PTEN在乳腺癌中的表达及其与转移的关系

1、摘要】 目的 通过检测 PTEN 基因在乳腺癌组织中的表达探讨其临床病理意义。方法 采用 逆转录聚合酶链反应（RT PCR）检测PTEN在40例乳腺癌中的表达。结果乳腺癌组织 与正常乳腺组织和癌旁组织PTEN的表达有显著差异（PV0.01, PV0.05）。PTEN在早期浸 润性癌和晚期浸润性癌阳性表达率差异显著（PV0.05）；在淋巴结转移组与无淋巴结转移组 检出阳性率差异显著（PV0.01）。结论PTEN表达与乳腺癌临床病理特征和生物学行为存 在密切关系；PTEN基因是乳腺癌细胞增生活跃的重要影响因素。【关键词】 乳腺癌；癌基因；抑癌基因乳腺癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤,其发生发展是一个多

2、基因、多阶段的变化过程。其中 癌基因突变激活及抑癌基因失活起重要作用oPTEN基因为抑癌基因，其蛋白产物具有磷酸酶 活性，调节细胞周期和增殖活性。国外学者近年研究发现PTEN基因及其蛋白表达与一些恶 性肿瘤发生发展、生物学行为和预后有密切关系110本实验拟采用逆转录聚合酶链反 应（RT PCR）分析并研究乳腺癌组织及淋巴结中PTEN表达及其与乳腺癌转移的关系，为 乳腺癌诊治提供临床依据。1 材料与方法1.1 标本及临床病理资料 我院20062007年间乳腺外科收治手术切除女性乳腺癌标 本60例，年龄4873 （平均57.8）岁。肿瘤直径W2 cm者21例，25 cm者32例，5 cm 者7例。

3、浸润性特殊癌2例（乳头状癌1例、黏液腺癌1例）；浸润性非特殊癌51例（浸润性 导管癌 42 例、浸润性小叶癌 6 例、髓样癌 2 例、硬癌 1 例）；早期浸润性癌 7 例（早期浸润 性导管癌6例、早期浸润性小叶癌1例）；1期19例，11期32例，111期9例；淋巴结转移 38例，无淋巴结转移22例。另取20例年龄4570（平均55.7）岁女性乳腺癌根治术后癌 旁腺体组织（距肿瘤边缘V 2 cm）和10例年龄4468 （平均53.4）岁乳腺良性肿瘤术后正常 腺体组织（距肿瘤边缘1 cm）作对照组。标本离体后立即置于-80C冰箱冻存。全部标本均 经病理诊断证实。病人术前均未接受过化疗或放疗。1.2

4、主要试剂 总RNA提取试剂盒（Trizol）、逆转录试剂盒系Invitrogen产品均购自 大连Takara公司。按GenBank的（PTEN） EST序列设计引物，PTEN基因（具体由大连宝 生生物工程技术公司合成）上游引物：5 CAC AGA ATT CCA GAC ATG ACA GCC ATC ATC 3，下游弓I物：5 GTG GAT CCT CAT GGT GTT TTA TCC CTC TTG 3， 扩增片段为 1 209 bp2内参Bactin 上游引物:5ACA CTG TGC CCA TCT ACG AGG3，下游引物： 5 AGG GGC CGG ACT CGT CAT

5、ACT 3，扩增片段为627 bpo PTEN 登录号： NM058076o1.3方法 采用RT PCR方法。按照试剂盒说明书提取RNA后对提取物进行含量及 纯度分析。RNA浓度的测量OD260在0.40.6之间。OD260/OD280=2.1取24 p g RNA 进行逆转录，逆转录根据RT试剂盒（大连宝生生物技术公司）说明进行。PTEN基因的PCR 扩增条件为：变性温度94C，45 s；退火温度55C，1 min；延伸温度72C，2 min。 共35个循环，72C，10 min作终延伸。取PCR产物经15 g/L琼脂糖电泳，溴化乙锭染色， 紫外光下照相。B actin在所有RT PCR扩增

6、产物琼脂糖电泳检测结果中均为一条单独 闪色区带，避免了假阴性的发生；同时RT PCR扩增产物片段与预期大小相一致1, 2， 分析转录产物，反映特定基因的mRNA表达情况，证明PCR产物无假阳性发生。1.4 统计学处理 应用SPSS11.0软件包进行率的x 2检验。2结果RTPCR扩增产物琼脂糖电泳检测结果1 209 bp处有一明亮的条带为PTENPCR 产物（见图 1），与文献报道一致3，4。M： DNA分子标记；N：正常乳腺组织；T1、T2 :乳腺癌组织;P1、P2:乳腺癌癌旁 组织图1 RT PCR分析PTEN基因在乳腺癌组织中的表达乳腺癌的 PTEN 表达与临床病理特征关系 正常乳腺组织

7、组和癌旁组织组 PTEN 表达阳性率明显高于乳腺癌组（PV0.05,PV0.01）。在早期浸润性癌和晚期浸润性癌中PTEN 阳性率差异显著（PV0.05）。PTEN阳性表达率在淋巴结转移组和无淋巴结转移组差异显著（PV0.01）（见表1）。表1乳腺癌病理类型，分级及转移状况与PTEN表达的相互关系3讨论肿瘤发生与多个癌基因及抑癌基因异常表达有关。发现并研究癌基因和抑癌基因、了解 其产物在信号传导通路中的作用,将有助于阐明癌变机制及寻找肿瘤药物治疗靶点。有研究 表明，PTEN基因不同程度地参与肿瘤发生和转移26。PTEN （phosphatase and tension homologue de

8、leted on chromosome ten）为 Steck （1997 年） 发现并命名的具有磷酸酶活性的抑癌基因,其抑制酪氨酸磷酸化的作用,从而对细胞增殖和 细胞周期起调控作用5。PTEN失活则促进肿瘤进行性生长和肿瘤细胞增殖活性增加6。 PTEN负调控细胞周期及多种信号途径，抑制细胞黏附、细胞迁移、细胞分化、细胞衰老和 细胞凋亡等多种生理活动。PTEN基因突变在某些肿瘤中突变率高，但在多数肿瘤中突变率 不高，PTEN蛋白在多数肿瘤中有失表达或表达减少，提示存在翻译或翻译后水平的调控机 制。近年，国外学者较广泛地研究了 PTEN基因及其蛋白产物在多种恶性肿瘤和正常组织中 的表达，发现PT

9、EN蛋白表达与一些恶性肿瘤的发生发展，生物学行为和预后有密切关系， 阳性表达者多分化好、生长速率低、不易发生转移和预后良好7， 8。本组资料发现， PTEN 蛋白在乳腺癌中表达率明显低于正常乳腺组织及癌旁组织（PV0.05）,在早期浸润性癌中 PTEN阳性率明显高于晚期浸润性癌（PV0.05）。区域淋巴结未转移者阳性率明显高于淋巴 结转移者（PV0.05）。其结果与国外一些文献报道相似9, 10，说明PTEN表达与乳腺癌 临床病理特征，生物学行为和预后评估有密切关系。本实验证明,PTEN基因表达是反映乳 腺癌发生发展、生物学行为和预后的重要生物学标记物之一。癌基因的激活或抑癌基因的失 活或突变

10、是恶性肿瘤发生和发展的分子学基础，因此检测PTEN在乳腺癌中表达，可提高对 乳腺癌恶性表型判断的准确性，有助于深入了解肿瘤发生发展机制，并可为鉴别诊断、判断 预后和基因治疗提供依据。人们对PTEN的研究刚刚开始，尤其是其表达蛋白的研究，很多 问题需进一步研究，如PTEN在肿瘤抑制及信号途径中的功能，还需探讨。同时，收集更多 的资料，定期随访，也是下一步应用本研究结果为乳腺癌预后进行评估的重点。 参考文献：1金倩;氯地酊联合激光治疗座疮158例疗效观察J;广东医学;1997年10期2董新亭，李卫莉，马秀华;自拟粉刺消治疗座疮126例J;中国中医药科技;1999年06期3查旭山，陈修飏;寻常座疮治

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