老年缺血性脑卒中患者eNOS基因VNTR多态性研究

1、老年缺血性脑卒中患者eNOS基因VNTR多态性研究【摘要】目的讨论老年缺血性脑卒中与内皮细胞型一氧化氮合酶eNS基因变数串联重复序列VNTR多态性的关系。方法选择老年缺血性脑卒中患者112例作为病例组，同期选择年龄与性别相匹配的安康志愿者或其他住院患者105例作为对照，通过PR技术和聚丙烯酰胺电泳来确定其基因型。结果病例组eNS基因ab基因型的频率明显高于对照组(22.3%vs12.4%，P0.05)，a等位基因的频率也高于对照组12.9%vs7.0%，P0.05。结论ab基因型与老年缺血性脑卒中有相关性，a等位基因可能是中国老年缺血性脑卒中的独立危险因素。【关键词】一氧化氮合酶；基因多态性；

2、VNTR；老年；缺血性脑卒中血管内皮细胞一氧化氮合酶NS编码基因存在多种基因多态性。其中，第4号内含子27个碱基的变数串联重复序列VNTR多态性与血浆一氧化氮N程度亲密相关，该多态性与心脑血管病的相关性研究较多，但结论并不一致。atyar等1研究发现内皮细胞型NS(eNS)4a/b基因多态性是南部土耳其人冠心病的独立危险因素，而Vasilaku等2发如今希腊人中该基因多态性与早发的冠心病没有相关性。本研究的目的是讨论eNS基因VNTR多态性与中国老年缺血性脑卒中的关系。1对象与方法1.1研究对象1.1.1入选标准选择2002年712月在青岛大学医学院附属医院住院的112例老年缺血性脑卒中患者作

3、为病例组,其中36例短暂性脑缺血发作(TIA)，76例脑梗死，均行头颅RI和/或T扫描明确诊断，符合1996年第四届全国脑血管病会议修订的诊断标准，并排除脑出血和占位性病变。选取同期住院的其他疾病患者和安康志愿者105例作为对照。对照组均无脑卒中或冠心病病史。病例组平均年龄(64.911.2)岁，男62例；对照组平均年龄(63.911.9)岁，男53例，两组的年龄与性别相匹配,入选对象均行血糖、血脂等检查。1.1.2诊断标准高血压的诊断标准为血压140/90Hg或正服用降压药物；糖尿病的标准为空腹血糖7.0l/L或服用降血糖药物；吸烟的标准为正在吸烟5支/d或有吸烟史，血脂异常的标准为总胆固醇

4、(T)5.62l/L和/(或)甘油三酯(TG)1.92l/L或服用降血脂药物。1.2方法1.2.1提取基因组DNA入选者均于清晨空腹抽取静脉血1l,加20lEDTA浓度150ng/l抗凝，4冰箱短期存放。采用UltraPureT基因组DNA提纯试剂盒北京赛百盛公司消费，提取的基因组DNA置于-20保存。1.2.2目的基因片段PR扩增方法1.3统计学分析采用SPSS统计软件，计量资料组间比拟用非配对的t检验，计数资料组间比拟用2检验，应用Lgisti回归分析计算比数比并进展危险因素独立性分析。2结果2.1病例组与对照组各种危险因素比拟吸烟、高血压、糖尿病等在病例组的比例均较对照组高P0.05。血

5、脂异常发生率在病例组也较高，但无显著性差异P0.05，见表1。表1两组各危险因素的比拟n(略)2.2eNS基因VNTR多态性电泳结果eNS基因VNTR多态性主要有2种等位基因，27bp的序列重复4次为a，重复5次为b，在电泳图中分别为417bp和444bp的片段，从而构成3种基因型(aa，ab，bb)，见图1。2.3两组eNS基因型和等位基因频率的比拟病例组与对照组的ab基因型频率分别为22.3%和12.4%，两者比拟有显著差异(P0.05)。a等位基因频率在病例组为12.9%，较对照组(7.0%)明显偏高P0.05)，见表2。表2卒中组与对照组的基因型及等位基因频率比拟n(略)2.4病例组各

6、种危险因素的独立性分析病例组各危险因素及eNSVNTR多态性的比数比R分析及95可信区间95%I，见表3。通过对各种危险因素的多元Lgisti回归分析发现，高血压、糖尿并吸烟及ab基因型与老年缺血性脑卒中均明显相关，是老年缺血性脑卒中的独立危险因素。表3病例组各危险因素以及ab基因型的R值及95I略转贴于论文联盟.ll.3讨论NS是N合成的关键酶，可催化精氨酸代谢为N和瓜氨酸。根据细胞和组织来源分为3种：神经元型(nNS)、内皮细胞型(eNS)和免疫型NS(iNS)。eNS主要存在于血管内皮细胞中，可以被多种介质激活，包括乙酰胆碱、P物质、组氨、精氨酸、血管加压素、缓激肽、前列腺素F和内皮素R

7、等。eNS的激活导致内皮细胞中N的产生增加，并引起一系列的生物学效应，如舒张平滑肌细胞，抑制血小板聚集和黏附于血管内皮，抑制血管平滑肌细胞的增生，阻碍低密度脂蛋白的过氧化而发挥抗动脉粥样硬化作用等。N还可通过抑制内皮素和血管紧张素的产生从而抑制血管平滑肌细胞的增生。人类eNS的编码基因位于第7号染色体长臂7q36，含有26个外显子和25个内含子，总长21kb，编码产物为含有1203个氨基酸的蛋白质。该基因存在多个多态性位点，其中研究最多的是4号内含子的VNTR多态性、7号外显子G849T多态性和启动子区T786多态性。VNTR多态性主要有2种等位基因，27bp的序列重复4次为a，重复5次为b，

8、从而构成3种基因型(aa，ab，bb)。eNS基因多态性可影响eNS的功能，导致血管系统中N浓度改变，并由此影响动脉粥样硬化的发生和开展，因此可能与冠心病和缺血性脑血管疾病有关。eNS基因不同位置的变异与心脑血管疾病的相关性不同。1996年ang等4发现，澳大利亚长期吸烟者的eNS第4号内含子基因多态性与冠心病关系亲密，吸烟和eNS4a/a分别在环境和遗传方面是导致冠心病的主要因素。Lee等5对韩国男性冠状动脉疾病病人暷研究也发现eNS基因a/b多态性与小于51岁的男性患者的冠状动脉疾病的开展有相关性。Sali等6发现冠心病患者的等位基因a的频率明显高于对照组。Hu等7对中国人的研究，证实了e

9、NS第4号内含子基因多态性可能是中国人缺血性脑血管疾病的独立危险因素，在无常见危险因素的缺血性脑血管病患者中尤为显著。eNS基因多态性与冠心并心肌梗死的关系得到了多国学者的肯定，但也存在分歧。德国学者Sigush等8栐1043例欧洲人的研究说明，冠心病及其严重程度与eNS4a/b多态性无相关性。Yahashi等9对日本人该基因多态性与缺血性卒中的关系进展了研究，127例患者其中18例为血栓栓塞，58例为腔隙性脑梗死，51例为无病症性腔隙性脑梗死与91例对照的b等位基因频率之比为0.862/0.868，缺血性卒中亚组中等位基因的频率之比为0.889/0.862/0.853，其差异均无统计学意义。aLed等10在361例缺血性卒中患者与236例对照中，对eNS基因7号外显子的G894T多态性进展了相关研究，发现NN基因型在两组中的分布无差异，提示该多态性与动脉粥样硬化性脑梗死和TIA无关。本研究发现老年缺血性脑卒中组ab基因型的频率较对照组明显增高22.3%vs12.4%，a等位基因的频率在病例组也明显偏高12.9%vs7.0%。用多元Lgis