急性毒性毒理

1、8/8考察一个药物的急性毒性应该是全面的，它的 YPLINK 实验方法有半数致死量、最大耐受量、固定剂量法、近似致死量法、近似半数致死量法 ;动物选择也可用不同的动物，通常选用2种以上动物；动物数量也可根据试验 YPERLN ” t ” 设计不同而异。实验一、 L50的测定目的 通过实验学习测定药物50的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性 试验的常规。 材料 小鼠5只(体重25g，雌雄各半) 注射器及针头 鼠笼 普鲁卡因 溶液（本实验以普鲁卡因为试验药物)苦味酸溶液方法 根据试验设计要求不同，下列步骤要求略有不同。探索剂量范围 取小鼠8-10只,以2只为一组分成45组,选择组距较大的一系列剂量

2、,分别按组腹腔注射和灌胃普鲁卡因溶液,观察出现的症状并记录死亡数，找出引起及10%死亡率（至少应找出引起2%8死亡率）剂量的所在范围. 2. 进行正式试验在预初试验所获得的0%和1致死量范围内，选用几个剂量(一般用5个剂量按等比级数增减)；尽可能使半数组的死亡率都在50以上，另半数组的死亡率都在50以下。各组动物的只数应相等或相差无几，每组10只左右,动物的体重和性别要均匀分配。完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以使能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。L50测定中应观察记录的项目：实验各要素:实验题目，实验日期，室温，检品

3、的批号、规格、来源、理化性状、配制方法及所用浓度等；动物品系、来源、性别、体重、给药方式及剂量（药物的绝对量与溶液的容量）和给药时间等。给药后各种反应；潜伏期(从给药到开始出现毒性反应的时间）；中毒现象及出现的先后顺序，开始出现死亡的时间;死亡集中时间；末只死亡时间；死前现象。逐日记录各组死亡只数。尸解及病理切片:从给药时开始记时，凡两小时以后死亡的动物,均及时尸解以观察内脏的病变，记录病交情况。若有肉限可见变化的则需进行病理检查.整个实验一般要观察1天,观察结束时，对全部存活动物称重，尸解,同样观察内脏病变并与中毒死亡鼠尸解情况相比较。当发现有病变时,也同样作病理检查，以比较中毒后病理改变及

4、恢复情况。【报告要点】结果处理受试剂量 （mgkg）对数剂量（X)动物数(只）死亡动物数(只）死亡率（%)概率单位 (Y）LD50及置信限(95）2、 结果计算（1) 根据试验设计,采用相应的方法计算D50,一般采用简化概率法或寇氏改进法,如有计算器程序或计算机软件可使用lisss计算法。(2) 计算lg D50的标准误。（3）计算95%可信限（必要时另计算99可信限）.(4） 两个L50值的比较 当欲比较同一药物前后两次LD0测定值或两个不同药物的LD50值时,可用两组t检验法进行比较，但计算中不能直接计算5的差值,而应用lgLD50的差值,因在LD0计算中是采用对数剂量进行的。注：从不同性

5、别动物或以不同途径给药获得的结果应分别列表.若发现中毒反应和死亡率对不同动物性别有明显差别，则应选用比较敏感的性别进行复试。急性毒性试验是指一次或4小时内多次染毒的试验,是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物.通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等,以提供受试物质的急性毒性资料,确定毒作用方式、中毒反应,并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考.概述及染毒方法YPELINK o 编辑本段 编辑一、概念和试验目的(一)急性毒性概念急性毒性是指机体(人或实

6、验动物）一次（或24小时内多次)接触 HYPRLINK ” t ”外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至引起死亡。但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的程度，可因所接触的化合物的质与量不同而异。有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内，就可发生中毒症状,甚至死亡。而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡，即迟发死亡。此外，实验动物接触化合物的方式或途径不同,“一次”的含义也有所不同.凡经口接触和各种方式的注射接触,“一次是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触,“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程，所以“一次”含有时间因素

7、。（二) 实验目的1.求出受试化合物对一种或几种实验动物的致死剂量(通常以LD50为主要参数）,以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。2。阐明受试化合物急性毒性的剂量反应关系与中毒特征。3利用急性毒性试验方法研究化合物在机体内的 HYERLIK ” ”生物转运和 HYPELIN t ”生物转化过程及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施。二、实验动物和染毒方法(一) 实验动物选择在卫生毒理学领域中，体内试验以实验动物为研究对象,最终是为了阐明受试 HYPRINK t 外来化合物对人的急性危害性质和危害强度.所以选择实验动物时,要求在其接触化合物之后的 YERLIK t ”毒性反应，应当与人接触

8、该化合物的毒性反应基本一致，虽然利用任何一种或几种实验动物的急性毒性结果向人外推都必须十分慎重,但这一选择实验动物的原则仍非常重要。1。 HYERLIN ” t 物种选择以选择哺乳动物为主.目前实际应用中以大鼠和小鼠为主，尤以大鼠使用很多.需指出大鼠并非对外来化合物都最敏丅感.家兔常用于研究化合物的皮肤毒性，包括对粘膜的刺激.猫、狗也用于急性毒性试验,但因价贵不易于大量使用。猪为杂食动物，对一些化合物的生物效应表现与人有相似之处,尤其是皮肤结构与人较近似。但因体大、价贵,不便大量使用。归纳起来，在进行化合物急性毒性研究中,选择实验动物的原则是：尽量选择对化合物 YPERINK t ” 毒性反应

9、与人近似的动物；易于饲养管理,试验操作方便;易于获得、品系纯化，且价格较低的动物。为了有利于预测化合物对人的危害，要求选择两种以上的实验动物，最好一种为啮齿类，一种为非啮齿类，分别求出其急性毒性参数。一般研究 HYPELINK” ” 外来化合物急性毒性，需雌雄两性动物同时分别进行,每个剂量组两性动物数相等。急性毒性使用小鼠体重以1825、大鼠1040g、豚鼠2020g、家兔22。kg、猫52.kg左右为宜。(二) 实验动物喂养环境实验动物喂养室室温应控制在22，家兔可控制在203，相对湿度303，无对流风。每笼动物数以不干扰动物个体活动及不影响试验观察为度，必要时需单笼饲养.饲养室采用人工昼夜

10、为好，早6点至晚6点进行12小时光照，其余2小时黑暗，一般食用常规试验室饲料，自由饮水.(三) 实验动物染毒方法1。经口(胃肠道）接触目的是研究外来化合物能否经胃肠道吸收及求出经口接触的HYPRLINK ” 致死剂量(D50）等。由于外来化合物可以污染饮水及食物，因此，此种染毒方式在卫生毒理学中占有重要地位。（） 灌胃是将 HYPERINK ” t ” 液态受试化合物或固态、气态化合物溶于某种 ERLINK ” 溶剂中，配制成一定浓度，装入注射器等定量容器，经过导管注入胃内。在每一试验系列中，同物种实验动物灌胃体积最好一致，即以单位体重计算所给予的毫升数应一致，即ml/kg或l/g计。这是因为

11、成年实验动物的胃容量与体重之间有一定的比例。按单位体重计算灌胃液的体积，受试化合物的吸收速度相对较为稳定。小鼠一次灌胃体积在。21.0m/只或010。5l/10g体重较合适，大鼠一次灌胃体积不超过5m/只(通常用51.0ml100体重），家兔不超过1l2g体重，狗不超过50ml/10kg体重试验目的： HYPELNK ” ” 急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应,为多次反复给药的毒性 HPEIK t” 试验设计剂量、分析毒性作用的主要HYEI t靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参

12、考信息等.一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1动物品系:常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-周龄。同批试验中,小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的0%。实验前至少驯养观察1周，记录 HYERLINK t ” 动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。2.饲养管理: HPERLNKt 动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料,应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。3受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法.（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、

13、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异,毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点,由下列几种 HYPRINK ” t ”实验方法中选择一种进行YERLINK t 急性毒性试验。伴随测定 HYRLINK ” ” 半数致死量(YPERLIK ” ” LD50）的急性毒性试验方法.2. HRLINK” t ” 最大耐受剂量（HYPRINK ”t MT)试验方法:最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量.最大受试药物量试验方法:在合理的浓度及合理的容量条件下,用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。单次口服固定剂量方法（Fixed-dsprocedur)。选择

14、5、50、500和200g/kg四个固定剂量.实验动物首选大鼠，给药前禁食61小时,给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考,可用500gg作初始剂量进行预试，如无毒性反应,则用000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试.如初始剂量出现严重的毒性反应,那就用HPERLIN ” t ” 下一个挡次的剂量进行预试,如该动物存活,就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验.每个剂量给一只动物,预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试

15、药物后的观察期至少天,如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续再观察7天。在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物,雌雄各半。根据预试的结果，由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量；如预试结果表明，50mg/引起死亡，则降低一个剂量档次试验。试验观察:给受试药物后至少应观察2周，根据毒性反应的具体特点可适当延长。对每只动物均应仔细观察和详细记录各种毒性反应出现和消失的时间。给受试药物当天至少应观察记录两次,以后可每天一次.观察记录的内容包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主及 HPELK ” 中枢神经系统行为表现等.动物死亡时间的记录要准确.给

16、受试药物前、给受试药物后1周、动物死亡及试验结束时应称取动物的体重。所有动物包括死亡或处死的动物均应进行 YPERLI t 尸检,尸检异常的器官应作病理组织学检查.固定剂量试验法所获得的结果,参考下表标准进行评价。单次口服固定剂量试验法结果的评价剂量(mg/kg）试验结果存活数10%10%存活毒性表现明显00%存活无明显中毒表现50高毒(Very xc)(D502mgg）有毒（ HYERINK t ” oxic）（LD525200mg/kg）用mgk试验50。有毒或高毒用5mg/g进行试验有害（Harmful）(LD50200-2000mg/k)用500mg/g试验500.0有毒或有害用mg/

17、kg试验LD2000g/kg用200mg/kg试验2000用500mg/kg试验该化合物无严重急性中毒的危险性反复给药的毒性试验（长期毒性试验)一、目的观察动物反复给予受试药物后，对机体产生的毒性反应及其严重程度,主要的毒性靶器官及其损害的 HYPERLIN ” t 可逆性，提供无毒性反应剂量及临床上主要的监测指标，为制定人用剂量提供参考。二、试验条件（一)动物1。动物品系：一般用两种动物,一种啮齿类动物，另一种为非啮齿类动物.常用S或ister大鼠和Begl狗或者猴。选用其他动物,应说明原因。2.年龄:根据试验期限的长短而定。大鼠一般69周龄。Beleg狗一般2月龄.试验开始时体重差异不应超

18、过或者低于该次试验动物平均体重的20。3。实验前至少驯养观察2周。观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图、有关血液学及血液生化学等功能指标。选择正常、健康、雌性无孕动物作为受试动物。（二)饲养管理1饲料:所用饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应提供生产单位.实验的环境条件:应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。（三)受试药物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。三、试验方法 （一）试验分组：一般设三个剂量组和一个对照组。必要时尚需设溶媒对照组。低剂量组原则上应高于同种动物药效 HYPLINK ”

19、 t” 有效剂量,在此剂量下,动物不出现毒性反应;高剂量组原则上应使动物产生明显的或严重的毒性反应，甚至引起少数动物死亡；为观察毒性反应的剂量关系,在高、低剂量组之间应再设1个中剂量组. （二）动物数：每组动物的数量应根据给药周期的长短决定.大鼠一般为雌、雄各1030只;ele狗或者猴,一般雌、雄各34只。 （三）给药途径：原则上应与临床用药途径相同.若用其他途径应说明原因。口服给药一般采用灌胃给予受试药物。如采用将受试药物混入饲料中服用，应提供受试药物与饲料混合的均匀性、受试物的稳定性、有关受试物质量检查及说明动物食入规定受试药物的量等方面的资料,以确保获得准确可靠的试验结果。临床用药途径为

20、静脉注射时，由于给药周期长,大鼠静注有困难时,可用其它适宜的途径代替。原则上应每天给药。试验周期长的试验，也可采取每周给药6天。每天给药时间应相同.应根据体重增长情况适时调整给药量.(四）观测项目：原则上应根据受试物的特点选择其相应的观测指标。一般共性的观测指标最少应包括以下内容： 1.一般观察：外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便性状、食量、体重、给药局部反应、狗的心电图变化等。大鼠群养时,应将出现中毒反应的动物取出单笼饲养.发现死亡或濒死动物,应及时尸检.试验期间如动物发生非药物性的疾病反应时,应及时进行隔离处理。血液学指标：红细胞、网织红细胞计数、血红蛋白、白细胞总数及其分类、血小板。 3血液生化指标：天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶（LT）、碱性磷酸酶(ALP）、尿素氮（BUN)、总蛋白(TP）、白蛋白(l）、血糖(GLU)、总胆红素（TBIL）、肌酐（Crea