药品生产环境监控体系 201203

1、药品生产环境监控体系全国医药技术市场协会（杭州） 沈菊平 201203内容洁净区环境监测1，洁净区级别标准2，洁净区的验证和监测3，洁净区环境监测方案4，环境监测仪器、设备、培养基趋势分析和质量回顾1，警戒限和纠偏限的设定2，趋势分析3，质量回顾口服药品环境监测环境监测结果超标案例分析常见问题探讨2洁净区环境监测31，洁净级别及标准洁净级别悬浮粒子最大允许数/米3 At rest / 静态In operation / 动态Grade 0.5m 5.0m 0.5m 5.0mA3 520203 52020B3 52029352 0002 900C352 0002 9003 520 00029 00

2、0D3520 00029 000不作规定Not defined新版GMP（2010修订）和 EU -GMP、WHO-GMP 2010建议稿标准一致。4级别b浮游菌CFU/m3沉降碟（90mm）CFU/4小时c接触碟（55mm）CFU/碟5指手套CFU/手套A 1 111B10555C1005025D2001005051，洁净级别及标准微生物控制动态标准2，洁净区验证和监测悬浮粒子的要求：附录1 第九、十条1、A级区确认时的采样量不少于1m32、洁净区的动态监测悬浮粒子的动态监测关键操作的全过程，对A级区进行粒子监测A级区的监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发事件及任何系统的破坏B级区：类似

3、于A级区，采样频率、采样量可以调整C级区：质量风险管理原则确定D级区：一般不作要求，（法规：必要时）对于C/D级区的自净时间应达到规定要求62，洁净区验证和监测取样量和取样点ISO14644-1 B.4.2 节有明确的采样量的计算公式： 采样量（升）=(20/级别中最大粒子限度）1000，显然对于A 级，采样量为(20/20)1000 = 1 米3 从上式中可见，级别要求越低，取样量就越小取样点数由B.1.1公式： 取样点数 , A为洁净区面积，例如10米5米的区域，取样点应为8（取整数） 取样点均匀分布，位于工作面高度注意：这里仅指在洁区划分时加以采用7取样点的确定-GB洁净区（室）空气悬浮

4、粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数 面积m2洁净级别10010000100000300000102322210204222204082224010016422100200401033200400802066400100016040131310002000400100323220008002006363来源：GB/T 16292-16294，20108微生物的要求：附录1 第十一条监测方法有：1，空气浮游菌监测沉降菌法-被动法定量空气浮游菌采样法-主动法2，环境表面监测表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）3，人员监测表面取样法（接触碟法）92，洁净区的验证和监测1，空气浮游菌监测沉降菌法-被动法

5、沉降碟在空气中的暴露时间4小时监控整个灌装过程只能给出定性和半定量的数据应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价定量空气浮游菌采样法-主动法撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）仪器应经过校验102，洁净区的验证和监测2，环境表面监测：表面取样法应对接触产品表面、设备、地面、墙面等定期监测接触蝶法：适用于平整表面取样面积25cm2 培养基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样 培养基中应含有中和剂/保护剂棉签擦拭法：适用于不规则表面取样面积25cm2 定性或定量表面样应在无菌操作结束时取以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险112，洁净区的验证和

6、监测2，洁净区的验证和监测3，人员监测表面取样法（接触碟法），取样时间一般为：工作结束，离开洁净区前取样处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）生产过程中随时监测特别注意：不得在刚消毒过后取样122，洁净区验证和监测每个手套(5只手指) 胸口处衣帽结合处帽兜额头处靴子与工作裤接口处 前臂13无菌区人员更衣确认和监测其它事项每个受训者必须经过3次更衣试验确认合格后才能进入无菌操作区。 资格确认合格的操作员工每年需重复一次更衣试验。 当有已确认合格的人员有违反更衣程序趋向时，须重复l3次更衣试验。连续3次监测不合格人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。在连续10次监测中，如有4次不合格的

7、人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。采样点参考标准（CFU皿）采样点参考标准（CFU皿）手套3口罩10胸口5前额5前臂5靴子裤子接合处5无菌区人员监测合格标准142，洁净区验证和监测3，环境监测方案洁净区应制定系统的环境监测方案，包括动态监测和静态监测。关键项目：悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物。取样计划的影响因素：产品类型、生产过程、设施/工艺设计、生产密度、人为干扰、环境监测历史数据等。取样点的选择主要取决于洁净室的设计和生产要求。环境监测计划案例。环境监测动态标准。15环境监测方案环境监控整体要求洁净区监测年度洁净级别确认日常环境监测动态监测静态监测无菌生产区A/B最终灭菌

8、C级的主要功能间C级区域D级区域16洁净区年度级别确认测试项目空气洁净度测试静压差测试 风速或风量测试换气次数温度相对湿度照度噪声17取样区域取样频率百级或更严 Class 100 or better room designations1次/班毗邻百级区如万级 Supporting areas immediately adjacent to Class 100 (e.g.， Class 10，000)1次/班其它辅助区域10万级 Other support areas2次/周可能与产品/容器接触区域 Potential product/container contact areas2次/周10

9、万级或以下 or lower Other support areas to aseptic processing areas but non-product contact1次/周参考：USP341116从表中可以看出，美国药典中没有明确B级，但有100级、1 万级、10万级甚至更低级别，划分比较灵活，按需要而定。美国药典微生物监测频率18环境监测方案环境监测案例19环境监测案例20环境监测案例21洁净区监测的位置取样位置选择时考虑因素：哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？在生产过程中，什么地点最容易长菌？哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？什么活动会导致

10、污染的扩散？在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？22洁净区监测的位置应符合“GB16292-2010” “GB16294-2010”的要求基于风险的设计监测点设置在潜在风险最大的位置药品容器连接处人流和物流经过的地方监测点靠近“工作高度”23注：GB1629216294，分别是洁净区悬浮微粒子、浮游菌、沉降菌的监测。洁净区监测的位置24系统取样点环境空气（灌装线）接近敞开和/或者已灌装的容器洁净室空气最接近工作区域水使用点表面（厂房）地面、门把手、墙、帘子表面（设备）灌装线、 控制面板、供胶塞的料斗压缩空气离开压缩机最远点无菌检查系统最接近真

11、空源的接口灌装线操作人员至少要检手指印 单向流（例如，单向流罩）靠近活动最多的区域示例洁净区监测的位置示例：无菌灌装线取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如：在灌装针头处将产品装载入冻干腔室处胶塞供料桶无菌部件进行连接操作的部位操作人员频繁活动处（不影响生产过程）注意：靠近产品，但不接触产品的位置25粒子在线监测布置图例26123传感器低于机器，采样管伸入灌装操作区内粒子在线监测布置图例灌装后冻干前监测点位置：药瓶是半封闭状态（敞口）保证灌装后，冻干前的环境区域是受控的。正确的取样点位置：靠近传送带。27浮游菌、沉降菌取样点沉降菌、浮游菌：监控点位置，高度一般为离地80cm左右，或操作台面

12、。浮游菌、沉降菌监控点的设置根据生产工艺及污染风险综合考虑。28洁净区表面微生物取样点C级区取样点：一般为地面、墙面及操作人员十指手套。对C级下的局部A级区取样宜在生产结束后进行，避免造成污染。地面取样墙面取样灌装机（A级）产品转移（A级）29洁净区表面微生物取样点B级区接触碟取样位置应能及时发现潜在污染风险，在受污染可能性较高的位置布点。无菌分装设备门进出B级区门把手仪器、设备操作键、触摸屏等传递窗门把手30-31-文件记录中应包括：监测时间和日期测试方法的参考依据测试点的活动情况设备标识位置卫生级别标有取样点的区域图取样点测试结果评估人员结果读取日期警戒/纠偏限度培养温度和培养时间文件和记

13、录31-32-文件记录中应包括:培养基有关信息污染菌鉴别结果复核人数据报告历史数据回顾变更控制系统设备校验日期各限度的确定原理与具体分析调查/纠偏措施的文件记录文件和记录324，环境监测常用仪器/设备/培养基33沉降菌/浮游菌直径：90mm浮游菌监测AirIDEAL 3P 100升/分悬浮粒子监测PMSLasair28.3升/分 表面微生物监测直径：55mm2500 模块化控制器Modbus TCP/IP真空泵Airnet 5104-20MA信号HUB6180XIO 欧陆显示器工作站粒子在线监测仪34可以增加浮游菌采样空气悬浮粒子连续监测系统的要求： 欧盟GMP附录1、中国GMP（2010）附

14、录1 在确认级别时，应使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器，避免5.0m悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降 。在单向流系统中，应当采用等动力学取样头。 欧盟GMP附录1 使用远程采样系统时，必须根据粒子在管路中的损失来考虑管长和管子的弯曲半径 PIC/S PI 032-2- 强调5.0m悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降效应粒子在线监测注意点35适用于圆弧表面取样外盖带锁扣36表面带有锁扣，可以避免因取样结束后平皿意外跌落等麻烦具有一定 的韧性，可以进行适当弯曲，适合不规则表面或圆弧取样预制培养基特殊预制平板使用前擦拭后37预制培养基无菌擦拭棒SCD培养基颈部保护套拭子使用方法： 1、

15、拔除下端保护套，取出拭子用 无菌液体润湿 2、擦拭取样表面（一般为25cm2） 3、取样结束后将拭子放回保护套 4、将擦拭棒颈部掰断，上端SCD 培养基流入保护套中并浸没拭子5、将整个擦拭棒放入培养箱培养SCD培养基无菌试验预制培养基 一般TGC配制后会有氧化层，中国药典规定在无菌试验前其氧化层高度不得高于培养基高度的1/5，培养结束后其氧化层高度不得高于培养基高度的1/3。图中TGC培养基瓶中充入保护性气体（抗氧化），有利于试验结果的判断。38预制培养基预制培养平板包装无菌区使用预制平板：一般采用三层包装形式：55mm接触平板90mm预制平板39预制平板进入洁净区预制平板进入无菌区，须避免对

16、监控区域的污染。去除最外层包装 放入传递窗开启紫外灯消毒或用酒精喷洒外表面消毒处理40预制平板脱包装经传递窗进入洁净区的预制培养平板继续脱去外面两层包装就可以使用。脱出第二层包装脱出第三层包装脱包装后单个平板41自制平板传输包装形式不锈钢密保容器外套密封塑料袋传输消毒脱除外袋容器消毒后输入42预制平板使用示意图接触碟表面取样示意图：1，取样点采样2，取样位置消毒 3，用无尘布清洁4，标明取样点编号5，平板入无菌保管袋6，保管袋密封待培养43预制平板使用示意图浮游菌监测示意图：使用前喷酒精进行消毒，开启至少5分钟消毒完成，放入90mm平板装上无菌采样托盘设置采样量，启动采样采样完成取出平板（有明

17、显凹坑）盖上培养皿盖，装入无菌保管袋待培养未经采样空白平板44趋势分析和质量回顾1，警戒限和纠偏限的设定2，趋势分析3，质量回顾451，警戒限和纠偏限的设定应设定在法定标准值以下。警戒限根据验证数据根据历史监测数据并进行趋势分析后制定纠偏限参考GMP和药典等法规要求根据历史监测数据并进行趋势分析后制定46警戒限和纠偏限的设定设定的基准值不只是用来判定合格与否，而是用于过程控制的设定值。若监测结果显示超过基准值，根据各个基准值的定义采取相应的处理措施。关键项目应年度趋势分析，根据趋势分析的结果制定警戒限和纠偏限。GMP 第一百零一条应当按照操作规程对纯化水、注射用水管道进行清洗消毒，并有相关记录

18、。发现制药用水微生物污染达到警戒限度、纠偏限度时应当按照操作规程处理。4748法定标准运行设定标准运行通常值管理设计目标纠偏限Action Level纠偏限Action Level警戒限Alert Level警戒限Alert Level警戒限和纠偏限的设定设定示例洁净度级别尘埃粒子数（0.5m）浮游菌警戒限 (m3 )纠偏限 (m3 )警告限 (cfu/m3 )纠偏限 (cfu/m3 )A1,7603,520 1B1,7603,5205 10C176,000352,00050 10049设定示例洁净度级别表面微生物设备/器具 地面警戒限 (cfu/25cm2 )纠偏限 (cfu/25cm2 )

19、警戒限 (cfu/25cm2 )纠偏限 (cfu/25cm2)A - 13 5B3 55 10C13 2515 30502，趋势分析GMP要求第二百二十一条质量控制实验室的文件应当符合第八章的原则，并符合下列要求： （三）宜采用便于趋势分析的方法保存某些数据（如检验数据、环境监测数据、制药用水的微生物监测数据）； ICH-Q10、EU GMP、PIC/S也有类似要求数据处理-趋势分析确定分析目标用警戒/纠偏值来确定监测数据确认现行的警戒/纠偏限度及标准是否恰当采取的“纠偏措施”定期报告来更新管理。年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾513，质量回顾GMP要求，第十章 第八节产品质量回顾分

20、析第二百六十六条应当按照操作规程，每年对所有生产的药品按品种进行产品质量回顾分析，以确认工艺稳定可靠，以及原辅料、成品现行质量标准的适用性，及时发现不良趋势，确定产品及工艺改进的方向。应当考虑以往回顾分析的历史数据，还应当对产品质量回顾分析的有效性进行自检。.企业至少应当对下列情形进行回顾分析：（十一）相关设备和设施，如空调净化系统、水系统、压缩空气等的确认状态；52质量回顾示例PW 系统电导率、不挥发物、微生物限度WFI 系统 pH值、电导率、总有机碳、不挥发物、微生物限度53注射用水-微生物 注射用水微生物限度的质量标准为10CFU/100ml，日常监控结果均小于5CFU/100ml，低于

21、警戒限，平均值为0.1 CFU/100ml，远低于标准限度，并且趋势较平稳。检测数标准限度平均值纠偏限警戒限质量回顾示例54注射用水-总有机碳 ， WFI系统年度质量回顾报告 WFI总有机碳的质量标准为0.50mg/l，日常监控结果均小于0.20mg/l，在通常值管理范围内，平均值为0.04 mg/l，远低于标准限度，并且趋势平稳。结论：通过对WFI系统的多项质量指标回顾分析，系统运行稳定，设定的管理标准合理。标准限度平均值质量回顾示例通常值55三、针对口服制剂的环境监测法规要求：第四十八条口服液体和固体制剂、腔道用药（含直肠用药）、表皮外用药品等非无菌制剂生产的暴露工序区域及其直接接触药品的

22、包装材料最终处理的暴露工序区域，应当参照“无菌药品”附录中D级洁净区的要求设置，企业可根据产品的标准和特性对该区域采取适当的微生物监控措施。56因此，口服制剂的环境监测项目和标准可以参考无菌药品的D级区针对口服制剂的环境监测生产口服制剂，生产车间洁净度为D级，微生物检验室为万级，局部百级。 1、2010版GMP要求口服固体制剂洁净级别参照无菌制剂D级，那么沉降菌按照动态检测的沉降时间就得是4个小时；但是在GB/T16294-2010中也明确了静态测试可以30分钟，到底D级区依照哪个为准，因为沉降时间的不同，合格标准也不一样。 2、2010版GMP要求洁净度为A级的浮游菌、尘埃粒子采样量必须1立

23、方米，但是在GB/T16293-2010中明确规定了最小采样量。那么我们公司为D级，采样量是否也是1立方米？ 3、D级洁净区浮游菌和沉降菌是否也必须是动态测试？ 如果做了浮游菌，沉降菌是否可以不做？4、如果动态测试，在口服固体制剂总混车间，也就是产尘量大的房间，尘埃粒子测试肯定超标，又如何解释GMP条款？ 5、D级洁净区有很多房间，比如总混、干压、制粒、配料、中间品、中间站、洁具清洗间、更衣室、缓冲室、走廊、物料暂存间一二十个房间，是否每次必须都得做沉降菌和浮游菌、尘埃粒子检查，有没有国家硬性的标准？因为如果一个月检查一次，势必会造成很大的工作量，对于医药企业增加了很大成本啊。有的人说检测频率需要验证保证公司环境符合要求可以适当降低频率，在验证之前有没有最低检测频率？主要操作间和走廊、缓冲间等检测频率可以不一样吗？以上检测项目的检测频率在新版GMP是否有一个明确的最低检测频率可供参考？