略2.3槲皮素与木犀草素的含量测定22.3.1色谱条件及系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相是甲醇-水6040，用磷酸调pH值为3；检测波长253n，流速1l/in。此条件下槲皮素的保存时间为8.97in，木犀草素的保存时间为10.72in。2.3.2对照品溶液的制备称取枯燥至恒重的槲皮素与木犀草素对照品适量，用甲醇溶解，定容至50l，得质量浓度分别为0.0164，0.018g/l混合对照溶液，备用。2.3.3供试品溶液的制备精细称取菊花粉末1g，置锥形瓶中，加70%乙醇30l在60恒温水浴温萃30in，冷却，抽滤，洗涤至100l量瓶中，

8、用70%乙醇定容至刻度，摇匀。精细汲取5l溶液，参加1l浓度为4l/L的盐酸于80恒温水浴水解1h。用70%乙醇定容至10l，微孔滤膜滤过，即得。转贴于论文联盟.ll.2.3.4线性关系的考察精细汲取对照品溶液1，2，4，6，8l定容至10l。汲取上述溶液，注入液相色谱仪，定量20l，分析测定。以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：槲皮素为Y=1584.4317X+0.70387(R=0.9994)；木犀草素为Y=376.6681X+0.5812(R=0.9996)，说明槲皮素在0.32813.12g/l浓度范围，木犀草素在0.3614.44g/l浓度范围内线性关系良好

9、。2.3.5精细度实验取供试品溶液，重复进样5次，分别记录槲皮素和木犀草素峰面积，计算RSD分别为1.86%和1.91%，说明精细度良好。2.3.6重复性实验精细称取供试品5份，按“2.3.3项下方法分别制成供试品溶液，进样分析，记录槲皮素和木犀草素峰面积，结果RSD分别为1.89%和1.77%，结果说明本法重复性良好。2.3.7加样回收率实验取一样品粉末，精细称取5份，分别参加混合标准溶液1l，按“2.2.3项下方法制备、测定，测得槲皮素平均回收率为98.11%，木犀草素平均回收率为96.83%，RSD分别为1.94%和1.86%。2.3.8样品的测定各样品按“2.3.3项下方法，制成供试品

10、溶液，注入高效液相色谱仪进展测定，记录槲皮素和木犀草素的峰面积，计算含量。结果见表2。表2各菊花中槲皮素和木犀草素含量测定结果略2.4总黄酮的含量测定22.4.1对照品溶液的制备称取芦丁适量，用70%乙醇溶解，置50l量瓶中，制成浓度为0.226g/l溶液，备用。2.4.2供试品溶液的制备精细称取菊花粉末1g，置锥形瓶中，加70%乙醇30l在60恒温水浴温萃30in，冷却，抽滤，洗涤至100l量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀。精细汲取3l于10l量瓶中，用30%乙醇定容，分别精细汲取2l于10l试管中，加5%亚硝酸钠溶液0.3l，振摇均匀放置6in，再加10%硝酸铝，震荡均匀，放置6in，

11、再加4%氢氧化钠4l，振荡摇匀，用30%乙醇定容，放置10in后置比色皿中于510n处测定吸光值。以30%乙醇为空白溶液。2.4.3标准曲线的制备精细汲取芦丁对照液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0l，分别置10l量瓶中，参加5%亚硝酸钠溶液0.3l，振摇均匀放置6in，再加10%硝酸铝0.3l，振荡均匀，放置6in，再加4%氢氧化钠4l，振荡摇匀，用30%乙醇定容至刻度，振荡摇匀，放置10in后采用分光光度法，在510n处测定吸光值，以对照品浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=1.0796X+0.0328(R=0.9915),说明芦丁在浓度0.2261.13

12、g/l范围内线性关系良好。2.4.4样品的测定按“2.4.2项的方法制成供试品溶液，依法测定。结果见表3。表3各菊花中总黄酮含量测定结果表略2.5S2残留量的测定32.5.1对照品溶液的制备称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200l四氯汞钠吸收液中，放置过夜，上清液用定量滤纸过滤后用硫代硫酸钠标准溶液标定其浓度，再用四氯汞钠吸收液稀释成2g/l做标准液。盐酸副玫瑰苯胺溶液；称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100l。取出20l于100l容量瓶中，加浓盐酸8.0l混匀，待溶液由红变黄后稀释至该度备用。2.5.2供试品溶液的制备精细称取3g样品于100l容量瓶中，加20l四氯

13、汞钠吸收液，放置过夜，加水稀释至刻度，过滤，弃去初滤液，滤液待测。2.5.3亚硫酸氢钠标准溶液的标定汲取10l亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250l碘量瓶中，加100l水，准确参加20l0.05l/L碘溶液，5l冰醋酸，摇匀，置暗处2in后，迅速以0.1l/LNa2S23标准溶液滴定至淡黄色，加0.5l淀粉指示剂呈蓝色，继续滴定至无色。另取100l碘量瓶，准确参加20l0.05l/L碘溶液，5l冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。2.5.4标准曲线的制备精细汲取0.2，0.4，0.8，1.2，1.6lS2标准使用液，分别置于25l具塞比色管中，于标准管中各参加四氯汞钠吸收液至10，12g/L氨基磺酸

14、铵溶液1，10.4%甲醛溶液1l，盐酸副玫瑰苯胺溶液1l混匀。放置20in，室温下用比色皿以零管调零，于波长550n处测吸光度，绘制标准曲线。得回归方程为：Y=0.0395X-0.01456，R=0.9996，样品在0.43.2g/l范围内有良好的线性关系。2.5.5样品的测定按“2.5.2项的方法制成供试品溶液，依法测定。结果见表4。表4不同枯燥方法菊花中S2残留量结果略3讨论由表1可知，硫熏菊花中绿原酸的含量要高于自然枯燥的菊花，并且随着硫磺剂量的增多和熏蒸次数的增多，绿原酸含量也依次增高，这与菊花中存在的多酚氧化酶(PP)有关。PP是一类广泛存在于植物体内的能催化多酚类氧化成醌类的含铜质

15、体金属酶，多分布于花、叶片、块茎、根等组织中。绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸生成的缩酚酸，由于其分子构造中存在邻苯二酚构造，所以在有氧条件下极易被PP氧化成醌类物质，产生褐变反响4。硫磺熏蒸产生大量的S2使得菊花中亚硫酸氢盐的浓度增高，而亚硫酸氢盐如NaHS3可以降低PP的酶促反响强度，推延反响时间。并且NaHS3为复原剂，能将反响体系中的酚氧化产物醌进一步复原为酚，从而抑制了绿原酸被氧化，保证了绿原酸的含量。因此，硫熏菊花中绿原酸的含量要高于自然枯燥的菊花。由表2和表3可知，硫磺熏蒸后，菊花中的槲皮素和木犀草素的含量下降，总黄酮含量也下降，但降低程度与硫磺用量未见明显规律。表4中，采用2g硫磺熏干

16、后的药材中S2残留量约为自然枯燥菊花中S2量的5倍。自然枯燥的菊花中也存在微量的S2。原因是大气中存在的S2可以进入叶片，这是植物吸收硫营养的次要形式。此外，土壤中的硫酸盐为植物提供了丰富的S42-，进入植物体内的硫酸根离子在5-腺苷磷酸硫酸复原酶的作用下5，复原成S32-。因此，自然枯燥的菊花中S2残留量为0.1724g/g。由于熏制药材所用硫磺多为天然品，含有一定量的二硫化二砷，燃烧后，二硫化二砷与空气中的氧发生反响，生成三氧化二砷，有损于人体安康,对肝肾功能不全者危害尤重6，同时还会使一些有效成分损失。虽然硫磺熏蒸可以使菊花中的绿原酸免受酶解破坏而起到保护作用，但考虑到硫熏药材中残留的亚硫酸盐对人体造成的多种伤害，建议产地加工时应限制使用硫熏枯燥法。【参考文献】1贾凌云，孙启时，黄顺旺.八大品种菊花中不同成分的含量比拟J.中草药，2022,35(10):1180.2郭巧生，汪涛，程俐陶，等.不同栽培类