广防己配伍黄芪肾毒性的代谢组学研究

1、广防己配伍黄芪肾毒性的代谢组学研究【关键词】广防己；黄芪；中药配伍；肾毒性；代谢组学；核磁共振；形式识别Keyrds:AristlhiaFanghi;Astragaliradix;patibility;nephrtxiity;etabnis;nulearagnetiresnae(NR);patternregnitin在常规毒理研究的根底上，运用代谢组学技术手段，比拟观察了广防己及其配伍黄芪的肾毒性，以观察黄芪配伍广防己可能具有的减毒作用。1材料1.1动物SD大鼠，雄性，SPF级，体重(13010)g,由北京维通利华实验动物技术提供。北京中医药大学动物饲养房屏障系统饲养，自然明暗周期,室温24,

2、湿度：55，动物提早1购入，常规饲养，自由摄食、饮水。1.2药材1.3水煎剂取广防己药材2000g，标记为药材a，另取广防己药材2000g，黄芪药材250g，合并标记为药材b。分别将药材a、b分别置于提取罐中，加相当于药材10倍体积的冷水浸泡1h，加热至沸腾，煎煮1h，倾出药液，残渣参加9倍体积的水，煎煮1h后取药液，合并2次药液，过滤。其中水煎剂a减压浓缩至2469l药液，相当于1l含生药0.81g，采用HPL方法测得其马兜铃酸含量为0.319g/l；水煎剂b减压浓缩至2473l药液，相当于1l含生药0.91g，采用HPL方法测得其马兜铃酸含量为0.192g/l。二种水煎液均置4冷藏，备用。

3、1.4仪器VarianUNITYINVA600兆超导脉冲傅里叶变换NR谱仪,美国Varian公司产品；7020全自动生化分析仪,日本日立公司产品。2方法2.1动物分组及处理大鼠随机分为正常对照组、广防己组、广芪组三组，每组8只。广防己组、广芪组动物均按1l/kg给以相应药物灌胃，每日1次,连续给药4。正常对照组给予等体积蒸馏水。给药期间,大鼠自由摄食、饮水。于4末，分别留取各组大鼠24h尿液，10%的水合氯醛麻醉处杀大鼠，取血浆及肾脏组织。2.2尿液搜集和处理于动物处理前一天，采用代谢笼法，搜集24h尿液，留尿期间动物不摄食，自由饮水。代谢笼集尿器置于冰上，参加1%NaN3溶液作为防腐剂。对搜

4、集的尿液进展定量，离心处理，取上清，置-70保存，备用。转贴于论文联盟.ll.2.3血浆搜集与处理离心制备血浆，全自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)和肌酐(Sr)程度。2.4数据处理所得数据均用均数标准差(xs)表示，组间差异采用q检验，由SPSS13.0统计软件处理。2.5肾脏病理学检查各组大鼠肾脏用生理盐水冲净后，按HE常规制片，于光镜下观察。2.6代谢组学测定与分析2.6.1NR测量前尿样准备各组取5个尿液样本常温解冻，精细汲取300l尿样，参加300l缓冲液(0.2Na2HP4/NaH2P4,pH7.4),混匀，13000rp，10in离心，取上清500l,添加30ul1%TSP；转

5、入5样品管中进展测试。NR数据采集与分析：数据在VarianUNITYINVA600超导脉冲傅里叶变换NR谱仪上采集。采用有预饱和的1DNESY脉冲序列，取如下参数：谱宽7996Hz，混合时间0.100s，弛豫延迟时间2s，采样点数64000，累加次数64次；在弛豫延迟期间和混合时间内采用预饱和方式抑制水峰，谱仪偏置设置在水峰的位置。FID信号经过傅里叶变换转换为NR图谱，所用窗函数为0.5Hz线增宽因子。以TSP为化学位移参考峰的位置，并定为0。利用VNR软件的宏指令将数据进展FT变换，相位校正，基线校正。将d0.29.4范围内的谱图按每段0.04pp进展分段并积分，同时排除以溶剂峰为中心的

6、局部及包含尿素峰的局部(d4.66.2)。因柠檬酸受pH值影响较大，为保证分析结果一致，将柠檬酸积分2.54与2.58合并，标示为2.56，将2.66与2.7合并，标示为2.68，其余不变。2.6.2结果分析3结果3.1广防己及其配伍黄芪给药4大鼠BUN和Sr的变化见表1。表1给药4时各组大鼠BUN、Sr的变化(略)与正常对照组比拟，*P0.01；与广防己组比拟，P0.053.2广防己及其配伍黄芪给药4时大鼠肾脏组织病理学变化结果见图1。镜下可见，给药4时正常对照组大鼠肾小球球囊构造完好，无系膜细胞增生，肾小管构造明晰，肾间质无炎性细胞浸润图1A。广防己组大鼠肾小球构造破坏明显，其囊壁与周围组

7、织粘连，肾小管上皮细胞肿胀、溶解坏死，肾间质炎性细胞浸润图1B；广芪组大鼠肾间质炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞肿胀、坏死，但较广防己组病变范围孝程度轻图1。3.3广防己及其配伍黄芪给药4时大鼠尿样1HNR图谱及形式识别分析3.3.1广防己及其配伍黄芪给药4时大鼠尿样1HNR图谱，结果见图2。广芪组(GQ)大鼠尿液(u)1HNR图谱3.3.2广防己及其配伍黄芪给药4时大鼠尿样形式识别分析结果，结果见图3。由图3可以看出，给药4时，正常对照组、广防己组、广芪组大鼠尿液1HNR图谱波峰P积分值互不重叠，可以被区分开来，说明各组大鼠尿液代谢物存在差异。结合图2可以看出，广芪组较广防己组接近正常对照组。说明广防己组尿液代谢物较广芪组异常变化明显。4讨论本研究那么在前期发现广防己水提物按10倍药典高限剂量给药4可造成大鼠肾脏组织明显病理改变1的根底上，进一步引入代谢组学技术，通过比拟观察广防己与其配伍黄芪的肾脏毒性，讨论黄芪监制广防己毒副作用的内涵。结果显示，广防己和广防己配伍黄芪二组给药4时BUN、Sr较正常对照组均明显升高，肾组织出现不同程度的病理改变；较之广防己组，广芪组Sr明显降低，BUN无明显变化，肾组织病理改变减轻。结果说明，