实验三培养基的制备与灭菌

1、关于实验三培养基的制备与灭菌第1页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三一、实验目的 明确培养基的配制原理 通过对基础培养基的配制，掌握配 制培养基的一般方法和步骤第2页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三 培养基是人工按一定比例配制的供微生物 生长繁殖和合成代谢产物所需要的 营养物质的混合物 培养基的原材料：碳源、氮源、无机盐、 生长因素、水二、基本原理第3页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三根据微生物的种类和实验目的不同，培养基有不同的种类按成分：天然培养基，合成培养基，半合成培养基按物理状态分：固体培养基，半固体培养基， 液体培养基牛

2、肉膏蛋白胨培养基第4页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三三、实验器材与试剂溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 1mol/L NaOH、1mol/L HCl仪器或其它用具：三脚架、培养基分装器、 天平、牛角匙、 高压蒸汽灭菌锅等第5页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三 称量溶化调pH 过滤分装加塞 包扎灭菌搁置斜面四、操作步骤第6页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三 1）称量：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热 水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随 后放人热水中，牛

3、肉膏便会与称量纸分离，立即取 出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2）加热溶化：在烧杯中加入少于所需要的水量，并用玻棒 搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需 量。若配制固体培养基，则加入琼脂再加热 融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底 或溢出，最后补足所失的水分。 第7页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三3）调pH：检测培养基的pH，若偏酸，可逐滴滴加1molL-1NaOH 边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用1molL-1HCl进行调节。 pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过 头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度

4、。4）过滤 趁热过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结 果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。第8页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三固体分装5）分装：披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶 口上面造成污染 分装量：固体培养基约为试管高度的15，灭菌后制成斜 面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。 半固体培养基以试管高度的1/3为宜。灭菌后垂直 待凝 半固体 液体分装试管 三角烧瓶试管 三角烧瓶 1/31/4 1/21/51/2第9页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三6）加塞：试管口

5、和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制 作的棉塞。以阻止外界微生物进入培养，并保 持良好通气性7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防 灭菌时冷凝水沾湿棉塞8）灭菌：将上述培养基以0.103MPa，121， 20min高压蒸气灭菌9）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50左右（以防 斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻 棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面 长度以不超过试管总长的一半为宜。第10页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三 培养基分装斜面制作包扎成捆挂标签第11页，共13页，2022年，5月20日，22点8分，星期三附：高压蒸汽灭菌法1加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。2装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧 贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。3加盖 将盖上的排气软管插人内层的排气槽内，再以两 两对称的方式同时旋转相对的两个螺栓，使螺栓 松紧一致，勿使漏气。4排气 加热，待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约5min，表明锅内空 气已排净。5升压 当锅内