药物分析之维生素类药物的分析

1、维生素类药物的分析本章要求掌握不同维生素的结构特点和主要性质掌握维生素A、B、C、E的主要分析方法了解维生素类药物分析方法的操作要点 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸) VitC、烟酸、烟酰胺维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质 人体不能合成维生素-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R : 维生素A（维生素A1、视黄醇）环己烯共轭多烯侧链UV多异构体易被氧化结构分析维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac

2、 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维生素Ab 324 24% 相对生物效价环氧化物VitA醛VitA酸三氯化锑反应UVTLC 鉴别试验1. 三氯化锑反应条件 无水（使得三氯化锑水解） 无醇（使得碳正离子电荷消失）CHCl3紫红蓝色3SbClVitA不稳定碳正离子5个共轭双键max为326nm一个吸收峰2. UV法6个共轭双键max为350390nm三个吸收峰溶剂：无水乙醇-盐酸（100:1）紫外分光光度法三氯化锑比色法 HPLC法 含量测定“三点校正法”由来 UV法（三点校正法）测定依据：分子结构中共轭多烯体系，具有紫外吸 收特性，在325-328nm呈现选择性吸收 但是混有多

3、种杂质（异构体、氧化产物等杂质）在310340nm波长范围内有吸收干扰紫外测定故采用“三点校正法”消除干扰 1、杂质的吸收在310340nm范围内呈一条直线 随波长的增大而吸收度变小 2、物质对光的吸收具有加和性 即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质 吸收度的代数和 测定原理选择在三个波长处测定吸光度，结合校正公式计算A校正，再计算含量 波长（三点）选择（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分别在1的两侧各选一点 第一法 第二法测定对象: VitA醋酸酯 第一法 等波长差法1 = 328nm2 = 316nm3 = 340nm测定波长 300、316、328、340、360

4、等波长差法 校正公式 测定对象: VitA醇 第二法 等吸收度法(皂化法)1 = 325nm2 = 310nm3 = 334nm等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式 测定波长 300、310、325、334第一法无法消除杂质干扰时用此法维生素A含量是用生物效价表示 单位 IU/g（国际单位）换算因数 计算要求1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为 1g维生素A醇相当的国际单位数为 (VitA酯)(VitA醇)换算因数第一法测定维生素A醋酸酯时，换算因素为1900第二法测定维生素A醇时，换算因素为1830 换算因数由纯品计算而得应用：维生素A胶丸的测定，求标示量A328或A 328校正 03%15

5、%3%第二法第二法 维生素E生育酚*R1、R2均为CH3R1、R2为H和CH3R1、R2均为H生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）乙酰化（生育酚醋酸酯）结构：dl生育酚醋酸酯游离生育酚还原性水解维生素E 硝酸反应 鉴别试验水 解橙红色HNO3强氧化剂邻醌结构7515 三氯化铁联吡啶反应O弱氧化剂原理利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈 杂质检查 铈量法检查游离生育酚1 : 2 反应摩尔比硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄灰紫）药典规定取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，用（0.01mol/L）硫酸铈液滴定，消耗硫酸铈液1.0ml，限量

6、2.15 含量测定 GC法特 点选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制ChP 维生素E原料及其制剂 气相色谱法 ChP 内标法加校正因子 内标物 正三十二烷 固定相 硅酮（OV17） 检测器 氢火焰离子化检测器 供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标法加校正因子校正因子：含量计算：BP GC 内标 正三十二烷 R1.4USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外标 dl生育酚 R1.4氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl- 维生素B1盐酸硫胺UV还原性碱性与生物碱非水碱量法ChP 鉴别试验 硫色素反应荧光消失正丁醇蓝色荧光

7、H+OH-碱性VitB1H+H+H+H+ 沉淀反应非水溶液滴定法UV法硫色素荧光法 含量测定 非水溶液滴定法滴定前需加入过量醋酸汞溶液(为什么？)噻唑环上的季铵和嘧啶环上氨基，反应摩尔比1：2 ChP 原料药 UV法共轭双键结构，UV特征紫外吸收峰随pH变化而变化 溶剂 pH max 水 7 232-3 345 盐酸 2 246 421ChP 片剂、注射剂含量计算（每片）相当于标示量的%=规格g/片g（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlml手性CUV己糖结构-内酯 维生素CL抗坏血酸烯二醇强还原性酸性 鉴别试验与氧化剂的反应糖类的反应UV 与氧化剂的反应与2,6 - 二氯靛酚反应ChP（2

8、010）氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应与AgNO3反应ChP（2010） UVBP0.01mol/L HCl碘量法2,6 - 二氯靛酚滴定法HPLC 含量测定淀粉指示液，终点至蓝色不消失原理 碘量法具有较强还原性，可被氧化H+反应摩尔比11（原料、片剂、注射液）方法Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶解 立即用标准I2滴定至Blue淀粉指示液讨论新沸放冷H2O减少水中O2对测定的影响减慢VitC被O2氧化速度稀HAc,立即滴定附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤丙酮甲醛注射剂 抗氧剂 焦亚硫酸钠计算 W标示量V注射剂原料药、片剂、注射剂 ？1例：维生素C注射液

9、（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。 W标示量V注射剂1 2,6 - 二氯靛酚滴定法USPJP原理方法自身指示终点法 溶液显玫瑰红色时，即为终点玫瑰红 无色还原快速滴定 2min内 酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰并非维生素C的专一反应讨论例多种维生素片中VitA、 VitB1、VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定色谱柱 ODS流动相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇检测波长 272nm 280nm HPLC法对象 制剂、生物样品、果汁 梯度洗脱一、维生素A（共轭多烯侧链）的三氯化锑鉴别反应和三点校正法测定含量的原理、波长选