体内药物分析复习资料

1、1简述体内药物分析方法建立的一般步骤。确定合适的分析方法f纯品试验f空白溶剂试验f 空白生物基质试验f模拟生物基质试验f实验 生物样品的测定(预处理f分离分析f数据处理)3为什么进行生物样本预处理？使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总浓度；生物样品介质组成复杂，干扰多，而药物组分是微量的，必须先经过预处理，使纯化富集；为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度；为了防止分析仪器的污染、劣化，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性等。4影响血药浓度的因素。机体因素：包括生理、病理、遗传因素药物因素：包括剂型因素、药物相互作用其他因素：大气污染、食品、烟、酒、茶等5体内药物分析的特点。干扰杂

2、质多(2)被测浓度低(3)供试样品量少(4)待测物的易变性(5)要求较快提供结果(6) 要有一定的仪器设备(7)工作量大6请简述液液萃取法、蛋白沉淀法和固相萃取法的优缺点。( 1 )液液萃取法： 优点：有选择性 缺点：存在乳化现象( 2)蛋白沉淀法： 优点：快速简便 缺点：待测物含量低时，不适用。(3)固相萃取法：优点：引入干扰物质少 完全避免乳化的形成 在优化条件下，有较高的萃取率 可以 用少量的样品 柱子可弃，无污染 使用的溶剂大多可以与水混合 易于自动化。缺点：价格昂贵 技术要求高 批与批之间有差异 柱子易阻塞，影响分离效果 样品 需要经过预处理液液提取法的原理、影响因素及提取技术。原理

3、：药物与干扰成分在互不相容的两相溶剂中的分配系数不同，选择性地提取生物基质中的药物。 影响因素：水相pH。提取溶剂种类、离子强度。提取技术：通常在戴塞的试管中进行，多半进行一次提取，用酸碱回提时也只是一次，不考虑提取 尽药物。液固提取法的原理，固相萃取的主要步骤，及固相萃取的影响因素。原理：将样品液通过合适的固相小柱，利用药物与杂质对固相小柱亲和力的差别，用适当溶剂冲洗、 洗脱，使药物得到净化。步骤：(1)固相柱选择(2)固相柱处理(3)样品液上样(4)分离净化(5)待测物洗脱。 提取率、选择性的影响因素：(1)流速(2)样品装载量(3)固相柱使用要求(4)样品上柱前的处理。8 生物样品分析中

4、，常用的分析方法及其适用测定对象。色谱分析法，对象：蛋白质，多肽等生物大分子类药物或内源性物质的检测与分析免疫分析法，对象：应用于临床TDM及生物大分子类物质的药物动力学及其相关研究生物学方法，对像：用于抗生素类药物的体内分析需要进行哪些稳定性试验？短期室温稳定性 长期储存稳定性 冻融稳定性 储备液稳定性 待测溶液稳定性 样品处理 过程稳定性生物样品制备时应考虑哪些问题？（1）药物的理化性质和存在形式 （2）待测药物的浓度范围 （3）药物测定的目的 （4）选用 的生物样品类型 （5）样品预处理与分析技术的关系12 生物样品选择的基本原则，常用的生物样品及其应用特点。选择原则：必须能反映浓度与药

5、效的关系易于获得便于处理根据不同目的要求选取 常用生物样品及应用特点：血液 优点：较好体现药物浓度与治疗的关系 缺点：（1）损伤性取样，取样量有限制（2）需要专业人员操作尿液 优点：（1）非损伤性取样（2）药物浓度高（3）收集方便 缺点：（1）浓度变化大、与血药浓度相关性差（2）不易采集、保存（3）肾功不全、婴儿不宜用唾液 优点：（1）非损伤性取样（2）含蛋白浓度低，易处理（3） CS/Cp较恒定时，可代替血样进行TDM 及药物动力学研究缺点：（1）适用药少（2）取样量变化大毛发 优点：（1）取样方便，可重复取样（2）通过测某特定代谢物区别滥用药、临床药（3）可获得长 期用药信息缺点：（1）预

6、处理繁杂，干扰多（2）分析对象含量低，需精密仪器体内药物分析方法的建立时需要通过哪些实验对色谱条件进行优化？在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如 下：（1）空白溶剂试验 溶剂（方法特异性）（2）空白生物基质试验 （方法特异性）（3）质控样品实验 方法效能指标（4）实际生物样品测试 代谢产物（方法特异性）体内药物分析方法验证的内容。效能指标（1）特异性（专属性） 避免干扰（2）标准曲线（3）线性范围覆盖所有浓度范围（4）准确度一与实际状况相符（5）精密度一结果可重现（6）定量限一LLOQ和ULOQ 样品（1）稳定性确保所有样品准确测定（2）提取回

7、收率确保准确度生物样品的预处理技术有哪些？A:有机破坏法B:除蛋白法C:分离、纯化与浓集D:缀合物水解E:化学衍生化法1试简述常见的生物种类及其制备、贮存的方法。答：种类及其制备：(1)血液：血清样品：室温下放置至少30min到lh,待凝结出血饼后，用细竹捧或玻璃棒轻轻 地剥去血饼，以25003000rpm离心5min使与血细胞分离，分取上清液即得；血浆样品：置含有抗凝剂 的试管中，混合，以25003000rpm离心5m in使与血细胞分离，分取上清液即得；全血样品：置含有抗 凝剂的试管中混合，不离心。尿液：测定一定时间内(如8h、12h或24h等)尿液中药物的总量将排泄的尿液全部储在起来，并

8、 记录其体积，取其一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。尿液采集后需立即测定或加入适 当的防腐剂保存。唾液：测量体积，静置分层后离心(3000rpm,5min)，取上清。放置后分为泡沫部分、透明部分、 灰乳白色沉淀部分。组织：先将组织均匀化，脏器组织用生理盐水清洗后，滤纸吸干表面水分，称重，加入一定量 的水或生理盐水等，在匀浆机中匀浆，使被测药物溶解，之后可直接可取上清液，或用加入蛋白沉淀剂， 加入一定量酸或碱，酶解法等方法萃取。毛发：清洗，反复清洗23次，再有机破坏，最后提取(甲醇、酸碱液、酶解)。贮存：冰冻(短期保存：可置4C冰箱中冷藏；长期保存：需置-20C或更低温度冰柜中冷冻；

9、临时来 不及处理：先置冰屑或冰块中，然后再进行冷冻贮存；小体积分装贮存)。去活性：加防腐剂，改变生物样品pH。2 简要说明直接沉淀法、液液萃取法、固相萃取法3种生物样品预处理技术的操作步骤、注意事项，并 比较三者。答：(1)直接沉淀法:将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清夜进样。注意沉淀剂 体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响(氧化、对酸不稳定)。液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋,离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。 注意水相pH值，提取溶剂选择，有机相和水相的体积。固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸 附”或“分配”或“离子交换”或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗除杂质， 再用适当溶剂洗脱药物。注意流速，装样量，缓冲液pH及用量。比较：直接沉淀法：待测物浓度较高，特异性和灵敏度达到检测要求时可用。直接沉淀法可使 结合型的药物释放出来，操作简单，但缺点在于容易发生乳化现象。液液萃取法：有选择性，基于其提 取溶剂的性质，能