脑立体定位技术

1、大鼠PP-DG诱发电位的测定及定位技术目标理解诱发电位的产生机制掌握测量诱发电位的分析统计诱发电位的记录系统刺激器参数的调节POWERLAB系统Scope软件操作NS系统LTP记录系统2诱发电位 群体峰电位幅度 PSA 潜伏期 PSL1 PSL2 斜率EPSP测量方法3电损毁技术+动脉灌流及冰冻切片染色技术胡学军电损毁电流在脑组织中扩散范围公式：X=y/k 2 (x:mm y:A k:1000)通电流100 A ，则x=0.3mm经验：用直流电15mA 1020秒可在脑内产生直径约1mm大小的凝固点阳极电损毁法： 阳极接电极，阴极接伤口或肛门 电极尖端去绝缘部位1mm5化学标记目的：实验结束后

2、的一项常规工作，配合定位技术的补充在进行慢性埋植电极技术中开始时候带有盲插性，必须对记录电极和刺激电极的位置进行组织学鉴定以排除那些记录部位和刺激部位不准确的实验数据。标记方法： 膀胺天蓝、普鲁士蓝法、卡红染色法等6材料大鼠 小鼠 鸟灌流装置：注射器 胶管 手术器械麻醉药 戊巴比妥钠电损毁仪 显微拍照仪冰冻切片机 包埋法灌流液 0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾+4%甲醛（或10%）硫酸亚铁7方法1电损毁（活体下进行、麻醉）颈外静脉放血、颈总动脉注入固定24小时冲掉固定液酒精脱水二甲苯透明包埋石蜡切片5微米厚60度烘干后进行卡红染色8卡红染色看相关资料9Prussian blue普鲁士蓝定位法

3、通直流时，若不锈钢一极接阳极，不锈钢针的Fe 3+脱离电极尖沉积在组织内与组织液的Cl-结合形成氯化高铁FeCl3，当它遇到亚铁氰化钾时产生普鲁士蓝.(黄血盐法)10普鲁士蓝资料成分：氰化铁合亚铁，不溶于水，难褪色，最初由德国人发明因此叫普鲁士蓝！普鲁士蓝KFe(CN)6Fe (表示Fe2+,表示Fe3+) 普鲁士蓝是一种无毒色素，铊可置换普鲁士蓝上的钾后形成不溶性物质随粪便排出，对治疗经口急慢性铊中毒有一定疗效。用量一般为每日250 mgkg，分4次，溶于50 ml 15甘露醇中口服。适量补充氯化钾 高钾能增加肾对铊的清除，可能与钾竞争性阻断肾小管对铊的吸收有关，同时钾可动员细胞内的铊到细胞

4、外，使血铊含量增加，可使临床病情加重，因此要慎用。11普鲁士兰：Fe3Fe(CN)62或KFeFe(CN)6滕士兰：Fe4Fe(CN)63或KFeFe(CN)6从后一种化学式可以看出其实普鲁士兰和滕士兰是同一种物质（因为两者的结构是一致的）普鲁士蓝是蓝图印刷中使用的颜料，由K3Fe(CN)6与二价铁反应制得。组织学上用普鲁士蓝来检测生物组织中的二价铁离子，酸性溶液中反应不溶的蓝色颜料，被称为滕氏蓝。检测三价铁离子时使用的则是亚铁氰化钾，也生成不溶的蓝色颜料，称为普鲁士蓝。研究表明滕氏蓝与普鲁士蓝是同一物质，颜色略有不同是因为制备方法等的不同而导致的。12滕氏蓝法（Turnbull blue赤血

5、盐法 )3 Fe 2+ + 2 Fe(CN)63- = Fe3Fe(CN)62滕氏蓝 0.9%NaCl150ml +硫酸亚铁+等量10%福尔马林 进行灌流6-8小时玻璃微电极法：用负极释放Fe(CN)63- ，颈部肌肉接正极，通电20-50mA 4060秒断头取下10%福尔马林 固定1周，取脑再固定至少2周后进行切片。13金属电极法： 用0.9%NaCl+1%亚铁氰化钾+4%甲醛（或10%）灌流，金属电极接正极。14急性定位实验步骤埋植手术封固电损毁灌流电损毁断头取脑置放再1%亚铁氰化钾+10%福尔马林固定1周10%福尔马林固定切片拍照15脑立体定位技术Stereotaxic technique of brain定位在动物实验中，把细微的电极或导管定向插入到脑内某个特定区域或核团，用于刺激或记录细胞放电，进行微量注射及推挽灌流等项实验时必不可少的步骤。是整个实验成功与否的关键第一步。17定向技术读懂脑立体定位图谱和参数学会使用脑立体定位仪（江湾I型 C立体定位仪）实验动物头颅骨特点电极制作慢性埋植电极技术动脉灌流及固定冰冻切片染色技术电损