DB11-T379-2006豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定

1、DBICS 67.080.20DBB 31备案号：19170-2006京市地方标准DB11/T 37920064-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定Determination of 4-chlorphenoxyacetic sodium, 6-benzylaminopurine, 2,4-D,gibberellicacidandthiramresiduesinsoybeansproutandmung beansprout2006-07-25发布2006-09-01实施北京市质量技术监督局 发布DB11/T 3792006目次 HYPERLINK l _bookmar

2、k0 前言II HYPERLINK l _bookmark1 范围1 HYPERLINK l _bookmark1 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定1 HYPERLINK l _bookmark2 6-苄基腺嘌呤残留量的测定3 HYPERLINK l _bookmark3 2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定5 HYPERLINK l _bookmark4 赤霉素残留量的测定7 HYPERLINK l _bookmark5 福美双残留量的测定9IDB11/T 3792006前言本标准由通州区质量技术监督局提出。本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）

3、。本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。IIDB11/T 3792006豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定范围本标准规定了豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定方法。本标准适用于豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的残留量分析。4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定原理4-4-积定量。试剂与材料221222223224225226227mL。228氢氧化钠（AR）。盐酸（AR）。磷酸（AR）。 冰醋酸（AR）甲醇（HPLC）氢氧化钠溶液（0.01 mol/L）：称取 0.

4、40 g 氢氧化钠，溶于水并稀释至 1000 mL。10.6g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O10022.0g乙酸锌Zn(CH3COO)23mL冰醋酸并加水稀释至 100 mL。磷酸盐缓冲液（0.01 mol/L）：称取 1.56 g的磷酸二氢钠（NaH2PO42H2O）加水溶解，并定容至 1000 mL，用 50 %的磷酸溶液调节pH值至 4.0。4-4-氯苯氧乙酸（含量99%）0.1g(0.0001g)，用100 mL1.00 mg 4-氯苯氧乙酸。临用0.10 mg 4-氯苯氧乙酸。固相萃取小柱（3mL/500mg）：ODS-C18 10mL10mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态

5、待用。本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。仪器与设备高效液相色谱仪（带紫外检测器，配ZORBAXSB C18色谱柱）。超声波仪。酸度计。组织捣碎机。Milli-Q分析步骤试样制备称取捣碎混匀的豆芽样品20g（精确至0.1g）于100mL容量瓶中，加入40ml氢氧化钠溶液振摇， 然后分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5mL，混匀，超声提取30min，用氢氧化钠溶液稀释至1DB11/T 3792006刻度，过滤。取50.0mL的滤液，用浓磷酸调pH至2.5，然后以3mL/min的流速通过活化的ODS-C18小柱。先用3.0mL3.00.45m标准曲线的制备准确吸取每毫升相当于0.10 mg的

6、4-氯苯氧乙酸0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL 于100mL0.20mg/L0.50mg/L1.00mg/L2.00mg/L、4.00 mg/L的标准使用液，供液相色谱分析。色谱条件XB1846 m20 mm5 （。检测波长：228nm。流动相：甲醇+0.01mol/L（50+50）(V/V)流速：1.0mL/min。柱温：30 。测定10.0L2.4.312。计算（1）计算。X A f10001.12（1）m 1000式中：； A4-氯苯氧乙酸的质量，单位为微克 f试样的稀释倍数；m（g；1.124-氯苯氧乙酸转换为 4-氯苯氧乙酸钠的系数。计算

7、结果保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。检测限在本试验条件下，豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的定量检测限为0.10 mg/kg。图14氯苯氧乙酸标样色谱图2DB11/T 3792006图2豆芽样品中4氯苯氧乙酸色谱图6-苄基腺嘌呤残留量的测定原理6-峰面积定量。试剂与材料乙酸（AR)。1%乙腈（HPLC）。甲醇（HPLC）。100 mL（60+40）(V/V)50L，混匀。6-6-0.1 g（0.0001 g）（含量99.0%）100 mL1.00 mg 6-苄基腺嘌呤。临用时0.010 mg 6-苄基腺嘌呤。固相萃取小柱（3mL/500

8、 mg）：ODS-C18 10mL10 mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。仪器与设备高效液相色谱仪（带紫外检测器，配ZORBAXSB C18色谱柱）。Ultra-Turrax离心机（4500 r/min）。旋转蒸发仪。组织捣碎机。Milli-Q分析步骤试样制备称取捣碎混匀的豆芽样品 10 g（精确至 0.1 g）于 50 mL聚丙烯离心管中，加入 15 mL酸化甲醇溶液，用Ultra-Turrax3min,4500r/min10min，100mL梨形瓶中，15mL酸化甲醇溶液提取，再次离心，合并上清液。上清液用旋转蒸发仪蒸发，以去除甲醇，剩余水

9、相以 3 mL/min的流速通过活化的ODS-C18小柱，先用 3.0 mL水洗去水溶性杂质后，再用甲醇洗脱并定容至 5.0 mL，过 0.2m 有机膜滤过后，供液相色谱分析。标准溶液系列的配制准确吸取每毫升相当于 0.010 mg 的 6-苄基腺嘌呤 0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、3DB11/T 37920062.0 mL5.0 mL 25mL 0 mg/L 0.08 mg/L0.16 mg/L、0.32 mg/L、0.40 mg/L、0.80 mg/L、2.00 mg/L 的标准溶液系列，供液相色谱分析。色谱条件X B C柱（46 250 5 （或

10、相当型号色谱柱。检测波长：267 nm。流动相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液（60+5+35）(V/V)。流速：1.0 mL/min。柱温：30 。测定10.0 L3.4.334。计算（2）计算。X Af 1000（2）m 1000式中：；A6- f试样的稀释倍数；m计算结果保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。检测限4.161在本试验条件下，豆芽中 6-苄基腺嘌呤的定量检测限为 0.02 mg/kg。4.161mAU606-benzylaminopurine50mAU606-benzylaminopurine5040302010001

11、234567m4mAU140120100806040mAU14012010080604020001234567m6-benzylaminopurine图4豆芽样品中6苄基腺嘌呤色谱图2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定原理2,4-2,4-2,4-凝胶渗透色谱净化除去干扰物质，以气相色谱电子捕获检测器测定。根据色谱峰保留时间定性，外标法峰面积定量。试剂与材料（AR）。（AR）。正己烷（AR）。环己烷（AR）。乙酸乙酯（AR）。pH250pH2。氯化钠（AR）。50g/L无水硫酸钠：6504 h三氟化硼乙醚溶液：47 (V/V)。衍生剂(1429.5mL100mL。2,4-1mL2,4-

12、滴的甲醇标准溶液（100g/L），用甲醇溶解并定容至 100 mL。此溶液浓度为每毫升相当于 1.00g 2,4-滴。本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。仪器与设备气相色谱仪：配有电子捕获检测器。凝胶渗透色谱净化系统。组织捣碎机。恒温水浴锅。旋转蒸发器。电动振荡器。20 mL（或密封紧密的密封瓶）。分析步骤提取称取捣碎混匀的豆芽样品 50.0 g（精确到 0.1 g）于具塞锥形瓶内，加入 20 mL 酸性水溶液和 505DB11/T 3792006mL30 min，20 mL250 mL15 g40 min5mL20 mL衍生化5mL6545min10mL 50g/L50mL5mL，乙酸乙酯

13、:环己烷（1:1，V/V）10mL。2,4-滴甲酯标准工作液的制备5mL2,4-4.4.22,4-5mL1.00g 2,4-滴。凝胶渗透色谱净化选择凝胶渗透色谱柱规格（200 mm22 mm i.d.），Bio Beads S-X3 200-4004.7 mL/min，5 mL，11 min15 min。衍生化后样品按照上述条件净化，将约 20 mL 收集液旋转蒸发至近干，用正己烷准确定容至 5 mL。气相色谱条件气相色谱仪：附电子捕获检测器（ECDN63。色谱柱：HP-1MS 石英毛细管色谱柱，30 m250 m0.25 mm 。载气: 高纯氮,纯度99.99。载气流速：1.0 mL/min

14、。进样方式：不分流。程序升温：柱初始温度 50 ，保持 1 min，以 25 /min 速率升温至 220 ，保持 20 min。进样口温度: 250 。检测器温度: 300 。测定2,4-1.0L4.4.5 的条件进行56。计算（3）计算。X A C V 21000（3）A0 m 1000式中:X 2,4-滴残留量,单位为毫克每千克（mg/kg）； A 样液中 2,4-滴(衍生物)峰面积；A0 标准工作溶液中 2,4-滴(衍生物)峰面积；C 标准工作溶液中相当于 2,4-滴(衍生物)浓度,单位为微克每毫升（g/mL）； m 取样量，单位为克（g）；V 样液的定容体积，单位为毫升（mL）。精密

15、度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10。检测限6DB11/T 3792006在本试验条件下，豆芽中 2,4-滴的定量检测限为 0.002 mg/kg。1溶剂峰22,4-滴峰3未知峰图52,4-滴标样色谱图1溶剂峰22,4-滴峰3未知峰图6豆芽样品中2,4-滴色谱图赤霉素残留量的测定原理豆芽中赤霉素经提取后，先经乙酸乙酯液液萃取初步净化，再利用凝胶渗透色谱（GPC）化合物与基体干扰物分离，达到分离和净化的目的。用反相高效液相色谱法DAD峰面积计算定量。试剂与材料（AR）。（AR）。乙酸乙酯（AR）。50硫酸溶液(V/V)。pH2.550pH2.5。7DB11/

16、T 3792006无水硫酸钠（AR）。冰乙酸（AR）。10mL10mL保持萃取柱润湿状态待用。赤霉素标准储备液：精密称取赤霉素（含量99.0%）0.1g（0.0001g），用甲醇溶解并定容至 100 mL。此溶液浓度为每毫升相当于 1.00 mg 赤霉素。本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。仪器与设备高效液相色谱仪（DAD）。旋转蒸发仪。组织捣碎机。电动振荡器。凝胶渗透色谱仪（GPC）。分析步骤试样制备称取捣碎后样品 50 g（精确到 0.1 g）于锥形瓶中，加 20 mL 蒸馏水和 100 mL 丙酮，震荡提取30 min100 mL15 min，50 mL1000mL3050mLmL50

17、pH2.50.2。250mL150mL315g250mL3015 mL 环己烷+乙酸乙脂（1：1）(V/V)10 mL，进入13 min，4.7 mL/min6min13 min302 mL0.45 m标准溶液系列的配制0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、5.00mL100mL0g/mL、50g/mL、100g/mL、150g/mL、200g/ mL、500 g/ mL色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18柱：5 m，4.6 mm250 mm（或相当型号色谱柱。流动相：甲醇水（5545） (V/V)pH 3.6)。流速：0.6 mL /min。柱温：40 。检测

18、波长：206 nm。测定5.0 L5.4.3 78。计算8DB11/T 3792006X C 1000F（4）m 1000式中：X（mg/kg；C（g/ F稀释倍数；m（g。精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 %。检测限在本试验条件下，豆芽中赤霉素的定量检测下限为 0.20 mg/kg。图7赤霉素标样色谱图图8豆芽样品中赤霉素色谱图福美双残留量的测定原理豆芽中残留福美双与盐酸-氯化亚锡在密封反应瓶中共热放出二硫化碳，用气相色谱法（FPD）测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。试剂与材料9DB11/T 3792006盐酸（AR）。5mol/L42mL1

19、00mL。氯化亚锡（AR）。二硫化碳（AR）。二氯甲烷（AR）。2 g SnCl22H2O100 mL5 mol/L HCl中。处理水：经纯水制备系统制备的去离子水煮沸数分钟，冷却后待用。（纯度100mL容量瓶中，稀释至刻度。此溶液浓度为每毫升相当于 224 g 福美双。仪器与设备气相色谱仪：带火焰光度检测器（FPD）硫滤光片。气密注射器：100 L。恒温水浴或烘箱。250mL组织捣碎机。Milli-Q分析步骤试样制备称取 20 g（精确到 0.1 g）经组织捣碎机匀浆处理的豆芽样品放入反应瓶中，加处理水至 30 mL，40802 小0.51定。标准曲线的制备分别准确吸取 1 L、5 L、10 L、50 L 福美双标准溶液于反应瓶中，瓶内福美双的量分别为0.224 g、1