基因工程的操作步骤

1、基因工程的操作步骤第1页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子。质粒是基因工程最常用的运载体。第2页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。第3页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二四、基因

2、工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定第4页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二目的基因的获取1、目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因，是人们所需要转移或改造的基因。如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成请阅读P9第一和二两段第5页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二（一）从基因文库中获取目的基因 将含有某种生

3、物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库 基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）基因文库第6页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二 概念：PCR全称为_，是一项 在生物_复制_的核酸合成技术 条件：_、 _、_ 、 _.原理：_方式：以_方式扩增，即_（n为扩增循 环的次数）结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(二)利用PCR技术扩增目的基因第7页，共17页，2022年，5月20日，12点5分

4、，星期二 过程高温变性（解旋为单链）低温退火（引物与单链互补结合）适温延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链）重复循环第8页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二思考：PCR技术与DNA复制有何异同？第9页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二 对DNA连接酶、DNA聚合酶等的理解名 称 作 用 生理过程DNA连接酶 限制酶DNA聚合酶RNA聚合酶解旋酶连接两个DNA片段基因工程切割某种特定的脱氧核苷酸序列基因工程将众多游离的脱氧核苷酸聚合成脱氧核苷酸长链DNA复制逆转录转录RNA复制DNA复制转录使碱基间氢键断裂形成脱氧核苷酸链将众多游离的核糖核

5、苷酸聚合成核糖核苷酸长链第10页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二8.（2010广州模拟）下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（ ）A. B. C. D.C第11页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二第12页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二基因组文库与部分基因文库的关系怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?第13页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二基因文库的构建方法鸟枪法：供体细胞中的DNA许多DNA片段运载体限制酶与载体连接载入受

6、体细胞产生特定性状导入外源DNA扩增目的基因分离(直接分离法)第14页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA反转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)第15页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成第16页，共17页，2022年，5月20日，12点5分，星期二上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法操作简便广泛使用工作