环境激发吗啡条件性位置偏爱重现大鼠海马PSD95的蛋白和DNA表达

1、环境激发吗啡条件性位置偏爱重现大鼠海马PSD-95的蛋白和DNA表达【摘要】目的:检测吗啡条件性位置偏爱nditinedplaepreferene，PP重现大鼠海马区突触后致密质-95PSD-95的蛋白和DNA表达，观察PSD-95对吗啡成瘾记忆的影响。方法:建立大鼠吗啡PP模型，自然消退后，通过环境来诱发PP的重现，应用免疫组化和RT-PR的方法，观察吗啡PP重现组大鼠海马区PSD-95的表达，并与吗啡PP消退组、生理盐水对照组进展比拟。结果:吗啡PP环境激发组、吗啡PP消退组与生理盐水对照组相比，以及吗啡PP环境激发组与吗啡PP消退组相比，海马区PSD-95的表达明显降低，差异具有高度显著

2、性(P0.01)。结论:吗啡PP重现和消退大鼠海马区PSD-95表达明显降低，海马区PSD-95可能未参与成瘾记忆。【关键词】吗啡条件性位置偏爱环境激发海马突触后致密质-95Abstrat:bjetive:TbservetheexpressinfprtEinandDNAfpstsynaptidensityprtein-95(PSD-95)inhippapusfratsithrphinenditinedplaepreferene(PP)afterenvirnentinduedreinstateent,andtevaluatetheinfluenefPSD-95nadditinery.ethds:

3、PPratdelasestablishedithrphineinjetinandreinstateentasinduedbyenvirnentafterextintinfPP.TheexpressinfPSD-95prteinandDNAinhippapusfratsinreinstateentgrupfrphinePPerebserved,andasparediththseinextintingrupfrphinePPandntrlgrup.Results:TheexpressinfPSD-95inhippapusassignifiantlydereasedinratsinreinstate

4、entandextintingrupfrphinePPparediththseinntrlgrup(P0.01),anditassignifiantlydereasedinreinstateentgrupparediththseinextintingrup(P0.01).nlusin:TheexpressinfPSD-95inhippapusissignifiantlydereasedinratsinreinstateentandextintingrupfrphinePP.PSD-95inhippapushastakepartrntinadditery.Keyrds:rphine;nditin

5、edplaepreferene;envirnentalindue;hippapus;pstsynaptidensityprtein-95毒品成瘾研究的一个最大挑战是毒品滥用引起的复燃，但到目前为止，复燃的神经机制尚不清楚。药物成瘾是一个复杂的生物学、心理学和社会学问题，近年来越来越多的证据说明，学习记忆在成瘾行为的形成和保持中发挥重要作用。联络着环境刺激和滥用毒品效应的不良适应性记忆被公认为是引起毒品成瘾习惯复燃和持久的主要原因1。本实验通过利用SD大鼠吗啡条件性位置偏爱nditinedplaepreferene，PP-消退-环境激发模型，研究吗啡成瘾记忆重现状态下，大鼠海马区突触后致密质95

6、PSD-95的表达。1材料和方法1.1实验动物选用安康普通级SD大鼠24只3月龄，雌雄不限，体重为(25020)g221275g，由温州医学院实验动物中心提供。按随机抽样分组原那么，分为生理盐水对照组(N组)、吗啡PP环境激发组(R组)和吗啡PP消退组(E组)，每组8只，分笼喂养，自由进食、饮水。观察其活动、饮食量、饮水量和大便等情况。1.2实验试剂盐酸吗啡(沈阳第一制药厂消费)，盐酸纳洛酮北京四环制药厂消费，免疫组化抗体北京博奥森生物技术消费，Trizl(上海生物工程消费)，RT-PR试剂盒(上海Prega生物产品消费)，引物序列上海生物工程合成，PSD-95上游引物序列：5-AAGAGAA

7、TAAGGA-3，下游引物序列：5-AGGAAGGGGAAT-3，预计目的片段长289bp，-atin为内参照上游引物序列：5-TAAATGTGATTAGA-3，下游引物序列：5-ATGGAAGTGTTGAATAG-3，预计目的片段长385bp。1.3PP实验箱及预实验1.4吗啡PP模型的建立、消退和激发单位：gkg-1：5、5、10、10、15、15、20、20、30、30、40、40、50、50。PP的训练与依赖模型的建立同时进展，在每次注射吗啡后将大鼠放入白箱内50in，间隔2h后，再注射生理盐水放入黑箱内50in。吗啡依赖大鼠第8天于吗啡注射前2h注射盐酸纳洛酮5gkg-1，进展催促试

8、验来诱发戒断病症，对湿狗样颤抖、清理皮毛、站立、吞咽、跳跃、齿颤、上睑下垂、流涎、腹泻等病症给予评分。1.5免疫组化方法测试后大鼠灌注固定，取脑，参照鼠脑立体定位图谱，取海马区域组织，包埋切片，操作按试剂盒说明书进展，苏木素复染后观察拍片。1.6提取RNA，RT-PR方法检测PSD-95测试后大鼠麻醉后断头处死，于冰上快速开颅取脑并别离出海马区，提取RNA、RT-PR方法和操作按试剂盒说明书进展，分析软件为Gel-pr3.1分析系统。比拟。2结果2.1吗啡PP模型戒断病症评分及白箱内停留时间见表1。2.2PSD-95蛋白质免疫组化表达结果在各组实验鼠海马区，神经细胞胞浆内均可见棕黄色免疫反响产

9、物沉积。N组棕黄色颗粒明显而密集见图1a，E组棕黄色颗粒稍密集见图1b，R组棕黄色产物浅淡而稀疏见图1。2.3RT-PR检测海马区PSD-95DNA表达结果见表2和图2。3讨论临床和实验证明，吗啡的成瘾记忆非常生动和强烈，可以终生不忘，即使相隔数十年，只要回到相关的环境，即可激发强烈的渴求感，联络着环境刺激和滥用毒品效应的不良适应性记忆被公认为是引起毒品成瘾复燃和持久的主要原因。海马是参与毒品依赖的一个重要脑区，又是学习记忆的一个关键区域，本实验利用SD大鼠吗啡PP的建立-消退-环境激发模型，研究吗啡成瘾记忆重现状态下，大鼠海马区PSD-95的蛋白和DNA表达，从而讨论PSD-95是否参与了吗

10、啡的成瘾记忆。PSD是位于突触活性区突触后膜下方的一种亚微构造，对应激反响很敏感，多种外界刺激可引起不同脑区PSD的变化。PSD-95在信号传导、N-甲基-D-天冬氨酸NDA诱导的长时程增强中起着重要作用，并对突触传递和可塑性具有重要影响，并参与了学习与记忆、皮质环路的形成。研究证明，敲除脊髓PSD-95能阻止大鼠吗啡耐受的形成，说明PSD-95也参与了吗啡成瘾2。本实验发现，吗啡PP激发组和消退组大鼠海马区PSD-95表达明显降低，与生理盐水对照组比照，差异具有高度显著性(P0.01)，其原因与吗啡的损害有关。吗啡依赖形成过程中，海马神经细胞由于缺血低氧而出现变性坏死和退行性改变3，而PSD

11、-95的活性和含量是受神经元活性控制的，随着神经细胞数量减少和活性降低，PSD-95的表达也会随之降低。吗啡对学习记忆的损害早已被证实，PSD-95表达明显降低，反映了突触后膜NDA受体数量的减少和位置发生改变，这既会影响长时程增强的形成，也会影响递质和受体的准确结合，最终在行为上表现为学习记忆障碍。吗啡对学习记忆的影响是双重的，一方面可以对学习记忆造成损害，另一方面，屡次给予吗啡却可引起记忆恢复和重新稳固4，5，一些不良适应性记忆却得到了加强，导致依赖者有着强烈的药物渴求和复吸倾向。本实验发现，吗啡PP环境激发组与生理盐水对照组比照，海马区PSD-95的表达明显降低，差异具有高度显著性(P0

12、.01)。这一结果却出乎我们的意外。本实验行为学观察显示，吗啡PP环境激发组比吗啡PP消退组在白箱内停留时间明显延长，差异具有高度显著性，说明环境诱发了记忆的恢复和重新稳固，理论上说参与成瘾记忆的成分表达应该增高，而本实验结果却与此相反。海马是参与精神依赖的一个脑区，也是啮齿类动物空间学习记忆的中枢，且吗啡成瘾对空间学习记忆的损害也早已被证实6，本实验结果说明成瘾记忆与空间记忆存在有分层现象，海马区PSD-95的表达进一步降低，可能为空间记忆或其他类型记忆进一步被损伤所致。研究说明，成瘾记忆相关蛋白和基因的异常表达是药物成瘾长期存在的重要原因，成瘾记忆在一定条件下是可以改变的，并和一般的空间记

13、忆或情绪记忆的机制存在差异7-9，我们的研究也说明了这一点。另外，海马区PSD-95的表达明显降低，说明海马区PSD-95可能未参与成瘾记忆。以前的研究说明，PSD-95不仅参与了学习记忆也参与了吗啡成瘾，而既参与精神依赖又参与学习记忆的脑区，除了海马外，还有杏仁核、纹状体、额叶皮质等。对于其他脑区的PSD-95是否参与成瘾记忆，以及海马区其他的一些既参与吗啡依赖又参与学习记忆的神经递质是否参与了成瘾记忆，我们将作进一步的研究。【参考文献】1LeeJL,DiianP,ThasKL,etal.Disruptingrenslidatinfdrugeriesreduesaine-seekingbeh

14、avirJ.Neurn,2022,47(6):795-801.2LiaJ,ZhangB,TaF,etal.KnkdnfspinalrdpstsynaptidensityprtEin-95preventsthedevelpentfrphinetleraneinratsJ.Neursi,2022,123(1):11-15.3朱华,李利华,杨举伦,等.不同时程吗啡依赖大鼠依赖相关脑区的病理组织学观察J.温州医学院学报,2022,35(2):88-91.4ZarrindastR,Farahandfar,RstaiP,etal.Theinfluenefentraladinistratinfdpainer

15、giandh-linergiagentsnrphine-induedanesiainrphine-sensitizedieJ.JPsyhpharal,2022,20(1):59-66.5ZarrindastR,KhalilzadehA,RezayatS.Influenefintraerebrventriularadinistratinfhistainergidrugsnrphinestate-dependenteryinthestep-dnpassiveavidanetestJ.Psyhpharalgy,2022,74(2):106-112.6马光瑜,樊小力,徐小虎,等.吗啡成瘾对大鼠及小鼠学习与记忆才能影响的实验研究J.中国行为医学科学,2000,9(5):329-331.7NestlerEJ.nleularandellarsubstratesfaddi-tinanderyJ.NeurbiLearne,2002,78