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文档简介

1、专题一基因工程1a1.1DNA重组技术的基本工具2a学习目标1、基因工程的基本概念2、DNA重组技术的三种基本工具重点:DNA重组技术的三种基本工具难点:载体具备的特点3a定向基因改造设想 设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮?能否让细菌“吐出”蚕丝?设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物?设想三经过多年的努力,科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术基因工程。4a基因工程概念 又叫做DNA重组技术。是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。特点: 与诱变

2、育种相比,其特点是_。 在_水平上进行操作。 是否属于可遗传的变异?定向改造生物性状分子5a基因工程培育抗虫棉的简要过程:普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么?6a基因工程培育抗虫棉的关键步骤:关键步骤一:抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二:抗虫基因与运载体DNA连接关键步骤三:抗虫基因导入受体(棉花)细胞7a解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具?关键步骤一的工具:关键步骤二的工具:关键步骤三的工具:基因的剪刀限制酶基因的针线DNA连接酶基因的运载工具运载体8aDNA 重组

3、技术的基本工具“分子手术刀” 限制酶 “分子缝合针” DNA连接酶 “分子运输车” 基因进入受体细胞的载体 9a识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断,由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性核酸内切酶。4000种。 1、来源: 2、种类:3、作用:4、结果:形成两种末端一、 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶黏性末端平末端10a11a T磷酸二酯键1234512345 A12a 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。限

4、制酶什么叫黏性末端?13a限制酶什么叫黏性末端?14a什么叫黏性末端? 被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。15a16a什么叫平末端? 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。17a18a类型EcoliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别二“分子缝合针”DNA连接酶19a二、 “分子缝合针” DNA连接酶1、种类:2、作用部位:两类Ecoli DNA连接酶T4 DNA连接酶 磷酸二酯

5、键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来,即把梯子两边扶手的断口连接起来,这样一个重组的DNA分子就形成了。20aGCTTAAGCTTAADNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?21aDNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3末端的羟基上,形成磷酸二酯键22a1、通常以质粒作为载体质粒细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。裸露的、结构简单、独立于细菌之外,并且有自我复制能力氨苄青霉素抗性基因质粒拟核大肠杆菌细胞目的基因插入位点复制原点三、 “分子运输车” 基因进入受体细胞的载体:23a质粒 24a载体应具备的四

6、个条件(1)能在宿主细胞内稳定保存并自我复制。(2)有一个至多个限制酶切点,以便与外源基因连接(3)具有某些标记基因,以便进行筛选25a小结基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有专一性(识别序列)切开DNA分子的磷酸二酯键DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4 DNA连接酶运载工具具备的条件结构简单,大小适中能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一个至多个限制酶切位点具标记基因质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒26a1.以下说法正确的是 ( ) A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点,以便与

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