多指标综合评分法优化更年康颗粒醇提工艺

1、多指标综合评分法优化更年康颗粒醇提工艺【摘要】：目的优化更年康颗粒的醇提工艺。方法采用正交试验设计,以芍药苷、黄芪甲苷含量为评定指标,用多指标综合评分法进展数据处理,优化提取条件。结果更年康颗粒优化醇提工艺为18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。结论该提取工艺合理,有效成分提取效率高。【关键词】更年康颗粒芍药苷黄芪甲苷正交实验综合评分法abstrat：bjetivetptiizetheextratintehnlgyfrgengniankanggranules.ethdsanrthgnaltestasadptedinthestudy.thententsfpaeniflrinandas

2、tragalsideereusedasindiesfappraisal.datapressingasarriedutiththeultipleguidelinesgradingethdfrptiizingtheextratinnditin.resultstheptiizedextratintehnlgyfrgengniankanggranulesasshntbe：eighteenfldvluef70%alhlshuldbeaddedt1vluefthegranulesfr3suessiverefluxextratinsith1.5hfeah.nlusintheptiizedextratinte

3、hnlgyasratinalandtheextratinrateftheativepnentsashigh.keyrds：gengniankanggranules；paeniflrin；astragalside；rthgnaltest；gradingethds更年康颗粒是在?景岳全书?归肾丸的根底上,根据辨证施治原理并结合临床理论挑选出来的,由白芍、枸杞子、熟地黄、黄芪、合欢皮、淫羊藿、钩藤等9味中药组成,具有滋肾养阴、平肝宁心的成效。主要用于治疗妇女更年期潮热汗出、心烦失眠等病症。为减少药物用量及更好地发挥其成效,通过查阅文献,将方中的白芍、黄芪、合欢皮、钩藤4味药物进展乙醇提取,其余药物进

4、展水煎煮提龋本试验就上述4味药物的醇提工艺,应用正交试验法,以芍药苷、黄芪甲苷含量为指标,采用综合评分法进展优眩1仪器与试药l-10advp型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；spd-6av紫外检测器(日本岛津公司)；美国allteh公司500型蒸发光散射检测器；h-2000色谱工作站；电子天平(ettlertledag285)；kq-500e型医用超声清洗器(昆山超声仪器)。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110736-202226)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110781-202212)；中药材购自南京市药材公司,经南京中医药大学药学院生药教研室鉴定

5、为符合2022版?中华人民共和国药典?规定药材。甲醇为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯,均购自上海化学试剂；水为重蒸水(自制)。2方法与结果2.1正交设计方中白芍为君药,其活性成分为芍药苷,可溶于醇类；黄芪、合欢皮主要成分为皂苷和多糖类物质,且这两局部均为活性成分,工艺中采用醇提取,可兼顾两局部成分；钩藤主要活性成分为各种吲哚类生物碱,主要有钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛因碱等,其在乙醇中有较好的溶解性,为充分进步生物碱的利用率,采用醇回流提龋故根据方中这4味药的主要化学成分的理化性质,以乙醇为提取溶媒,采用l9(34)正交表进展正交设计,对乙醇的浓度(b)、用量(a)、提取次数()、提取时间(d),

6、用4因素3程度进展考察,以芍药苷、黄芪甲苷含量为考察指标,进展提取工艺最正确参数确实定。其提取工艺因素程度设计见表1。按处方配比取处方药材9份,每份45g,按照因素程度表操作,参加乙醇,加热回流,过滤后将所得的滤液减压浓缩成稠膏。表1因素程度表略2.2考察指标的测定2.2.1hpl法测定芍药苷含量色谱条件：采用依利特hypersilds色谱柱(2504.6,5)；流动相：甲醇-水(2575)；流速：1l/in；检测波长：230n；柱温：30。线性关系考察：精细汲取0.601g/l芍药苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分别置于5l量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,使浓度分别为0

7、.0601、0.1202、0.1803、0.2404、0.3005g/l。分别汲取上述各对照品溶液20l,进样,按上述色谱条件测定峰面积值,以峰面积均值(y)为纵坐标,进样浓度(x)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程：y6223541.78x38695.056,r0.9998(n5)。结果说明,芍药苷在0.06010.3005g/l范围内呈良好的线性关系。含量测定：取按各提取工艺制备的稠膏约0.2g,精细称定,置离心管中,精细参加稀乙醇20l,称定重量,超声处理1h,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得芍药苷供试品溶液。汲取20l,注入液相色谱仪,每个样品平行进样2次

8、,以外标两点法计算,测定各样品中的芍药苷含量。结果见表2。2.2.2hpl-elsd测定黄芪甲苷含量色谱条件：采用依利特hypersilds色谱柱(2504.6,5)；流动相：甲醇-水(7921)；流速：1l/in；elsd漂移管温度：90；雾化气流速：2.20l/in。线性关系考察：精细汲取1.306g/l黄芪甲苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分别置于5l量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,使浓度分别为0.1306、0.2612、0.3918、0.5224、0.6530g/l。分别汲取上述各对照品溶液20l,进样,按上述色谱条件测定峰面积值,以峰面积均值的对数值(y)为纵坐

9、标,进样量的对数值(x)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程：y0.9416x5.7208,r0.9996(n5)。结果说明,黄芪甲苷在2.61213.06g范围内呈良好的线性关系。含量测定：取按各提取工艺制备的稠膏约4g,精细称定,加水10l,超声溶解30in,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次40l,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40l,弃去氨试液,正丁醇液蒸干。残渣加蒸馏水5l使溶解,放冷,通过d101型大孔树脂柱(内径1.5,长12),以水50l洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30l洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继用70%乙醇50l洗脱,搜集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5l量瓶中

10、,甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,注入液相色谱仪,每个样品平行进样2次,以外标两点对数方程法计算,测定各样品中的黄芪甲苷含量。结果见表2。2.3实验结果按照l9(34)正交设计表的条件进展实验,分别测得芍药苷、黄芪甲苷的含量。将结果用多指标试验全概率方法进展数据处理,详细运算及公式相关符号的意义可参考文献1。根据各指标影响作用的大小,本试验按其重要程度之比为12芍药苷权重黄芪甲苷权重0.60.4,计算p(aj)及各指标的p(b?/aj)xij/sj,那么综合评分()p(bi)2p(a1)p(b?/a1)p(a2)p(b?/a2)0.6xi1/s10.4xi2/s2。在上述各式中bi为第i号试

11、验,aj为第j个指标。xij表示第j个指标下的第i个测定值,以sj表示第j个指标下各次(n次)试验结果的和。i1,2n；j1,2k。数据处理和方差分析见表2、表3。表2正交试验结果略表3方差分析略注：f0.05(2,2)=19.00,f0.01(2,2)=99.00结果说明,a、b、d对试验结果均无显著影响。经直观比拟分析,同时结合消费实际,综合比拟,确定最优工艺条件为a2b33d2,即18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。2.4最正确工艺验证取处方药材3份,根据挑选得到的提取工艺a2b33d2,进展正交验证试验,得芍药苷含量为1.51%,rsd1.51%(n3)；黄芪甲苷含量为0

12、.061%,rsd1.97%(n3)。可见,按优化工艺进展提取,芍药苷、黄芪甲苷均获得较理想的结果。说明该工艺稳定可行。3讨论当处方中有多味药材时,其制剂工艺的评价如采用单一指标那么代表性较差,用不同种类的成分作为评判指标其结果才有较广泛的代表性。但由于不同药材中的成分含量有时不在同一数量级,直接累加那么使数量级大的对结果的奉献大,而小的奉献小,常不符合组方原那么及治那么。用多指标正交试验进展工艺优选时,首先需解决指标间量纲不一致和指标间的相容与否的问题,然后需针对指标间的重要性差异给出各指标权重,综合评分后再进展统计分析。在应用此法时,如何设置指标的权重,需根据详细情况详细分析。本方剂需进展醇提的各味药物中因白芍为本方君药,同时黄芪的皂苷类成分在疗效上都将发挥重要作用,故将二者的权重定为0.60.4。在进展芍药苷含量测定时,由于本处方醇提局部含有4味药,样品中含有一些极性小的物质在样品测定时不易从色谱柱上洗脱,连续进样易造成芍药苷位置附近有杂质干扰,甚至会出现肩峰,影响其别离效果,因此,提取时需对样品进展净化处理,如可以采用乙醚进展脱脂处理,还可以在样品测定时经常用乙腈或纯甲醇对色谱柱进展冲洗,以除去弱极性物质,保证样品的重现