食品中氨基甲酸乙酯的测定（食品安全国家标准）

1、 GB 5009.272011中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准食品中氨基甲酸乙酯的测定范围 本标准规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的气相色谱质谱法测定。 本标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的测定。原理 试样加D5-氨基甲酸乙酯内标后，经过碱性硅藻土固相萃取柱净化、洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱质谱仪进行测定，内标法定量。试剂和材料注：除非另有说明，所有试剂均为分析纯。试剂无水硫酸钠。 氯化钠。 正己烷：色谱纯。 乙酸乙酯：色谱纯。 乙醚：色谱纯。 甲醇：色谱纯。3.1.7 碱性硅藻土固相萃取柱：4000 mg、12mL。试剂配制3

2、.2.1无水硫酸钠：450烘烤4 h，冷却后贮于干燥器中备用。3.2.2 5%乙酸乙酯/乙醚溶液:取5 mL乙酸乙酯，用乙醚定容到100 mL，混匀待用。标准品3.3.1 氨基甲酸乙酯标准品（C3H7O2N）：纯度大于99.0。3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯标准品。标准溶液配制3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯贮备液（1.0 mg/mL）：准确称取0.01g （精确到0.0001 g）D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL，4保存。3.4.2 2.0 g/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL，4保存。

3、3.4.3 1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.05 g（精确到0.0001 g）氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL， 4保存。 3.4.4 10.0 g/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯标准贮备液1.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4保存。3.4.5 0.5 g/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取10.0 g/mL氨基甲酸乙酯中间液5.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4保存。3.4.6 标准曲线工作溶液：分别准确吸取0.5 g/mL氨基甲酸乙酯中间液20 L、50 L、100 L、200 L、400 L 和10.0 g/mL氨基甲酸乙

4、酯标准中间液40 L、100 L于7个1 mL容量瓶中，各加100 L 2.0 g/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至刻度，得到10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL的标准曲线工作液，现配现用。仪器和设备气相色谱质谱仪，带EI源。漩涡混匀器。氮吹仪。固相萃取装置，配真空泵。超声波清洗机。天平：感量为0.1 mg和0.01g。分析步骤试样制备称取2 g（准确到0.01g）试样（啤酒超声5min 脱气后称量），加100 L 2.0 g/mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用

5、液、氯化钠0.3 g（酱油不加氯化钠），超声溶解、混匀，然后加样到碱性硅藻土固相萃取柱上，抽真空让试样慢慢渗入到固相萃取柱中，然后静置约10 min。先用10 mL正己烷淋洗，然后用10 mL5%乙酸乙酯/乙醚溶液以约1 mL/min流速洗脱，并收集于10 mL具塞刻度试管中，洗脱液经过2.0g无水硫酸钠脱水后，在室温下用氮气缓缓吹至0.5 mL左右，最后用甲醇定容至1.0 mL制成测定液供GC/MS分析。 仪器参考条件气相色谱质谱仪分析参考条件：DB-INNOWAX毛细管色谱柱：30 m0.25 mm（内径）0.25 m（膜厚）或相当色谱柱；进样口温度：220 ；柱温：初温50 ，保持1 m

6、in，然后以8 /min升至180 ，程序运行完成后，240 后运行5min；载气：氦气，纯度99.999，流速1 mL/min；电离模式：电子轰击源（EI），能量为70 eV；四级杆温度:150；离子源温度：230 ；传输线温度：250 ；溶剂延迟：11min； 进样方式：不分流进样；进样量：1-2 L；检测方式：选择离子扫描（SIM）采集；氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）：44、 62、74、89；定量离子62；D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64。 标准曲线的制作将氨基甲酸乙酯标准使用液10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100

7、.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）进行气相色谱质谱仪测定，以氨基甲酸乙酯浓度为横坐标，标准溶液中氨基甲酸乙酯峰面积与内标D5-氨基甲酸乙酯的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。试样测定将试样溶液同标准溶液进行测定，根据测定液中氨基甲酸乙酯的含量计算试样中氨基甲酸乙酯的含量。试样含低浓度的氨基甲酸乙酯宜采用10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL的标准使用液绘制标准曲线；试样含高浓度氨基甲酸乙酯宜采用50.0 ng/mL、1

8、00.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL的标准曲线。 分析结果的表述试样中氨基甲酸乙酯含量按式（1）计算 （1）式中：X样品中氨基甲酸乙酯含量，单位为微克每千克（g/kg）；C测定液中氨基甲酸乙酯的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；M样品质量，单位为克（g）；V样品的定容体积，单位为毫升（mL）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，保留3位有效数字（或小数点后1位）。精密度在重复性条件下获得的两次独立测XX果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。其他当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0 g/k

9、g，定量限为5.0 g/kg。附录A为标准溶液质谱图，其中图A.1为氨基甲酸乙酯及内标总离子图；图A.2为氨基甲酸乙酯质谱图；图A.3 D5-氨基甲酸乙酯质谱图。附录A标准溶液质谱图图A.1给出了氨基甲酸乙酯及内标总离子图12.3012.4012.5012.6012.7012.8012.9013.0013.1013.2013.3013.4013.5013.601000002000003000004000005000006000007000008000009000001000000Time-Abundance 13.09 13.16氨基甲酸乙酯D5-氨基甲酸乙酯图A.1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图图A.2给出了氨基甲酸乙酯质谱图3035404550556065707580859095020000040000060000080000010000001200000140000016000001800000200000022000002400000m/z-Abundance624474897141555947958185679977519238图A.2 氨基甲酸乙酯质谱图图A.3给出了D5-氨基甲酸乙酯质谱图40506070809010011012013014005