灵芪胶囊对直结肠癌 lovo 细胞凋亡相关基因表达的影响

1、灵苗胶囊对直结肠癌10V0细胞凋亡相关基因表达的影响来源： ： 时间：2022-11-10灵芭胶囊源于传统医药方剂，经现代化的加工制成， 方中灵芝等名贵中草药对于肿瘤的治疗具有一定的疗效。通过前期研 究，笔者发现，灵茂胶囊对于消化道肿瘤具有一定的抑制作用。本课 题选取直结肠癌细胞lovo细胞，进一步探讨灵茂胶囊对直结肠癌 lovo细胞肿瘤凋亡相关基因表达的作用及机制。1材料与方法1. 1细胞株人源性直结肠癌lovo细胞：由黑龙江省肿瘤医院提供。1. 2药物与试剂灵英胶囊，药物组成：黄芭、灵芝、莪术、茯苓、人 参、贯众、山药、枸杞子、重楼、山慈菇等。该胶囊由本教研室自行 制备，每颗胶囊约含生药量

2、为L 65g,于4。冰箱存放备用，实验时 配制成混悬液;5-氟尿嘴唳注射液(天津金耀氨基酸提供，批 号：20220424,国药准字:H2022959) ；BSA(哈尔滨赛拓科技); 抗 体 Caspase3(H-170)：sc-13-87(Santa 生物公司)；二抗 R bLgG(H+l)/FLTO(中杉,哈尔滨赛拓科技)；-actin(上海翔升 生物科技专业提供)；显色液和蛋白Marker(碧云天生物技术 研究所提供)；转膜液SDS蛋白上样缓冲液(5)自行配制;TBS缓 冲液；TBST 缓冲液;BSA 封闭液；L 5molL-lTrisHCL(pH8. 8) ； 1. OmolL -lTr

3、isHCL(pH6. 8);1. OmolL-lTrisHCL(pH7. 5)；质量分数 30%丙 烯酰胺；质量分数20%Tween20；质量分数10%SDS；质量分数10%过硫酸 铁AP；G250考马斯亮蓝溶液(蛋白定量专用)；单去污剂裂解液(PMSF)； 电泳液缓冲液;转膜缓冲液。1. 3实验仪器蛋白质印迹法所用器材由黑龙江省肿瘤医院提供；电泳 仪(北京赛百奥科技)；DYY-12及凝胶成像仪(UVPUSA)；紫外 可见光分光光度计(日本岛津公司)；PVDF膜和滤纸(选欧尔公司)；离 心管(eppendorf公司)。1. 4实验方法1. 4.1实验分组将Wistar大鼠随机分为5组，每组10

4、只，灵茂胶 囊高剂量组予以灵茂胶囊35. 64g(kgd)1灌胃，灵芭胶囊中剂量组 予以灵茂胶囊17. 82g(kgd)1灌胃，灵英胶囊低剂量组予以灵茂胶 囊8. 91g(kgd)-1灌胃，阳性对照组予以5-氟尿咯哽注射液 0. 027g(kgd)-1灌胃，空白对照组予以等体积生理盐水灌胃，给药 7d后取血，别离血清，去除杂质，滤过灭菌，一4寸放置备用。将不 同组别的对数生长期的lovo细胞培养至细胞贴壁后，分别放入相应 的含药血清，48h后收集细胞。1. 4. 2提取蛋白收集细胞：将不同组别的细胞用胰蛋白酶进行消 化，用质量分数0.996氯化钠注射液洗3遍，PBS4(10min),转到 EP

5、管中，4000rminl离心5min(离心半径8cm),倒弃上清液,重复 洗涤3遍。细胞裂解：每管细胞加入裂解液200L,与细胞充分混匀。 温度4T,每间隔15min涡旋1次，使得细胞得以充分裂解，将裂解 后的细胞离心(12000rmin l, 4,离心半径8cm)提取上清液备用。1. 4. 3检测蛋白含量应用考马斯亮蓝法检测蛋白含量，计算蛋白的上样量。1. 4. 4冻存变形的蛋白样本放置于61oddingbuffer中，99水浴 中进行涡旋，约5min。冷却后，冻存，长期存放于一80(冰箱。1. 4. 5蛋白质印迹法流程玻璃板洗净、晾干备用，放入夹中卡紧, 然后垂直卡在架子上准备灌胶。配制质量分数10%别离胶，需要以下 材料：质量分数10%别离胶7矶，去离子水2. 8mL,质量分数3096丙烯 酰胺 ACR2. 31mL, Tris(pll8. 8)1. 75mL,质量分数 10%SDS70L,质 量分数10%过硫酸铉AP70L。加入TEMED3L后立即摇匀即可灌胶。将 滤纸及PVD膜泡在转膜液中。论文发表中国卫生产业杂志投稿咨询：1