高通量测序技术平台流程与应用

1、 Illumina Genome Analyzer系统应用方向DNA Fragment文库测序DNA Mate-pair文库测序Small RNA测序数字化表示谱测序转录组测序DNA甲基化测序ChIP-seqMeta-Genomics DNA测序血浆微量DNA测序高通量测序技术平台流程与应用第1页基因组DNA随机打断DNA片段末端修复将A碱基加入到DNA片段3末端在DNA片段末端加上特定接头PCR扩增连上接头DNA片段文库检测DNA在Cluster Station成簇扩增IlluminaGenome Analyzer上测序生物信息组装/分析 Illumina DNA Fragment文库测序流

2、程 高通量测序技术平台流程与应用第2页 Illumina Mate-pair文库测序流程 基因组DNA随机打断特定大小片段（2-10kb范围可选）末端修复生物素标识环化取得来自大片段两端共计400-600 bpDNA片段修饰、加接头PCR扩增连上接头DNA片段文库检测DNA在Cluster Station上成簇扩增Illumina Genome Analyzer上测序生物信息组装/分析高通量测序技术平台流程与应用第3页 Illumina Small RNA测序流程 从总 RNA中分离 small RNA5接头连接和纯化3接头连接纯化RT-PCR扩增Small RNA文库纯化文库检测DNA在Cl

3、uster Station成簇扩增Illumina Genome Analyzer上测序生物信息学分析高通量测序技术平台流程与应用第4页 Illumina 数字化表示谱测序流程 mRNA分离和cDNA第一链合成cDNA第二链合成限制性内切酶NlaIII酶切连接GEX NlaIII Adapter 1限制性内切酶 MmeI 酶切连接GEX Adapter 2Adapter连接cDNA产物和PCR富集文库检测DNA在Cluster Station上成簇扩增IlluminaGenome Analyzer上测序生物信息学分析高通量测序技术平台流程与应用第5页Total RNADNase I 酶消化mR

4、NA 分离和随机打断cDNA第一链和第二链合成DNA片段末端修复将“A”碱基加入到DNA片段3末端在DNA片段末端加上特定接头PCR扩增连上接头DNA片段文库检测DNA在Cluster Station上成簇扩增IlluminaGenome Analyzer上测序生物信息学分析 Illumina 转录组测序流程 高通量测序技术平台流程与应用第6页基因组DNA随机打断DNA片段末端修复将 A 碱基加入到 DNA片段3末端DNA片段末端加上尤其处理甲基化接头重亚硫酸盐处理去盐处理PCR扩增连上接头DNA片段文库检测DNA 在Cluster Station上成簇扩增Illumina Genome An

5、alyzer上测序生物信息学分析 Illumina DNA甲基化测序流程 高通量测序技术平台流程与应用第7页染色质免疫共沉淀目标DNA片段DNA片段末端修复将 A 碱基加入到 DNA片段3末端DNA片段末端加上接头PCR扩增加上接头DNA片段文库检测DNA在Cluster Station成簇扩增Illumina Genome Analyzer上测序生物信息学分析 Illumina ChIP-seq测序流程 高通量测序技术平台流程与应用第8页Meta基因组提取DNA随机打断DNA片段末端修复将A碱基加入到DNA片段3末端在DNA片段末端加上接头纯化连接产物PCR扩增连上接头DNA片段文库检测DNA在Cluster Station成簇扩增Illumina Genome Analyzer上测序生物信息组装/分析 Illumina Meta-Genomics DNA测序流程 高通量测序技术平台流程与应用第9页搜集10-15ml孕妇外周血提取血浆中游离DNAQ-PCR定量总DNA含量构建DNA文库Agilent和Q-PCR检测文库浓度Cluster制备和Genome Analyzer上测序Pipeline 和Eland分析计算每