脑脉通对骨髓干细胞动员保护大鼠脑缺血损伤的影响

1、脑脉通对骨髓干细胞发动保护大鼠脑缺血损伤的影响1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物1.1.2药物与试剂1.1.3主要仪器1.2方法1.2.1实验分组大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、脑脉通组、发动组、脑脉通+发动组(结合组)。假手术组10只大鼠，其余4组均为48只；后4组根据取材时间又分为2、3、7、14d组，每组大鼠12只。1.2.2用药方案1.2.3模型制备参照改进的Lnga法用线栓阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血动物模型(A)6。10水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，待完全麻醉后，仰卧位固定大鼠，行颈前正中切口，左侧钝性别离颈总动脉(A)；别离颈内外动脉，穿线备用，结扎翼颚动脉，于颈

2、外动脉近动脉分叉处剪口，栓线穿入颈内动脉，缓慢推进，直至感觉有阻力为止，穿线成功后缝合皮肤。假手术组除不穿入栓线外，其余操作一样。手术过程中保持大鼠肛温(37.00.5)，保持室温(261)。术后注射青霉素钠(1万U100g-1d-1)，以防感染。1.2.4取材与标本处理1.3测定指标1.3.1大鼠死亡率对术后清醒至取材时死亡和存活大鼠进展计数，计算各组(包括2、3、7、14d4个时间点)死亡大鼠只数与总体(造模后死亡与存活大鼠总只数)的比率。大鼠死亡率=(死亡只数/死亡与存活只数总和)100%。1.3.2大鼠体重变化率分别于术后2d至取材时间在相应时间点大鼠称重，采集数据的时间点数分别为2d

3、组(1个)、3d(2个)、7d(3个)、14d(4个)，计算公式为：体重下降率=(术前体重-术后体重)/术前体重100%，体重增长率=(术后体重-术前体重)/术前体重100%。1.3.3外周血B计数抗凝血液20l用B稀释液稀释20倍，取20l入血细胞计数盘的计数室，静置3in，待B下沉，在低倍镜下计四角四个大方格的有核细胞，4格总和乘以50那么为每立方毫米的有核细胞计数。1.3.4外周血D34+细胞计数1.3.5脑组织D34表达测定神经功能评测方法按文献7从自发运动、轻瘫实验、前肢运动功能检测、加强运动功能检测、痛觉、位置觉6个方面进展，总分为18分，病症越重，得分越少。神经功能定量评测时间在

4、术后48h以及术后每周进展。选择术后48h神经功能缺失在12分以下者可进入下一阶段观察，12分以上者剔除。1.3.7脑组织含水量对切取的脑组织迅速用电子天平称重(准确度为0.1g)，之后放入100枯燥箱中枯燥24h，再次称重。脑组织含水量=(脑湿重-脑干重)/脑湿重100，以%表示。1.3.8脑梗死面积切取的脑组织用2%TT染色，数码相机拍照，应用计算机图像分析系统测定和计算脑组织梗死面积。以梗死面积占总脑片面积(%)的百分比表示。1.3.9脑组织病理观察常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，200倍光镜下观察半暗带、缺血中心区等神经细胞病理变化。1.4统计学

5、处理采用SPSS11.0统计软件，对数据资料进展正态分布检验，符合正态分布者采用单因素方差分析，不符合正态分布者进展数据转化后比拟，结果以xs表示。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1术后大鼠生存状况观察2.1.1一般状况术中大鼠呼吸、体温维持在正常生理范围，无明显活动性出血。术后大鼠死亡出现两个顶峰，于术后23d和7d；术后7d大鼠体重下降明显，714d大鼠进食、饮水、活动及毛色光泽等明显好转，体重增加。2.1.2大鼠死亡率模型组大鼠死亡率(34.40%)较假手术组(10%)明显增高(0.05)；与模型组比拟，发动组死亡率(30.24%)无显著升高；结合组大鼠死亡率(25.71%)较模型组和发

6、动组及脑脉通组(28.57%)有下降趋势，但无显著的统计学差异(0.05)。2.1.3大鼠体重变化率与假手术组比拟，模型组2、3和7d大鼠体重下降显著，14d增长减少(0.01)；与模型组比拟，脑脉通组和发动组7d、结合组各时间点大鼠的体重下降减少，各组14d的增加显著(P0.05，0.01)；结合组3和7d较脑脉通组体重下降减少，14d体重增加显著(P0.01)，结合组7d的大鼠体重下降也较发动组减少(P0.05，0.01)；模型组、发动组7d大鼠体重下降率分别较其2和3d组明显(P0.05，0.01)，见表1。表1各组大鼠体重变化率比拟(略)2.2各组大鼠外周血B计数的变化模型2、3d组大

7、鼠外周血B较假手术组显著增多(P0.01)。与模型组比拟，脑脉通组、发动组和结合组各时间点的B计数均显著增多(P0.05，P0.01)。发动组各时间点外周血B计数均较脑脉通组增加(P0.05，P0.01)。结合组各时间点较脑脉通组、2d和3d发动组外周血B计数明显增加(P0.05，P0.01)。模型组、发动组和结合组3d的外周血B计数分别较其2d组增加，7d和14d较2d组减少明显(P0.05，P0.01)；各组大鼠7d和14d的B计数均较其3d组减少明显(P0.05)，表2。表2大鼠外周血B计数(109/L)及血液D34+细胞计数(略)2.3大鼠外周血D34+细胞计数变化假手术组大鼠血液中有

8、少量D34+细胞。模型2、3d组大鼠外周血D34+计数均较假手术组显著增加(P0.05)；与模型组比拟，发动组2、3和7d，结合组各时间点的大鼠外周血D34+细胞计数显著增加(P0.05，P0.01)，以3d组的增加尤为显著(P0.01)。发动组各时间点外周血B计数均较脑脉通组增加(P0.05，P0.01)。结合组各时间点较脑脉通组、3和7及14d较发动组外周血B计数明显增加(P0.05，P0.01)。各组3d较其2d组增加，14d较其2d组减少，发动组7d的外周血B计数也较其2d组减少(P0.05，P0.01)；各实验组7d较其3d组减少明显(P0.05，P0.01)；与7d组比拟，发动组和

9、结合组14d的B计数减少(P0.05)，见表2。2.4大鼠脑组织D34+表达变化假手术组脑组织中未检测到D34+细胞表达。模型组各时间点大鼠脑组织D34+表达均较假手术组显著升高(P0.01)。与模型组比拟，脑脉通、发动组和结合组各时间点大鼠脑组织D34+表达均显著增强(P0.01)。各发动组大鼠脑组织表达均较脑脉通组显著增强(P0.01)。各结合组大鼠脑组织D34+表达分别较脑脉通组和发动组增强(P0.05，P0.01)。各实验组大鼠7d的脑组织D34+表达分别较其2和3d组增强，14d组较其2和3d组减弱(P0.05，P0.01)；各组14d的表达均较其7d组减弱(P0.01)，见表3。表

10、3各组大鼠脑组织D34+细胞表达比拟(略)2.5大鼠神经功能评分变化各模型组大鼠神经功能评分均较假手术组显著降低，以7d组尤为显著(P0.01)。与模型组比拟，脑脉通和结合组各时间点大鼠的神经功能评分均明显增高，发动组7和14d的评分增加(P0.05，P0.01)。与脑脉通组比拟，发动组2和3d大鼠神经功能评分降低(P0.05)。结合组7和14d大鼠神经功能评分分别较脑脉通组和发动组增高，以14d组的增高尤为明显(P0.05，P0.01)。各实验组大鼠7和14d的神经功能评分分别较其2和3d组增加，脑脉通组和结合组3d也较其2d组增高(P0.05，P0.01)；各实验组14d大鼠较其7d组的神

11、经评分增加显著(P0.01)，见表3。2.6大鼠脑组织含水量变化各模型组大鼠脑组织含水量均较假手术组显著升高(P0.01)。与模型组比拟，脑脉通和结合组各时间点大鼠脑组织含水量降低，发动组7d、14d的脑含水量明显降低(P0.05，P0.01)。发动组3d的脑含水量较脑脉通组增多(P0.05)。结合组14d大鼠脑组织含水量较脑脉通组和发动组均明显降低(P0.01)。各实验组大鼠7d脑含水量分别较其2d和3d组增加(P0.01)、14d组较7d组的降低显著(P0.01)，见表4。表4各组大鼠脑组织含水量和脑梗死面积变化比拟(略)2.7大鼠脑梗死面积变化各模型组大鼠脑梗死面积均较假手术组显著增大(P0.01)；与模型组比拟，脑脉通组和结合组各时间点的脑梗死面积减小，发动7d和14d组减小明显(P0.05，P0.01)。发动组和脑脉通组比拟无显著统计学差异(P0.05)。结合组7d和14d大鼠闹梗死面积较脑脉通组和发动组减小(P0.05，P0.01)。模型组和脑脉通组7d的脑梗死面积分别较其2d和3d组增大(P0.01)，结合组14d较其2d和3d组减小(P0.01)；模型组、发动组和结合组14d的脑梗死面积分别较其7d减小(P0.05，P0.01)，见表4。2.8大鼠脑组织病理观察HE染色光镜观察，各模