医疗器械产品无菌检验操作规程

1、优选文档医疗器械产品无菌检验操作规程目的经过无菌检验,保证灭菌后产品能够达到无菌的要求。适用范围适用于灭菌后医疗器械产品(列举的无菌检验。检验依照本厂产品注册标准(编号EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估中国药典(2005年版GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准仪器、设备百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。无菌检验室的环境要求5.

2、1无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气地域内进行。.优选文档5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性比较室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持1826,相对湿度:4565%。5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应如期按医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年最少检测一次。5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板,裸露30min,于3035

3、培养48小时,菌落数平均应不高出1CFU/平板。无菌检验前的准备6.1器具灭菌、消毒灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必定采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160以上干烤2小时,或置压力蒸汽灭菌器内121蒸汽灭菌30分钟后使用(依照灭菌收效考据决定灭菌参数。所有的灭菌物品不应高出2周即用毕,否则应重新灭菌。消毒:凡检验中使用的器械无法灭菌办理的,使用前必定经消毒办理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸优等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每个月更换,以防范产生耐药菌株。表记:器具的灭菌、消毒后必定做好表记,注明灭菌、消毒时间和使用有效期。6.2人员、物料进入无菌检

4、验室开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌办理,消毒时间不得少于30min。.优选文档物料进入无菌检验室流程脱包:进入无菌检验室的物品若有双重包装的,需将外包装在传达窗/缓冲间拆掉后,传入试验室。消毒:进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的表面都应采用适用的方法进行消毒办理,以防范将外包装污染的微生物带入无菌检验室。传达:查察所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒表记,可否在有效期内。吻合要求的经传达窗传入无菌检验室。人员进入无菌检验室流程更鞋脱衣:在一更区脱去一般区工作鞋,穿上无菌检验室工作鞋;脱去一般区工作服。洗手:第一用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫,再用流水连续冲洗20秒,洗净泡沫。换衣:

5、在二更区依照从上到下的序次衣着无菌工作服(包括衣、帽、口罩等,要求裤子掖在上衣里,口罩掩住口鼻,帽子包裹所有头发。手消毒:用消毒液浸泡双手5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。人员进入:经缓冲间进入无菌检验室。人员进入无菌检验室后,进一步用消毒液擦拭工作台面,戴无菌手套。无菌检验操作要求7.1全过程必定严格执行无菌操作,防范微生物污染。.优选文档7.2使用玻璃器皿应轻取轻放,防范破坏,以防培养物扩散。7.3所有操作均应在近火焰区进行,且不得有大幅度或迅速动作,省得搅动空气中的尘埃微粒。7.4使用金属接种器具时,用前、用后均需灼烧灭菌。7.5在接种

6、培养物时,动作应轻、准,防范培养物溅出,产生汽溶胶,造成污染。7.6操作过程中所有的带菌物品,用后均应作消毒、灭菌办理。可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内,或在检验完成后经传达窗传至一般区,马上用压力蒸汽灭菌锅121灭菌30分钟。培养基制备8.1需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐流体培养基的制备所用试剂酪胨(胰酶水解15.0g葡萄糖5.0gL-胱氨酸0.5g硫乙醇酸钠0.5g(或硫乙醇酸(0.3ml酵母浸出粉5.0g氯化钠2.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml琼脂0.75g水制备.优选文档除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混杂,微温溶解,调治pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡

7、萄糖和刃天青溶液,摇匀,调治pH为7.10.2。硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得高出培养基深度的1/5,否刚需经100水浴加热到粉红色消失(不高出20分钟迅速冷却,只限加热一次,并应防范被污染。8.2霉菌培养基(改良马丁培养基的制备所用试剂胨5.0g酵母浸出粉2.0g葡萄糖20.0g磷酸二氢钾1.0g硫酸镁0.5g水制备除葡萄糖外,取上述成分混和,微温溶解,调治pH值约为6.8,煮沸,加葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调治pH为6.40.2。8.3还可使用按处方生产的吻合规定的脱水培养基,依照使用说明书配制。8.4培养基配制后应赶忙灭菌,防范微生物生殖。一般

8、采用高压蒸汽121灭菌分钟。8.5制备好的培养基应在225保存,在3周内使用。8.6培养基的无菌性检查每批配制的培养基均应进行无菌性检查(可与产品无菌检验同步进行。检查时,每批培养基随机取很多于5支(瓶培养14天,应无菌生长。.优选文档稀释液、冲洗液的制备9.10.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g,加水1000ml,微温溶解,滤清,分装后置入压力蒸汽灭菌器内,121灭菌30分钟后,于4保存备用。,分装后置入压力蒸汽灭菌器内,121灭菌30分钟后,于4保存备用氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钾7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g,加水1000ml。微温溶解,滤清,分装

9、后置入压力蒸汽灭菌器内,121灭菌30分钟后,于4保存备用。9.3浸提介质:9g/L无菌氯化钠溶液,可直接从有证单位采买大输液。比较菌液制备10.1无菌检验所用的菌株传代次数不得高出5代。10.2取金黄色葡萄球的一般琼脂斜面培养物,接种一白金耳至营养琼脂培养基内,在3035培养1824h后备用,同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试管内,每支试管内加9.0ml的0.9%氯化钠溶液,在压力锅内经121灭菌30min备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内,稀释成浓度1:10的菌液;取第一支试管内1.0ml菌液加入第二支小试管内,稀释成浓度1:100的菌液,同法稀释成

10、浓度1:106(每ml含菌量100CFU即可。10.3采用平皿计数法测定活菌数。无菌检验培养温度硫乙醇酸盐流体培养基,置3035培养。改良马丁培养基,置2328培养。.优选文档无菌检验12.1如产品注册标准中明确“产品应经过一个确认过的灭菌过程”,则执行12.1项下各项。放样每个灭菌批次按已考据的灭菌工艺,在灭菌柜内相应的地址放置合适菌片,灭菌后对菌片进行无菌检验。菌片储藏灭菌前、后菌片应按菌片说明书规定条件保存。(REVEN公司菌储藏温度为1527接种开启超净工作台单向层流,在此环境下,分别将灭菌后的菌片成对放入已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基中。同时以金黄色葡萄球菌作阳性比较,以未接种的硫乙醇

11、酸盐流体培养基和未接种的改良马丁培养基作为阴性比较。培养阳性比较管于3035细菌培养箱培养4872小时。其余硫乙醇酸盐流体培养基于3035培养7天。改良马丁培养基于2328培养7天。结果判断培养后,阳性比较应有菌生长,阴性比较和被检样品未见需气菌、厌气菌和霉菌生长的为合格。12.2如产品注册标准中明确产品应进行无菌检验,则执行。抽样.优选文档依照各自的产品注册标准和相应产品出厂检验规程的规定,对成品库内的产品进行抽样。一般同一个灭菌批产品检验311个单位供试品。供试液准备优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养的方法,如供试品不合适直接投放,可按以下方法制备供试液,应使浸提介

12、质充分洗供应试品的浸提表面,供试液制备应按无菌操作法进行,在制备后2小时内使用。依照供试品详尽特点选择以下方法:a管类器具:按管内表面积每10cm2流过管内腔1ml浸提介质,流量约为10ml/min,收集到无菌的容器内。b容器类器具:按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比率,振摇数次。c实体类器具:实体类器具按表面及每10cm2加入浸提介质1ml,振摇数次。收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。接种薄膜过滤法:优先采用封闭式薄膜过滤器(集菌器,也可使用开放式薄膜过滤器。滤膜孔经不大于0.45m。滤器和滤膜使用前应采用合适的方法灭菌,或直接采用无菌集菌器。a、如采用封闭式薄膜过滤器,取

13、一副三联式集菌器,将供试液经过集菌仪过滤,使经过每只培养管的量基本平均。尔后经过集菌仪一只加120ml改良马丁培养基,另两只分别加入120ml硫乙醇酸盐培养基(其中一只做阳性比较,内加金黄色葡萄球菌液1ml。另取一副二联集菌器,用同批的冲洗液或浸提介质120ml经过集菌仪过滤(每只约50ml,同法一只加硫乙醇酸盐培养基120ml,另一只加改良马丁培养基120ml分别作阴性比较。.优选文档b、如用一般薄膜过滤器,将供试液过滤后取出滤膜,将其剪成3等份,分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中,其中两份作检验,一份作阳性比较。直接接种法:适用于一次性使用注射针、一次性使用静脉

14、输液针(包括输液器、输血器、注射器配套使用注射针。a、敷料供试品:取规定数量,每个包装以无菌操作翻开,于不同样部位剪取约120mg或1cm3cm的供试品,接种于各管足以吞没供试品的合适培养基中。b、无菌针头:直接投入含15ml以上硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中。c、一次性使用的资料:翻开或切成小碎断,接种于各管足以吞没供试品的合适培养基中。供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中,其中一份作阳性比较。每个容器中培养基的用量应吻合:接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%,或培养基的装量足以吞没供试品。每管培养基的最低用量硫乙醇酸盐流体培养基每管装

15、量很多于15ml,改良马丁培养基每管装量很多于10ml.培养、观察上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中,除阳性比较管培养4872小时外,其余管培养14天。培养时期应每天观察并记录可否有菌生长。.优选文档如在加入供试品后、或在培养过程中,培养基出现浑浊,培养14天后,不能够从外观上判断有无微生物生产,可取该培养液合适转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上,细菌培养2天,真菌培养3天,观察可否再出现浑浊或斜面有无菌生长;或取培养液涂片,染色,镜检,判断可否有菌。结果判断培养结束后,阳性比较管应有菌生长,阴性对管应澄清。否则,就判结果无效。所有供试品管均澄清,或虽显浑浊但经确证无菌生长,判供试品吻合规定。若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长判供试品不吻合规定。以一