维生素分析课件

1、关于维生素的分析第一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月概 述维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。第二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分 本章仅对维生素(A、B1、C、E)进行学习讨论第三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素A第四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月为一个具有共

2、轭多烯醇侧链的 环己烯（一）结构与性质一、 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物 天然维生素A主要是反式第五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 易发生脱氢生成去氢维生素A2 易脱水生成去水维生素A3 易聚合反应生成无活性维生素A第六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 或有金属离子存在时更易氧化共轭多烯侧链 易被氧化（二）第七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月环氧化物VitA醛VitA酸第八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（三） 、与三氯化锑发生呈色反应（四） 、溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等CHCl3第九张，PPT共一百二十一页，创作于

3、2022年6月三氯化锑反应（一）条件 无水无醇CHCl3 鉴别试验二、第十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月蓝色紫红第十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月300-400nm扫描max为326nm一个吸收峰UV法（二）300-400nm扫描384、367、389nm三个吸收峰第十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月去水VitA（VitA3）VitA第十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月BP 对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）第十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三、含量测定

4、 目前各国药典均采用紫外分光光度法替代三氯化锑比色法（一）、紫外分光光度法 利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。第十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（ VitA2）去水维生素A（ VitA3）均对测定有干扰，故采用三点校正法第十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月1：测定原理，三个波长的吸收度，公式计算校正吸收度，再计算含量。故得名。该法的依据： 杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； 物质对光的吸收具有加和性。

5、第十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2 波长的选择：最大吸收波长，及两侧各选一波长 第一法（等波长差法） 1 =328nm， 2 =316nm， 3 =340nm， =12nm VitA的max（328nm） Ch.P用于测定维生素A醋酸酯第十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 第二法（等吸收比法）分别在1的两侧各选一点 A 2 = A3 =6/7A 1 1= 325nm， 2=310nm， 3 =334nm Ch.P用于测定维生素A醇第二十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 3. 杂质的吸收 对V.A有影响的杂质主要有以下几种：(1) V.A2 和V

6、.A3(2)维生素A的氧化产物(3) 维生素A在光照下产生的无活性的聚合物(4)维生素A的异构体等。 以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸收，干扰维生素A的测定。第二十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月4.测定方法（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯环己烷溶解）1）方法 在300、316、328、340、 360nm测吸收度2）计算 a.吸光系数E1%1cm b.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含维生素的A的国际单位数。IU/g= c.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量第二十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 3）换算因子：4

7、）A值的选择： a.计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。 b.判断法 最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。第二十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按以下的方法进行判断：若（A328校正-A328）*100%/A328 所得的数值在3.0%，则仍不用校正公式计算吸收度。可直接用A328代入E=A/C.L若（A328校正-A328）*100%

8、/A328 所得的数值 在-15.0%到-3.0%，则应用A328校正代入E=A/C.L若（A328校正-A328）*100%/A328 所得的数值在小于-15%或大于+3%，则不能用本法测定，应使用第二法。第二十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 如果最大吸收波长不在326-329nm之间，也不能用本法测定。采用第二法第一法的校正公式为： A328校正=3.52（2 A328 A316-A340）第二十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（2）第二法（皂化法，适用于维生素A醇）1）方法 精密称取一定量的供试品，加KOH乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、洗涤

9、、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9-15个国际单位数的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为325nm）。2）计算 同第一法。见书p250-251第二十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月3）A值的选择如果最大吸收波长在323-327nm之间， 且A300 /A325比值0.73，按下法判断：a. 若（A325校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝 对值在3%，可直接用A325 代入E=A/C.Lb.若（A325校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝 对值超过3%，

10、则用应用A325校正代入E=A/C.L如果最大吸收波长不在323-327nm之间， 或A300/A325比值0.73，表示供试品中杂质含量太高，应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定。第二十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 第二法的校正公式：A325校正=6.815 A325 2.555A310-4.260A3346.讨论 1）.吸收度校正方法： 维生素A醋酸酯：直线方程法（代数法） 维生素A醇：相似三角形法（几何法或6/7定位法） 2）.在应用三点校正法时，除其中一点是在最大第二十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧

11、进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定之前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对波长是否准确。测定的样品不得少于两份。7.应用示例 维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂等均可采用本法测定。第二十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第一法 第二法测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇方法 直接取样，测定 皂化提取，测定溶剂 环己烷 异丙醇max 328 nm 325 nm测定波长 5个 4个换算因数 1900 1830第一法与第二法的区别第三十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三氯化

12、锑比色法（二）优点 简便 快速max 618nm620nm标准曲线法缺点呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性（二）蓝色+3SbClVitA第三十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（三）高效液相色谱法RP-HPLC同时测定人血清中VitA和VitE的含量1、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18 (3003.9 mm）、甲醇水（96：4）、流速：1.2 ml/min、检测波长：08min (330 nm), 8 min后(292 nm）内标：维生素A醋酸酯第三十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和

13、酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。第二节 维生素B1第三十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl-第三十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵 为两个碱性集团第三十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（一）溶解性1、易溶于水，乙醇微溶， 乙醚不溶2、水溶液呈酸性（二）UV共轭双键max = 246nm结构与性质一、第三十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（三）硫色素反应第三十七张，PPT共一百二十一页，创作于2

14、022年6月与生物碱沉淀剂（碘化汞钾等）（四）生物碱沉淀反应嘧啶环 噻唑环 （五）氯化物特性 本品为盐酸盐，呈氯化物的反应。第三十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月ChP鉴别试验二、（一）硫色素反应第三十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第四十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月硫色素2H第四十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应第四十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（三）氯化物反应（五） 红外分光光度法（四）硫元素反应第四十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三、含量测定喹那

15、啶红亚甲蓝（紫红天蓝）（一）非水溶液滴定法第四十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月反应摩尔比为1：2第四十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月UV法（二）第四十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100标示量平均片重第四十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（三）硫色素荧光法原理1、荧光硫色素异丁醇铁氰化钾1VitBNaOH通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量第四十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2、实

16、验操作 40 ml具塞试管3支对照品溶液5 ml；其中2支加入氧化试剂3.0 ml，再迅速加入异丁醇20 ml，振摇。第三支试管中加入3.5 mol/l的NaOH，同法操作为空白。 另取三支试管加入对照品同法操作。 各试管中加入无水乙醇2 ml，分取异丁醇，进行荧光测定。第四十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月3、结果计算第五十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月特点4、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析（3）该法适用于VitB1的制剂含量分析（4）可用BrCN为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析第五十一张，PPT共一百二十一页，创作

17、于2022年6月第三节 维生素CL抗坏血酸具有烯二醇结构；具有内酯环；具2个手性碳原子具有旋光性第五十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月1、易溶于水2、水溶液呈酸性结构与性质一、（一）溶解性第五十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月烯二醇结构二酮基结构烯二醇结构（二）还原性第五十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月有活性有活性无活性第五十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月糖类的显色反应50结构与糖类相似（三）具糖的性质第五十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.57酸性（四）

18、一元酸第五十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）（五）光学活性*第五十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月与碱反应（六）水解性弱碱中生成单钠盐，强碱中水解第五十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第六十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月七 紫外吸收特性第六十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月与氧化剂的反应（一）鉴别试验二、去氢抗坏血酸OVitC第六十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月1、与AgNO3反应2、与2，6 - 二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH第六十三张，PP

19、T共一百二十一页，创作于2022年6月（玫瑰色）（无色）第六十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月3.其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝第六十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月糖类的反应（二）或盐酸50吡咯USP第六十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第六十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（蓝色）(糠醛)戊糖50(吡咯)第六十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月UV（三）BP0.01mol/L HCl第六十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三、杂质检查 1.溶液的澄清

20、度与颜色：有色杂质 分光光度法2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法第七十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月指示剂 淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量测定四、第七十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月H+第七十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6方法2、第七十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（1）酸性环境 . H

21、Ac （2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度讨论3、（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰第七十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（4）附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第七十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法（二）USPJP原理1、酚亚胺二氯靛酚，-62VitC第七十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月自身指示终点法方法2、第七十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（2）快速滴定 2min内 （1）酸性环境 HPO3-

22、HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）讨论3、第七十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（4）缺点 需经常标定贮存一周不稳定干扰多 氧化力较强第七十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三、高效液相色谱法人血浆中VitC浓度的HPLC法测定1、色谱条件2、标准溶液的制备3、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法4、方法学考察5、测定第八十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 苯并二氢吡喃醇VitE为二氢吡喃醇衍生物第五节 维生素E 第八十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月名 称R1R2相对活性-生育酚-

23、生育酚 -生育酚 -生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*VE为 -生育酚及其各种酯类第八十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月dl生育酚醋酸酯第八十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月结构与性质一、苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、溶解性 易溶于乙醇、丙酮、 乙醚等，水中不溶2、氧化性 对氧十分敏感遇光、 空气可被氧化为生育醌和生育 酚二聚体第八十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月3、UV284 nm吸收系数为41.0-45.04、乙酰化的酚羟基 易水解O醌型化合物生育酚-+or OHHVitE杂质，需检查第八十五张，PPT

24、共一百二十一页，创作于2022年6月O生育红（一）硝酸反应橙红色鉴别二、75水解HNO3VitE生育酚第八十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂第八十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月三氯化铁-联吡啶反应（二）第八十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月生育酚对-生育醌O弱氧化剂第八十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月血红色第九十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月 = 41.045.5max = 284nmmin = 254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）第九十一张，PPT共一百二十一页，创

25、作于2022年6月薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105 5） VitE Rf = 0.7-生育酚 Rf = 0.5-生育醌 Rf = 0.9TLC法（四）第九十二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2. 游离生育酚 杂质检查 三、原理:利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化 根据消耗硫酸铈滴定液的体积来控制游离生育酚的限量。酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L0.5ml）体积控制。第九十三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01m

26、ol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。第九十四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2.15限量第九十五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月四、含量测定GC法（法定方法）（一）GC特点1、选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制第九十六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件2、内标法加校正因子第九十七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6

27、月内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近第九十八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月WWKK%VitE%10012=稀释倍数稀释倍数样对实际工作中的计算方法第九十九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。1905年-甲状腺肿大被碘治愈。1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。1915年-科

28、学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。维生素发展史第一百张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发现。1928年-科学家发现维B至少有两种类型。1933年-维E首次用于治疗。1948年-大剂量维C用于治疗炎症。1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。1957年-Q10多酶被发现。1969年-体内超级抗氧化酶被发现。1970年-维C被用于治疗感冒。1993年-哈佛大学发

29、表维生素E与心脏病关系的研究结果。返 回第一百零一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月练习与思考A型题1. 维生素B1的鉴别方法是A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应第一百零二张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月2. 维生素E中国药典规定的含量 测定方法为A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法第一百零三张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月B型题A。亚硝基铁氰化钠反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 硝酸银试液的反应 1. 维生素C 2. 维生素

30、E 3. 维生素B1 4. 维生素AECBD第一百零四张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月X型题1. 用碘量法测定的药物有A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 维生素C D. 硫酸阿托品 E. 维生素C注射液第一百零五张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月返 回2. 可用紫外分光光度法测定含量的 药物有A. 维生素A丸剂 B. 丙酸睾酮 C. 维生素A D. 硫酸阿托品 E. 维生素B1片第一百零六张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月简答题 简述碘量法测维生素C含量的原理及实验注意事项。第一百零七张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月第四节 维生素D维生素D2骨化醇一、结构与性质第一百零八张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月维生素D3胆骨化醇第一百零九张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。多烯：可进行紫外检测。第一百一十张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月性质：1、脂溶性2、不稳定性3、旋光性4、显色反应5、紫外吸收特性第一百一十一张，PPT共一百二十一页，创作于2022年6月二、鉴别试验1. 显色反应醋酐-硫酸反应 D2 黄 红 紫 绿 D3 黄 红 紫、蓝绿