土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖

1、课题2土壤中分解尿素细菌分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第1页土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第2页【自主预习】一、研究培养基对微生物选择作用1.筛选菌株：(1)自然界中目标菌株筛选。原理：依据目标菌对_要求，到对应环境中去寻找。生存环境土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第3页实例：能产生耐高温TaqDNA聚合酶_就是从热泉中筛选出来。(2)试验室中目标菌株筛选。原理：人为提供有利于_生长条件(包含营养、温度、pH等)，同时_其它微生物生长。实例：从土壤中筛选能分解尿素细菌。方法：利用_培养基进行微生物筛选。Taq细菌目菌株抑制或阻止选择土壤中

2、分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第4页2.选择培养基：(1)概念：允许_种类微生物生长，同时_其它种类微生物生长培养基。(2)举例：筛选土壤中分解尿素细菌选择培养基特点是以_为唯一氮源，按物理性质归类为固体培养基。特定抑制或阻止尿素土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第5页二、进行微生物数量测定1.统计菌落数目：(1)方法：_法和_法。活菌计数显微镜直接计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第6页(2)活菌计数法。方法：_法。原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于_。通过统计平板上_，就能推测出样品中大约含有多少活菌。稀释涂布平板样品稀释液中一

3、个活菌菌落数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第7页活菌计数标准：在同一稀释度下涂布3个平板，并选择菌落数在_平板进行计数。样品中活菌数计算公式：每克样品中菌株数=_其中，C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL)，M代表稀释倍数。30300(CV)M土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第8页2.增加试验说服力办法：方法设置重复设置对照方法培养过程中设置重复组，同一稀释度下应涂布_个平板，才能增加试验说服力与准确性设置空白对照，观察培养物中是否有杂菌污染；设置完全培养基，观察选择培养基是否含有选择作用意义排除偶然性原因对试验结果影响排除

4、试验组中_对试验结果影响，提升试验结果可信度3非测试因素土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第9页3.试验操作流程：无菌水涂布平板土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第10页4.试验操作注意事项：(1)土壤取样。土壤取样时普通要铲去表层土，因为细菌适宜在_潮湿土壤中生长。取样时用铲子和盛土样信封在使用前都需要_。取样时选择富含_土壤。酸碱度靠近中性灭菌有机质土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第11页(2)样品稀释。称取土壤要在火焰旁，并在火焰附近将称好土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。稀释土壤溶液过程，每一步都要在_旁操作。火焰土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课

5、一等奖第12页筛选微生物种类不一样，样品稀释度也不一样。如：筛选微生物种类稀释倍数细菌_放线菌_真菌_104、105、106103、104、105102、103、104土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第13页(3)微生物培养与观察。连线：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第14页观察指标：观察菌落_、大小、隆起程度和_等方面。(4)菌种判定。原理：细菌合成_能够将尿素分解成氨，使培养基中pH_。方法：加入_，假如指示剂变红，则可以初步判定该细菌为尿素分解菌。形状颜色脲酶升高酚红指示剂土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第15页【判断正误】1.只要培养基中有尿

6、素即可筛选出分解尿素细菌。( )【分析】只有以尿素为唯一氮源培养基，才能筛选出分解尿素细菌。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第16页2.选择培养基筛选出微生物只有一个。( )【分析】只要能利用选择培养基中特定营养物质微生物都可在培养基上生长，从而被一同选出。3.对照试验能够提升试验结果可信度。( )【分析】设置对照能排除试验组中非测试原因对试验结果影响，使试验结果愈加可信。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第17页4.统计样品中活菌数目普通使用平板划线法。( )【分析】使用平板划线法能分离微生物，但不能对微生物进行计数。5.显微镜直接计数法统计都是活菌。( )【分析】

7、显微镜直接计数法统计是活菌和死菌。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第18页6.土壤中微生物大多生活在富含有机质土壤表层。( )【分析】土壤是微生物天然培养基，在富含有机质土壤表层，有更多微生物生长。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第19页7.土壤样品稀释时不一样微生物应该选择不一样稀释度。( )【分析】土壤中不一样微生物数量不一样，应该选择不同、适当稀释度，以得到菌落数在30300平板。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第20页8.伊红美蓝培养基可用来判定大肠杆菌。( )【分析】大肠杆菌在伊红美蓝培养基上菌落展现黑色，能够此来判定大肠杆菌。土壤中分解尿素

8、的细菌的分离与计数省公开课一等奖第21页主题1研究培养基对微生物选择作用【互动探究】1.筛选分解尿素细菌选择培养基：教材P22左上方侧栏是本课题使用培养基配方，请分析：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第22页(1)在培养基配方中，为微生物生长提供碳源和氮源分别是什么物质？提醒：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第23页(2)分离分解尿素细菌选择培养基是怎样进行选择？提醒：该选择培养基配方中，尿素是培养基中唯一氮源，所以，只有能够利用尿素微生物才能够生长。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第24页(3)为何只有能分解尿素微生物才能在

9、该培养基上生长？提醒：分解尿素微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物提供氮源。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第25页2.设计对照试验：(1)怎样验证该选择培养基确实筛选到了能分解尿素细菌？提醒：增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板操作，假如牛肉膏蛋白胨培养基上菌落数显著多于选择培养基上菌落数，则说明选择培养基确实起到了筛选能分解尿素细菌作用。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第26页(2)怎样验证所用选择培养基没有受到污染？提醒：设置一个未涂布平板能筛选分解尿素细菌选择培养基。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第27页【探究总结】1.

10、培养基中有没有杂菌污染判断方法：(1)若对照培养皿中无菌落生长，说明未被杂菌污染。(2)若培养基中菌落数偏高，说明被杂菌污染。(3)若菌落形态多样，菌落数偏高，说明培养基中混入其它杂菌。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第28页2.选择培养基筛选作用：若牛肉膏蛋白胨培养基上菌落数目大于选择培养基上数目，说明选择培养基含有筛选作用。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第29页主题2进行微生物数量测定【互动探究】1.统计菌落数目：甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数。在对应稀释倍数为106培养基中，得到以下两种统计结果。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开

11、课一等奖第30页(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计菌落数为230，该同学统计结果是否真实可靠？为何？提醒：不真实。为增加试验说服力与准确性，应设置重复试验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果后计算平均值。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第31页(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对试验结果处理是否合理？为何？提醒：不合理。微生物计数时，假如试验中出现重复试验结果不一致情况，应分析试验过程中可能影响原因，找出差异原因，需重新试验，而不能简单地舍弃后进行计数。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开

12、课一等奖第32页(3)某同学在三种稀释度下吸收0.1 mL菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下数据，试计算1 g样品活菌数。平板稀释度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第33页提醒：105稀释度下取0.1 mL涂布三个平板上菌落数在30300，计算其平均值为(212+234+287)/3244。深入能够换算出1 g样品中活菌数为(2440.1)105=2.44108。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第34页(4)统计菌落数比活菌实际数目低，原因是_。当两个或多个细胞在一起时，平板上观察

13、到只是一个菌落土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第35页2.对照试验设计分析：分析“设置对照”中实例，探讨以下问题：(1)在A同学确定自己操作无误情况下，A同学得出菌落数多于其它同学原因可能有哪些？提醒：可能是他选择土壤样品不一样于其它同学；可能是培养基受到了污染。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第36页(2)怎样设计对照试验帮助A同学排除上述两个可能影响试验结果原因：提醒：其它同学取与A同学一样土壤进行试验，假如统计结果与A同学一致，则能够确定是土壤样品不一样于其它同学；将A同学配制培养基在不加土样情况下培养作为空白对照，以判断培养基是否受到污染。土壤中分解尿素的细

14、菌的分离与计数省公开课一等奖第37页3.微生物数量测定试验设计：(1)分离不一样微生物要采取不一样稀释度，原因是：_。土壤中各种微生物数量是不一样，为取得不一样类型微生物，就需要按不一样稀释度进行分离土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第38页(2)怎样依据结果判断样品稀释操作是否成功？提醒：若得到了2个或2个以上菌落数目在30300平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计数。(3)本试验中应怎样统计培养基上生长菌落数？提醒：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时统计作为结果。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第39页【探究总结】稀释涂布平板法三个易错提醒

15、(1)稀释涂布平板法所选择倒平板稀释度很主要，普通以3个稀释度中第二个稀释度倒平板所出现平均菌落数在50个左右最好。(2)在设计试验时，一定要涂布最少3个平板作为重复组。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第40页(3)在分析结果时，一定要考虑所设置重复组结果是否一致，假如差异过大，则意味着操作有误，需要重新试验。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第41页二者比较以下:内容直接计数法间接计数法主要用具显微镜、细菌计数板培养基计数依据菌株本身培养基上菌落数优点计数方便、操作简单计数是活菌土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第42页内容直接计数法间接计数法缺点死菌、

16、活菌都计算在内操作较复杂,且有一定误差计算公式每毫升原液含菌株数=4001 000每小格平均菌株数稀释倍数每毫升原液含菌株数= 稀释倍数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第43页2.试验结果分析:内容现象结论有没有杂菌污染判断对照培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养基中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样,菌落数偏高培养基中混入其它杂菌选择培养基筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上菌落数目大于选择培养基上数目选择培养基含有筛选作用土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第44页内容现象结论样品稀释操作得到3个或3个以上菌落数目在30300平板操作成功重复组结果若选取同一个土样,统计结果应靠近土壤中分解尿素的细菌的分离与计数省公开课一等奖第45页2(全国卷)一些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答以下问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素细菌不能以尿素分解产物CO2作为碳源，原因是_，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内葡萄糖主要作用是_ (答出两点即可)。脲酶分解尿素细菌是异养生物，不能利用CO2合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其它