龙血竭提取物对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的影响

1、龙血竭提取物对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的影响【关键词】龙血竭提取物；,四氧嘧啶；,血糖；,胰岛素；,血清摘要：目的研究了龙血竭提取物对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的影响。方法采用正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病模型小鼠，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，用放射免疫法测血清胰岛素，用高效液相色谱HPL分析小鼠的血清。结果龙血竭提取物对正常小鼠空腹血糖无明显降低作用，能降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的空腹血糖程度，能改善小鼠对蔗糖的耐受力，增加正常小鼠的胰岛素分泌，血清样本中有药物成分检出。结论龙血竭提取物对糖尿病小鼠有较好的治疗作用，可升高血清胰岛素程度，其局部组分可以被动物体内吸收并进入血液发挥作用。关键词：

2、龙血竭提取物；四氧嘧啶；血糖；胰岛素；血清GlusedereasingEffetfExtratfrResinaDranisnieAbstrat：bjetiveTstudytheeffetfextratfrnie.ethdsNralieandallxanindueddiabetiieereused.Bldgluseaseasuredithglusexidaseethd,andinsulinaseasuredithradiiunassay,andtheseruinieasanalyzedbyHPL.ResultsResinaDranishadnbviuseffetsfdereasingtheser

3、ugluselevelinnralie,butulddereasetheserugluselevelinallxanindueddiabetiie.Als,ResinaDranisiprvedthesurseresistaneinnralieanddiabetiieandinreasedinsulininnralie.SefpnentsfResinaDranishadbeeneasuredinserusaple.nlusinResinaDranisexertshaveagdtherapeutieffetnallxanindueddiabetiieanditsehanisayberelatedt

4、theinreasingftheseretinfinsulinandtheabsrbingfsefthepnentsfResinaDranisinviv.Keyrds：ResinaDranis;Allxan;Bldgluse;Insulin;Seru血竭ResinaDranis是中药的传统品种之一，被誉为“活血之圣药的珍贵中药，血竭其味甘、咸；性温、平；归心、肝经；兼有活血化淤，消肿止痛，止血补血之成效1，2。现代医学研究证明，血竭具有改善机体微循环，调整新陈代谢，改善免疫功能等作用。具有明显的抗细菌、抗真菌、抗氧化、抑制血小板凝集、抗血栓、增强纤溶等活性3。近年来有研究说明血竭全粉亦具有治疗

5、糖尿病的成效4，但其有效部位在治疗糖尿病方面的研究尚无报道，其降糖机制亦不明确。本实验室以龙血竭为原料经过超临界萃取以及丙酮抽提得到龙血竭的降糖有效部位，观察了龙血竭提取物对正常小鼠以及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的血糖、血清、血清胰岛素的影响，并对其作用机制进展初步讨论。1器材1.1龙血竭提取物ResinaDranis,ERD龙血竭广西中医学院先采用超临界2萃取萃取条件：萃取压力为15p，萃取温度为40，萃取时间为2h，2流量30kg/h，搜集萃取剩余物作为活性成分的粗提物，自制一个抽提循环回流装置，将活性成分的粗提物装入回流装置的浸出器中，参加数倍量的丙酮溶液，在一定的条件下，抽提数小时，回收抽

6、提液溶剂并浓缩至干。临用前用生理盐水配成所需浓度。1.2动物昆明种小鼠，体重2025g，雄性，购自上海复旦医学院动物实验中心，合格证号:SXK沪20020002。1.3试剂和仪器四氧嘧啶allxan，Flua产品；葡萄糖氧化酶，购自上海维思公司；过氧化物酶，购自中国医药集团上海化学试剂公司；叠氮钠，浙江城关化工厂产品；胰岛素放射免疫分析药盒，中国生物技术集团公司产品；拜糖苹Aarbse，拜耳公司产品；糖适平(格列喹酮,gliquidne),德国勃林格殷格翰国际公司产品；其余试剂均为市售分析纯。紫外分光光度计，日本岛津UV260；高速台式离心机TGL16G，上海安亭科学仪器厂；超临界流体萃取装置

7、HA2205006型，南通市华安超临界萃取；Aglient1100,安捷伦科技。2方法与结果2.1ERD对正常小鼠血糖程度的影响取50只昆明种小鼠，随机分成5组，每组10只，即ERD3个剂量组100，300，500g/kg，阳性对照组Aarbse，20g/kg及阴性对照组ntrl，生理盐水。均按0.10l/10g体积灌胃给药，1次/d，连续7d，末次给药前禁食8h，给药2h后眼眶静脉窦采血，别离血清按葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖5，所得数据进展组间t检验。由表1可见，ERD各剂量组动物空腹血糖程度稍有降低，但与对照组比拟无显著差异。这说明血竭提取物各剂量组对正常小鼠血糖无明显影响，有利于开发成为

8、降糖中药制。2.2ERD对正常小鼠糖耐量的影响60只小鼠随机分为5组，每组12只，即ERD3个剂量组100，300，500g/kg，阳性对照组Aarbse，20g/kg及阴性对照组ntrl,生理盐水。灌胃给药，1次/d，连续7d，末次给药前禁食8h，给药2h后眼眶静脉窦采血，然后灌胃给蔗糖2.5g/kg，测定给蔗糖后0.5，1，2h的血糖值。血糖测定方法同上，所得数据进展组间t检验。由表2可见，ERD高剂量组在1，2h时有显著的降血糖作用P0.01,ERD中剂量组在1，2h时有明显的降血糖作用P0.05。其效果均优于Aarbse。表1龙血竭提取物对正常小鼠空腹血糖的影响略2.3ERD对四氧嘧啶

9、糖尿病模型小鼠血糖的影响取100只正常昆明小鼠禁食14h后，腹腔注射2%四氧嘧啶生理盐水溶液，注射72h后眼眶静脉窦采血，测定空腹血糖取血前禁食10h方法同前。选取血糖高于11.1lL-1的为糖尿病模型小鼠，根据血糖程度将糖尿病模型鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组del，ERD3个剂量组500，300，100g/kg，模型对照组灌胃生理盐水，阳性对照组Arbse，20g/kg，给药方法均同前，连续给药10d。在末次给药前8h禁食，给药2h后眼眶静脉窦取血。血糖测定方法同前，所得数据进展组间t检验。由表3可见，与糖尿病模型组比拟，ERD低剂量可以明显降低血糖P0.05,ERD中、高剂

10、量组都能显著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖P0.01，与对照组Aarbse具相似降糖效果。2.4龙血竭提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠糖耐量实验取昆明种小鼠100只禁食14h，造模方法以及血糖测定方法同前。取模型小鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组del，ERD3个剂量组500，300，100g/kg，阳性对照组Arbse，20g/kg，模型对照组灌胃生理盐水，给药方法均同前，连续给药7d。在末次给药前8h禁食，给药2h后眼眶静脉窦采血，然后蔗糖2.5g/kg灌胃，测定给蔗糖后0.5，1，2h的血糖值。血糖测定方法同上，所得数据进展组间t检验。结果见表4。由表4可知，四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的葡

11、萄糖耐量在1h达顶峰，2h后下降；3组给药组小鼠血糖在2h时均比模型组血糖有了明显降低P0.01。其中ERD高、中剂量组在1h时有明显的降血糖作用P0.01，效果优于Aarbse。转贴于论文联盟.ll.表2龙血竭提取物对正常小鼠糖耐量的影响略与阴性对照组比拟，*P0.05，*P0.01；n=12表3龙血竭提取物对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖值的影响略与模型组比拟，*P0.05，*P0.012.5ERD对正常小鼠血清胰岛素的影响取75只正常昆明小鼠随机分为5组，每组15只，即血竭提取物3个剂量组100，300，500g/kg，阳性对照组糖适平，12g/kg及阴性对照组ntrl，生理盐水。灌胃给药

12、，2次/d，连续14d，末次给药前禁食8h，给药1h后眼眶静脉窦取血，别离血清得供试样品，用放射免疫分析法测定胰岛素INS6，所得数据进展组间t检验。结果见表5，ERD中剂量和高剂量能显著增加小鼠血清胰岛素的含量，与对照组有显著性比拟差异P0.01,促胰岛素分泌效果与糖适平相近。ERD低剂量也能明显增加小鼠血清胰岛素的含量P0.05。表4龙血竭提取物对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的糖耐量实验略与模型对照组比拟，*P0.05,*P0.01表5龙血竭提取物EDB对正常小鼠血清胰岛素的影响略与阴性对照组比拟，*P0.05，*P0.012.6ERD对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血清的影响取上述正常及四氧嘧

13、啶糖尿病模型小鼠假设干，随机分组，即正常小鼠空白血清组、正常小鼠给药血清组、四氧嘧啶糖尿病模型空白血清组和给药血清组，200g/lERD悬浊液，灌胃给药，给药1h后取血，别离血清，甲醇沉淀蛋白，离心取上清液，Aglient1100进展分析，分析条件：ZrbaxXDB18，9.4250，进样量10l，流动相：甲醇：乙腈：0.05l/LKH2P4缓冲液53065，流速：1l/in。结果见图14。通过比拟，由下列图可知无论是正常小鼠还是四氧嘧啶糖尿病模型小鼠，空白血清和给药以后别离的血清，它们的HPL图谱均有所不同，给药组出峰比空白组出峰多，其中最为明显的是，给药组均在约17in的位置上有出峰位置，

14、而在空白血清组的图谱中却没有，此外给药组还有其他出峰位置，这些亦是空白组血清中所没有的，这说明ERD可以被动物体内吸收，进入血液发挥作用。图1正常小鼠空白血清略图2正常小鼠给药组血清略图3四氧嘧啶糖尿病模型小鼠空白血清略图4四氧嘧啶糖尿病模型小鼠给药组血清略3讨论实验结果说明ERD可以降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖程度，增加正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠对蔗糖的耐受才能，实验过程中还观察到ERD可以改善糖尿病小鼠多饮、多尿等状况，对糖尿病小鼠有较好的治疗作用，降血糖作用和剂量相关。另外，ERD对正常动物血糖影响较小，有利于今后开发成为低毒的降糖中药制剂。在利用高效液相色谱分析正常和糖尿病模型小鼠的血清的过程中，发现给药后，在小鼠血清中检出假设干组分，这些组分是空白小鼠血清中所没有的，这说明ERD可以被动物体内吸收并发挥其降糖作用，这些组分到底是什么物质还有待于进一步的深化研究，此外，ERD还可以促进正常小鼠胰岛素的分泌，这些都可能和ERD降血糖作用的机理有关，为ERD降糖机理的进一步研究奠定了一定的实验基矗参考文献：1蔡希陶，许再富.国产血竭植物资源的研究.云南植物研究J.1999，12：1.3王锦亮，李兴从，江东福，等.云南血竭的化学成分及抗真菌活性J.云南植物研究，1995，173：33